盆栽铁线莲Crystal Fountain组织培养技术

朱宏芬，施永泰，倪建刚，黄 坚

(宁波市农业科学研究院,浙江宁波 315040)

盆栽铁线莲Crystal Fountain组织培养技术

朱宏芬，施永泰，倪建刚，黄 坚

(宁波市农业科学研究院,浙江宁波 315040)

以铁线莲Crystal Fountain嫩茎为外植体,在添加各种激素的培养基上进行诱导、增殖和生根培养,结果表明,MS+0.2 mg·L-1TDZ+0.01 mg·L-1NAA为最佳增殖培养基,增殖系数达到3.3,芽健壮,生长快;1/2MS+0.5 mg·L-1IBA为最佳生根培养基,生根率达82%。

盆栽铁线莲;水晶喷泉;组织培养

文献著录格式:朱宏芬,施永泰,倪建刚,等.盆栽铁线莲Crystal Fountain组织培养技术[J].浙江农业科学,2015,56(9):1440-1442.

DOI 10.16178/j.issn.0528-9017.20150930

铁线莲属植物(Clematis L.)隶属于毛茛科(Ranunculaceae),是一种观赏价值高、具有多种抗逆性的藤本植物,分布于世界各地,约300余种,我国各地均有分布,有140多种[1]。由于其花形新颖别致、花朵色泽多变、花期较长,在欧美庭园应用广泛,尤其在垂直绿化中具有相当重要的作用,被誉为藤本皇后。铁线莲属水晶喷泉(Crystal Fountain)为日本园艺品种,重瓣大花,淡蓝色,奶黄色雄蕊(瓣化)如同涌出的喷泉,花期长且丰花,是较合适的盆栽品种,具有极高的观赏性和开发前景。但是Crystal Fountain不能进行有性繁殖,组织培养技术能有效解决该问题。张启香等[2-3]分别以不同品种铁线莲叶片、茎尖和茎段为外植体进行培养,对愈伤组织诱导、继代增殖培养和生根培养进行了研究,建立了比较完整的快繁体系,获得了再生植株,大大提高了该属植物的繁殖率。本试验在前人研究的基础上,以Crystal Fountain带芽茎段为外植体,研究不同激素对芽诱导增殖和生根的影响,为利用组织培养快速繁殖该品种提供技术参考。

1 材料和方法

1.1 材料

以宁波市农业高新技术试验园区的Crystal Fountain嫩茎为外植体材料。

1.2 方法

外植体灭菌。将材料用自来水冲洗10 min,在超净工作台上,用75%酒精浸泡5 s,0.1%升汞消毒6～8 min,无菌水冲洗3遍;然后把材料切成1.0～1.5 cm长、带1个腋芽的茎段,接种到启动培养基中。

启动培养基选用MS+0.5 mg·L-16-BA+ 30 g·L-1蔗糖+6.5 g·L-1琼脂,pH调至5.8～6.0。培养条件为温度(25±2)℃,光照强度0.15万～0.2万lx,每天光照时间12 h。

诱导与增殖培养。待启动培养基中培养的外植体侧芽长至2～3 cm时,将其切下,剪成单芽茎段,转接于添加不同激素配比的MS培养基上,培养条件同上,培养30 d后观察不同培养基中芽的生长情况和增殖系数。共设22个处理,每处理重复5瓶,每瓶接种1个带芽茎段。

生根培养。以1/2MS为基本培养基,将2～3 cm长的芽接种到添加不同激素的生根培养基上,培养条件同上,培养25 d时观察不定根生长情况。共设6个处理,每处理重复5瓶,每瓶接种10株。

