保泰松片HPLC含量检测方法的建立

李玲??陈乃江??姜燕

[摘要] 目的 建立保泰松片含量测定的HPLC方法。 方法 采用Phenomenex Luna C18（250 mm × 4.6 mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈-水（磷酸调pH至3.0）（70︰30），流速1.0mL/min，检测波长为239nm，柱温为室温，进样体积为10μL。结果 保泰松在9.65～96.50μg/mL范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为99.6%，RSD为0.7%（n=9），保泰松检测限为2ng。 结论 该方法操作简便、准确、灵敏度高、重复性好，可用于保泰松片的含量测定。

[关键词] 高效液相色谱法；保泰松片；含量测定；方法验证

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2015）17-61-03

HPLC method for content determination of phenylbutazone tablets

LI Ling CHEN Naijiang JIANG Yan

Lianyungang Institute for Drug Control， Lianyungang 222006， China

[Abstract] Objective To develop a method for the determination of phenylbutazone tablets by HPLC. Methods A Phenomenex Luna C18 column（250mm×4.6mm，5μm） was used， and the mobile phase was acetonitrile –water[adjusting pH to 3.0 with phosphoric acid] （70∶30）. The flow rate was 1.0mL/min and the detection wavelength was set at 239nm. The injection volume was 10μL. Results The linear range of phenylbutazone was 9.65-96.50μg/mL （r=0.9999）， the average recovery was 99. 6% and RSD was 0.7%（n=9）， the limit of detection was 2ng. Conclusion The method is simple， accurate with promising sensitivity and reproducibility， and can be used in the determination of phenylbutazone tablets.

[Key words] HPLC； Phenylbutazone tablets； Determination； Method verification

保泰松片为非甾体类抗炎镇痛药，用于治疗类风湿性关节炎、风湿性关节炎及痛风。本品不良反应发生率较高[1-4]，因此有必要建立一种准确、有效、快捷的含量测定方法。保泰松片的质量标准收载于卫生部药品标准二部第5册[5]，原标准中保泰松片的含量测定采用容量分析法。笔者查阅相关文献[6]，有HPLC法测定保泰松片的含量，采用磷酸二氢钾溶液作为缓冲盐，流动相配制复杂，且对色谱柱有损害，会大大缩短色谱柱的使用寿命。本文选择乙腈-水系统作为流动相，建立了高效液相色谱法测定保泰松片的含量，此法避免了使用缓冲盐对色谱柱寿命的影响，且方法简单、专属性强、精密度高、重现性好。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters 2695 高效液相色谱仪、Waters 2996 DAD检测器，Empower 色谱工作站，Sartorius BP-211D 电子天平，PHS-3C型酸度计（上海精密科学仪器有限公司），BRANSON B5500S-MT型超声仪。

1.2 试药

对照品保泰松（批号100481-200601，含量99.9%）购自中国食品药品检定研究院；保泰松片[上海现代哈森（商丘）药业有限公司，H41024168，规格为0.1 g，批号为13082702，1312280，14043002]；乙腈为色谱纯（德国Merck公司），磷酸为分析纯（国药集团化学试剂股份有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

采用Phenomenex Luna C18（250mm ×4.6mm，5μm）色谱柱；流动相为乙腈-水（磷酸调pH至3.0）（70︰30）；流速为1.0mL/min；检测波长为239nm；柱温为室温；进样量为10μL。理论板数按保泰松峰计算不低于4000。

2.2 对照品溶液制备

精密称取保泰松对照品96.60mg，置100mL量瓶中，加甲醇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

精密量取对照品储备液5mL置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备

取样品（批号13082702）20片，除去包衣后，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于保泰松50mg），置100mL量瓶中，加甲醇约70mL，超声处理20min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀；滤过，精密量取续滤液5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 阴性样品溶液的制备

取不含保泰松的空白辅料适量，按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。

2.5 专属性考察

分别取对照品溶液，供试品溶液，阴性样品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图，结果见图1。从色谱图可见，其他成分对保泰松的测定无干扰，保泰松的保留时间约为7.4 min。表明该方法专属性良好。

