4种杀菌剂对红花芍药褐斑病的室内毒力

钱永生，蔡 苏，马婉琴，楼钰函，倪炎栋，吴剑丙

(杭州师范大学,生命与环境科学学院,浙江杭州 310036)

4种杀菌剂对红花芍药褐斑病的室内毒力

钱永生，蔡 苏，马婉琴，楼钰函，倪炎栋，吴剑丙*

(杭州师范大学,生命与环境科学学院,浙江杭州 310036)

红花芍药(Paeonia lactiflora‘Hong hua’)褐斑病是其生产上较为常见的病害之一。在实验室前期研究工作中发现,总状毛霉(Mucor racemosus)是引起红花芍药褐斑病的重要致病菌。本试验测定总状毛霉对4种常用杀菌剂的药物敏感性,结果显示,戊唑醇、腐霉利、异菌脲和多菌灵对总状毛霉的抑制中浓度(EC50值)分别为12.01,168.58,691.02,6 249.66 μg·mL-1。由此可见,戊唑醇对由总状毛霉引起的红花芍药褐斑病防治效果最佳。

红花芍药;褐斑病;总状毛霉;药敏试验

文献著录格式:钱永生,蔡苏,马婉琴,等.4种杀菌剂对红花芍药褐斑病的室内毒力[J].浙江农业科学,2015,56(9):1454-1456.

DOI 10.16178/j.issn.0528-9017.20150937

芍药(Paeonia lactiflora)为芍药科芍药属多年生宿根草本花卉,花梗挺直,花色丰富,花姿典雅,是我国传统名花,具有3 900年的栽培历史,在庭院、景区栽培和盆栽等方面被广泛运用,与牡丹并称为“花王”与“花相”,在国外也有“花中皇后”的美称。此外,芍药是我国传统的中草药,是浙江省道地药材“浙八味”之一,主要用于治疗炎症性的疾病,如关节炎、肝炎等[1-3]。近年来其中草药品质逐渐被人们认识,种植面积不断扩大[4]。然而在栽培种植过程中,芍药的各种病害问题日渐突出,如轮纹病引起芍药植株叶片枯黄;白粉病使整个植株布满白粉状物质,严重影响观赏价值;灰霉病危害芍药的叶、花和茎,造成花蕾枯萎、叶片焦枯等;每年8、9月高温多雨季节,芍药炭疽病发病严重,引起黑褐色病斑,天气潮湿时,病斑表面产生粉红色孢子堆[5-7]。化学农药是防治植物病害最直接有效的方法。但农药的不合理使用造成环境污染、药品残留超标及病菌耐药等问题,对药用植物的安全生产造成重大隐患。因此,提高中药材的安全卫生质量,合理筛选杀菌剂,以达到最佳药理品质,是当前药用植物病害防治研究工作的重点。弄清化学农药对病原菌的杀菌效果,可有效指导合理用药,科学用药[8]。

本试验通过测定浙江省磐安地区红花芍药褐斑病病原菌——总状毛霉对4种杀菌剂的药物敏感性,确定常用化学杀菌剂最佳杀菌效果,为芍药真菌病害合理用药提供理论依据及科学指导。

1 材料与方法

1.1 供试材料

供试菌株红花芍药褐斑病病株于2013年6月采集自浙江省磐安地区,病原菌经鉴定为总状毛霉,并保存在浙江省药用植物种质改良与质量控制技术重点实验室。

供试药剂有80%多菌灵可湿性粉剂(江苏省太仓市农药厂有限公司),测试浓度为0,10,20, 160,320,640,1 280,2 560,10 240 μg·mL-1; 500 g·L-1异菌脲悬浮剂(拜耳作物科学(中国)有限公司),测试浓度为0,78,155,310,620, 1 250,2 500,5 000,10 000,20 000 μg·mL-1;盐城利民农化有限公司生产的91.5%戊唑醇原药,测试浓度为0,1.25,2.5,5,10,20,40 μg· mL-1;50%腐霉利可湿性粉剂(日本住友化学工业株式会社),测试浓度为0,1,2,4,8,16, 32,64,128,256,1 024 μg·mL-1。