1.3 数据处理

增殖系数=增殖芽数/接种芽总数×100,生根率/%=生根苗数/接种苗数×100。

2 结果与分析

2.1 启动培养

外植体在启动培养基中培养7 d左右芽开始萌动,10 d后开始抽出侧芽,30 d后侧芽可长至2～3 cm,芽较健壮,绿色。

2.2 激素对增殖培养的影响

表1为不同种类及浓度的细胞分裂素(6-BA, KT和TDZ)和NAA组合对Crystal Fountain增殖的影响。3种细胞分裂素与NAA组合均可促进增殖,细胞分裂素KT的增殖效果最差,增殖系数最高为2.0,苗长势一般,生长缓慢,叶片有枯黄现象。6-BA的增殖效果好于KT,0.01 mg·L-1NAA组合增值效果好于0.05 mg·L-1NAA组合,当NAA浓度为0.01 mg·L-1时,增殖系数基本与6-BA浓度成正比;当NAA浓度为0.05 mg·L-1时,增殖系数随6-BA浓度的递增呈现先上升后下降的趋势,且6-BA浓度大于1.00 mg·L-1时,基本以基部产生丛生芽为主。TDZ的增殖效果最好,且叶片无枯黄现象,低浓度TDZ更有利于苗的生长和增殖,表现为芽健壮,生长快,节间短粗,叶色深绿,长势好,有效芽多;当TDZ浓度达到0.50 mg· L-1时,增殖系数最高,但苗生长不良,节间缩短,畸形,玻璃化严重。综合分析增殖系数和芽长势情况,结果表明,MS+0.20 mg·L-1TDZ+ 0.01 mg·L-1NAA为Crystal Fountain组培最佳增殖培养基。

表1 不同种类及浓度细胞分裂素和NAA处理对Crystal Fountain增殖的影响

2.3 不同NAA和IBA浓度对生根培养的影响

在生根培养基中,10 d后组培苗基部出现白色根原基,12 d可见白色根系出现,25 d时根系粗壮,生根率和平均根数如表2所示,不同浓度NAA和IBA都能诱导芽生根,IBA处理的生根效果好于NAA,其中1/2MS+0.5 mg· L-1IBA培养基的生根率最高,达82%,且生根条数也最多,平均根数为3.8条,根较粗壮,白色。随着NAA浓度的升高,生根率先上升后下降,当NAA浓度达到1.5 mg·L-1时,基部产生大量愈伤,生根率明显下降,根系细弱,褐色,长势差。

表2 NAA和IBA处理对Crystal Fountain生根的影响

3 小结与讨论

TDZ具有生长素和细胞分裂素的双重功能,在苹果、蓝莓、树莓等植物离体培养中,通过愈伤或器官发生途径诱导芽的发生和增殖[3-4]。在铁线莲中以茎尖为外植体进行胚性愈伤组织及体细胞胚的诱导[5-6]。本试验以铁线莲Crystal Fountain茎段为外植体,在培养基中添加3种不同水平的激素,通过比较不同培养基中Crystal Fountain芽的增殖情况发现,低浓度的TDZ对铁线莲Crystal Fountain侧芽和不定芽的萌发及诱导有促进作用,相比6-BA、KT,其增殖苗更加健壮。0.2 mg·L-1TDZ的诱导效果最好,植株最健壮;当TDZ浓度大于0.5 mg· L-1时,会导致植株畸形,玻璃化严重。

本研究结果表明,不同生长素类物质对铁线莲Crystal Fountain不定芽生根的诱导效果不同,IBA对不定芽的生根诱导效果好于NAA,0.5 mg·L-1IBA的生根率最高,生根数最多,且根系粗壮。

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京:科学出版社,1980.

[2] 张启香,方炎明,吕梅,等.铁线莲‘Multi-Blue’不定芽及体细胞胚发生的初步研究[J].园艺学报,2007,34 (2):465-468.

[3] 徐晓峰,黄学林.TDZ:一种有效的植物生长调节剂[J].植物学报,2003,20(2):227-237.

[4] 张宗勤,董丽芬,张波,等.TDZ对树莓微繁殖的影响[J].经济林研究,2004,22(4):50-52.

[5] 张启香,胡恒康,方炎明.铁线莲‘Multi-Blue’体细胞胚诱导和植株再生[J].南京林业大学学报:自然科学版, 2010,34(6):18-22.

[6] 王磊,史俊,周余华,等.铁线莲‘Utopia’无菌外植体的建立[J].北方园艺,2010(5):156-157.

(责任编辑：侯春晓)

S 687.3

B

0528-9017(2015)09-1440-02

2015-05-28

宁波市科技局农业攻关项目(2014C10066)

朱宏芬(1974-),女,浙江宁波人,农艺师,主要从事植物组培及栽培技术研究与推广工作。E-mail:nbnkyzhu @163.com。