图1 对照品溶液（A）、样品溶液（B）及阴性溶液（C）的液相色谱图

2.6 线性关系考察

精密量取“2.2”项下的对照品贮备液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0mL，分别置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密吸取10μL注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标，以对照品质量浓度（X，μg/mL）为横坐标，制备标准曲线，得回归方程：Y=29506X+21093，r=0.9999。表明保泰松在9.65～96.50 μg/mL范围内呈良好线性关系。

2.7 稳定性考察

取同一份供试品溶液（批号13082702），分别于0、2、4、6、8、12、16 h进样，记录色谱图。结果保泰松峰面积RSD=0.5%，表明样品在16h内稳定性良好。

2.8 精密度考察

取同一份供试品溶液（批号13082702），连续进样6次，测定保泰松峰面积。结果RSD=0.5%，表明仪器精密度良好。

2.9 重复性考察

取同一批样品（批号13082702）6份，按“2.3”项下方法平行制备成供试品溶液，分别进样。结果RSD=0.7%，表明方法的重复性良好。

2.10 加样回收率试验

取9份已测知含量的样品（批号13082702）细粉，精密称取适量（约相当于保泰松5mg），分别置20mL量瓶中，平均分成3组，分别精密加入对照品储备液4、5、6mL，加甲醇适量，超声处理20min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀；滤过，精密量取续滤液5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。精密吸取10μL，注入液相色谱仪，计算加样回收率。结果本品低、中、高3个浓度的平均回收率（n=9）为99.6%，RSD=0.7%。说明本方法准确度好。加样回收率试验结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n=9）

样品含量

（mg） 加入量

（mg） 测得量

（mg） 回收率

（%） 平均回收率

（%） RSD

（%）

4.883 3.864 8.701 98.81 99.6 0.7

4.870 3.864 8.723 99.72

4.888 3.864 8.707 98.84

4.918 4.830 9.758 100.21

4.901 4.830 9.717 99.71

4.883 4.830 9.743 100.62

4.853 5.796 10.642 99.88

4.879 5.796 10.631 99.24

4.892 5.796 10.658 99.48

2.11 检测限和定量限

精密吸取保泰松对照品溶液适量，加甲醇逐步稀释至色谱图中保泰松峰高分别为噪音的3倍和10倍，测得保泰松的检测限和定量限分别为2ng和5ng。

2.12 样品含量测定

取3批供试品，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，精密量取10μL，按外标法计算含量，3批样品含量分别为97.1%，96.4%，98.6%。

3 讨论

3.1 检测波长的选择

保泰松为吡唑烷二酮类化合物，在不同pH溶液中呈现不同的光谱吸收，在本文的偏酸性流动相色谱条件下，经DAD检测器在190～400nm的波长范围内进行扫描，发现保泰松在239 nm 波长处有最大吸收，因此选择239nm作为检测波长。

3.2 流动相的选择

参考有关文献资料[6-15]及相关书籍[16-18]，考虑流动相操作简单方便，且对色谱柱损害最小原则，分别考察了甲醇-水、乙腈-水系统在不同pH条件下对峰型的影响，结果发现乙腈-水系统优于甲醇-水系统；试验中以磷酸调节水pH分别为3.0、4.0、5.0、6.0、7.0时对峰形的影响，结果表明当乙腈-水（pH 3.0）为70︰30时峰型最好，且基线平稳，出峰时间适中。

3.3 提取条件的选择

保泰松溶于乙醇或乙醚，几乎不溶于水，考虑有机溶剂的性质，选择甲醇作为提取溶剂；同时考察超声时间对提取效果的影响，发现超声20min即能使有效成分溶出。故以此为提取条件。

3.4 耐用性试验

改变色谱条件：乙腈初始浓度（±5%），流动相pH（±0.5），柱温（±5℃），流速（±0.1mL/min），根据主峰理论板数和拖尾因子进行考察试验条件的耐用性。经试验，以上变动均能满足本试验系统适用性要求，表明该方法耐用性良好。

本研究建立HPLC法测定保泰松片的含量，具有操作简便，专属性强，结果准确，重复性好的优点，可以避免容量分析法的固有缺点，可作为保泰松片的定量分析方法。

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（收稿日期：2015-06-03）