1.2 处理设计

试验设多菌灵、异菌脲、戊唑醇、腐霉利等4种杀菌剂不同处理浓度,杀菌剂按不同处理浓度加入新的PDA平板,以未加的PDA平板作对照,同一条件下接种直径为0.5 cm的总状毛霉病原菌,并于25℃恒温黑暗倒置培养,重复6个,至对照病原菌直径生长距平板边缘0.5 cm处时停止培养。采用十字交叉法进行测量统计及拍照记录。

根据药物筛选结果,以设定的药剂浓度为横坐标,以病原菌生长相对直径作纵坐标,采用SigmaPlot软件绘制药物敏感浓度回归曲线,求出各药剂对病原菌的毒力回归方程、抑制中浓度(EC50值)及相关系数(R2)。

2 结果与分析

2.1 药剂敏感性

测定红花芍药褐斑病致病菌总状毛霉对4种杀菌剂敏感性。由图1可见,4种杀菌剂对总状毛霉均有抑制作用。其中,戊唑醇效果最佳,在40 μg· mL-1时真菌基本无法生长,而异菌脲和多菌灵在极高浓度下仍不能完全抑制真菌生长。此外,预实验所用的腐霉利浓度128 μg·mL-1的抑菌效果不佳。

图1 总状毛霉对异菌脲、腐霉利、多菌灵和戊唑醇的敏感性

2.2 EC50值

根据预实验结果,设定杀菌剂浓度梯度,测定总状毛霉对4种杀菌剂的EC50值,计算菌丝生长抑制率。

抑制率/%=(对照处理菌落直径-杀菌剂处理菌落直径)/(对照处理菌落直径-0.5)×100。

由表1可见,多菌灵浓度为2 560 μg·mL-1时,对总状毛霉的抑制率仅为35.47%,与使用异菌脲310 μg·mL-1时抑制效果相当,而戊唑醇10 μg·mL-1效果较前2种杀菌剂好。

表1 4种杀菌剂对红花芍药致病菌（总状毛霉）菌丝生长的抑制效果

进一步计算4种杀菌剂对总状毛霉的毒力回归方程、抑制中浓度(EC50值)及相关系数(R2) (表2)。

表2 4种杀菌剂对红花芍药致病菌总状毛霉的EC50测定

其中,多菌灵的EC50值最大,为6 249.66 μg· mL-1,戊唑醇EC50值最小,仅为12.01 μg·mL-1,其余异菌脲EC50值为691.02 μg·mL-1,腐霉利EC50值为168.59 μg·mL-1。这一结果与平板试验相一致,戊唑醇对总状毛霉的抑菌效果最佳。

3 小结与讨论

近年来,随着我国中药材植物种植面积的不断扩大和自然生态环境的不断改变,造成药用植物病害问题日渐突出,对药材产量和质量产生很大威胁[9]。据有关资料统计,一般病害可造成药用植物产量减少20%～30%,严重的高达50%,甚至绝收[10]。药用植物的真菌病害屡见报道张争等[11]报道可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)可引起白木香枝枯病;赵云青等[12]发现罗氏小核菌(Sclerotium rolfsii)可引起金线莲白绢病;罗有强等[13]曾报道胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)可引起山麦冬叶枯病等。目前,对于中药材农药残留检测已引起生产者和研究人员的重视,吴加伦等[14]在白芍中检测发现有机氯残留。因此,如何筛选合适的杀菌剂,达到最佳防治效果及合理用药,对于药用植物栽培管理具有重要意义。本试验采用生长速率法测定4种杀菌剂对红花芍药褐斑病病原菌总状毛霉的室内毒力测定,结果显示,多菌灵和异菌脲的防效较差,用药浓度高,有残留及污染的风险。戊唑醇杀菌效果最佳,可用于浙江地区红花芍药及其他药用植物病害治理。此外,本研究仅提供了室内药物敏感性分析,田间药效还需进一步验证,以期为解决浙江地区红花芍药及其他药用植物存在的病害提供合理的防治策略。

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(责任编辑：张瑞麟)

S 482.2

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0528-9017(2015)09-1454-03

2015-04-24

浙江省教育厅项目(Y201431430);浙江省自然科学基金(LY14C010003);浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划(2015R423048);杭州市科技发展计划项目(20130432B07);浙江省药用植物种质改良与质量控制技术重点实验室开放项目(201308,201313)

钱永生(1980-),男,浙江萧山人,实验师,主要从事植物真菌病害研究及管理工作。E-mail:qianyongsheng@163.com。

吴剑丙。E-mail:jianbingwu@zju.edu.cn。