兔大肠杆菌耐药性观察

陈升平（四川省自贡市大安区三多寨镇畜牧兽医站 643000）

兔大肠杆菌耐药性观察

陈升平（四川省自贡市大安区三多寨镇畜牧兽医站 643000）

兔大肠杆菌病又叫黏液性肠炎，是由致病性埃希氏大肠杆菌及其毒素引起的一种暴发性、死亡率很高的仔幼兔肠道传染病。大肠杆菌是引起断奶前后家兔腹泻的主要病原之一，主要侵害20～70日龄的仔兔和幼兔，成年兔很少发病。其致病机理是大肠杆菌在肠道内容物中大量增殖，并附着在肠黏膜上，导致肠壁渗透性增强，患兔腹泻脱水。当大肠杆菌侵入血液时，即可分布于全身各个器官，出现败血症。近年来，随着抗菌素的广泛应用，耐药性大肠杆菌菌株日益增多，给预防和治疗大肠杆菌病带来了诸多困难。目前，在防治大肠杆菌病上主要采取的措施是应用大肠杆菌灭活菌苗免疫，通过药敏试验筛选大肠杆菌敏感的抗菌素进行治疗。因各个兔场大肠杆菌的血清型都不一致，用药情况也千差万别，笔者仅大安区的6个兔场（养殖户）进行了大肠杆菌的耐药性调查，以期对这些兔场更好地控制大肠杆菌病起到一定的指导作用。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 病料来源

病料采大安区的6个兔（养殖户）场疑似大肠杆菌病的病死兔，无菌采集肠道胶冻样粪便。

1.1.2 培养基

营养琼脂；麦康凯；普通肉汤。

1.1.3 微量生化发酵管

硫化氢、苯丙氨酸、尿素、侧金盏花醇、山梨醇、丙二酸盐、赖氨酸、鸟氨酸、靛基质（蛋白胨水）、V-P、枸橼酸盐、葡萄糖（产气）、蔗糖、乳糖、甘露醇。

1.1.4 药敏纸片

丁胺卡那霉素、先锋Ⅴ、先锋Ⅵ、氟苯尼考、四环素、卡那霉素均为30ug/片，氨苄青霉素、庆大霉素均为10ug/片，复方磺胺为300ug/片，阿奇霉素为15ug/片。

1.2 方法

1.2.1 细菌分离培养

无菌采集死亡兔肠道胶冻样粪便，接种营养肉汤，37℃培养24h；将培养物接种麦康凯培养基，37℃培养24h；选择表面光滑、中等大小的单个红色菌落，接种营养肉汤，37℃培养24h，备用。

1.2.2 染色镜检

将纯化的肉汤培养物涂片，革兰氏染色，镜检。

1.2.3 生化试验

按文献的方法进行，将对小白鼠有致病性的菌株肉汤纯培养物分别接种于微量生化管，37℃培养24h，观察记录结果。

1.2.4 药敏试验

将分离到的致病菌株肉汤纯培养物分别接种营养琼脂平板，贴上所选择的药敏纸片，37℃培养24h，测量抑菌圈直径。

2 结果

2.1 分离培养

病料编号为：DC1、 DC2、 DC3、 DC4、 DC5、 DC6。在肉汤培养基中培养24h后，肉汤呈均匀浑浊；在麦康凯琼脂平板上形成红色、中等大小、表面光滑、湿润的单个菌落。

2.2 染色镜检

分离菌均为革兰氏阴性、两端钝圆的短小杆菌，呈单个或多个、散在排列。

2.3 生化试验

结果见表1。从表1可以看出，6株菌均能发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇并产酸产气，不能产生硫化氢，不分解尿素和苯丙氨酸，能利用赖氨酸；VP和枸橼酸盐利用试验均为阴性。DC5菌株能利用侧金盏花醇，其它菌株不能；DC2和DC5菌株不能利用山梨醇，其它菌株都能；DC1菌株丙二酸盐试验为阳性，其它菌株试验为阴性；DC4和DC5菌株均能利用鸟氨酸，靛基质试验为阴性，其它菌株不能利用鸟氨酸，靛基质试验为阳性；DC1和DC6菌株能分解蔗糖，其它菌株不能。

表1 生化试验结果

2.4 药敏试验

由表2可见，多数菌株对丁胺卡那霉素、阿奇霉素敏感，对先锋Ⅳ、先锋Ⅴ、庆大霉素、氟苯尼考部分敏感，对氨苄青霉素、四环素、复方磺胺、卡那霉素低敏或不敏感。

表2 分离菌株药敏试验结果（抑菌圈直径mm）

3 讨论与分析

（1）本试验确诊6个兔场的发病兔均为致病性大肠杆菌引起。分离的6株菌均能发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇并产酸产气，不能产生硫化氢，不分解尿素和苯丙氨酸，能利用赖氨酸，VP和枸橼酸盐利用试验均为阴性，符合大肠杆菌的特征。但这些菌株对蔗糖、侧金盏花醇、山梨醇、丙二酸盐、鸟氨酸和靛基质试验结果不完全一致，这可能是不同血清型菌株的生化特性不完全相同。由于我们没有预购大肠杆菌标准血清，因此本试验尚未对分离的6株大肠杆菌进行血清型鉴定，将在后续试验中进行。

（2）从药敏试验结果可以看出，分离菌株均对丁胺卡那霉素、阿奇霉素高度敏感，对氨苄青霉素、先锋Ⅳ、先锋Ⅴ、氟苯尼考、庆大霉素、复方磺胺、四环素、卡那霉素都有不同程度的耐药性。可见，不同兔场的分离菌株对各种药物的敏感性不同，耐药性极强，极难治疗。我们建议对兔大肠杆菌病选用药物治疗时，最好先进行药敏试验，选取敏感的药物及时治疗，快速控制病情，减少损失。