百色市马传染性贫血监测及扑灭吸血昆虫试验报告

黄百花 覃 勇 蒙振亩 陆春礼 赵 聪 卢少坤

（广西百色市动物疫病预防控制中心，广西 百色 533000）

百色市马传染性贫血监测及扑灭吸血昆虫试验报告

黄百花 覃 勇 蒙振亩 陆春礼 赵 聪 卢少坤

（广西百色市动物疫病预防控制中心，广西 百色 533000）

为了消灭百色市马传贫疫情并巩固防治成果，1990年至2014年先后使用马传贫琼脂凝胶免疫扩散试验配合斑点单抗ELISA和抗体快速检测卡等对采自辖区9844份马属动物血清进行检测，结果全部为阴性；为了探明该病的传播媒介蠓、蚊、刺蝇及虻等吸血昆虫带毒情况，2011年至2014年，使用RT-PCR法对采自与疫区云南省交界村屯370份吸血昆虫样品进行检测，结果全部为阴性；开展使用高效氯氰菊酯、溴氯氰菊酯和双硫磷杀虫颗粒等三种药物对吸血昆虫灭杀效果试验，结果显示高效氯氰菊酯的灭虫效果最好，双硫磷杀虫颗粒投药使用比较方便简单，试验后大力推广使用，有效地控制马传贫通过吸血昆虫的传播。百色市通过广泛开展马传贫监测和传播媒介的控制，实现了巩固马传贫防控成果。

马传染性贫血；监测；消灭；传播媒介；控制

马传染性贫血（Equine Infectious Anemia, EIA,简称马传贫），是由反转录病毒科慢病毒属马传贫病毒引起的马属动物传染病，属于二类动物疫病。百色市田阳县于1987年检测出马传贫阳性血清，为此，百色市被划成马传贫疫区市，田阳县被列为广西防治马传贫的重点县之一。为了控制和消灭马传贫疫情，通过广泛开展监测、流调、检疫、监管、消毒等措施，2005年全市通过自治区消灭马传贫考核验收。由于与百色市毗邻的云南省还存在马传贫疫情，2011～2014年我市又加大对与云南省毗邻的 7个县（区）和原疫点田阳县的马传贫防控力度，至今没有发生新疫情，有效地巩固前阶段的防控成果。

1 持续开展监测净化，巩固防控成果

1990～2004年使用马传贫琼脂凝胶免疫扩散试验（AGID）检测马属动物血清样品4218份，结果全部为阴性。2005～2010年为了区分强毒感染马和疫苗免疫马，采用AGID法检测1518份马属动物血清，同时随机抽出480份血清样品使用斑点单抗ELISA（DB）进行检测，结果全部为阴性。2011～2014年使用AGID法检测4108份马属动物血清样品，结果全部呈阴性，同时对 405匹新引种及外出比赛表演的马匹使用抗体快速检测卡（ICLF）加强检测，结果全部呈阴性（见表1）。

表1　1990～2014年使用不同方法检测马属动物血清样品马传贫抗体结果统计表

2 探明传播媒介带毒情况，做好防控对策

为了探明马传贫传播媒介带毒情况，2011年至2014年，采自与疫区云南省交界村屯蠓（蚊）样品分别为85份、88份、95份、102份，每份样品包括蠓、蚊各20只，4年共计采集370份，使用RT-PCR进行检测，结果全部为阴性。

2.1采样方法

使用吸入式捕蚊器在与云南省交界村屯饲养马属动物区域采集蠓、蚊等相关昆虫，为了确保样品质量，要求当晚采样第二天早上立即将储蚊盒放入-20℃的冰箱内，20分钟后取出，利用解剖显微分出蠓和蚊，并按蠓、蚊各20只作为1份样品放入自封袋中-20℃保存。

2.2样品处理

将样品置于研磨器中，加入 1.5ml生理盐水后研磨成匀浆，将匀浆转入1.5ml干净的EP管中，用离心机10000rpm离心2min，取上清液备检。

2.3RNA提取

按照RNA提取试剂盒说明要求提取马传贫RNA，并置于-20℃冰箱保存备用。

2.4试剂配制及反应体系

将提取好的RNA、阳性对照、阴性对照各取4μl，加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。见表2。

表2　RT-PCR反应体系(25μl体系)

2.5RT-PCR扩增

将待反应管置于PCR扩增仪的反应槽内，设置相应循环参数。见表3。

表3　RT-PCR循环参数

2.6结果判定

制作2%琼脂凝胶，将扩增产物10μl置于凝胶孔中进行电泳。电泳结果显示，EIAV阳性对照出现313bp条带，阴性不出现条带，试验结果成立，其中1-6份样品皆为阴性。如图1所示。

图1　RT-PCR结果

3 药物杀灭蠓、蚊等吸血昆虫田间试验

为了更有效控制蠓、蚊等吸血昆虫对农村散养动物的危害，减少马传贫风险区域传播疫情机率，通过使用 3种不同灭蚊药物在农村进行田间试验，得出使用效果比较好使用方法较为简单的药物并推广应用。

3.1材料与方法

3.1.1材料

购买足量的灭蚊药10%高效氯氟氰菊酯、5%氯氰菊酯、1%双硫磷杀虫颗粒和吸入式捕蚊器4个。

3.1.2方法

（1）目标群。选择平果县旧城镇康马村那座屯、仙峨屯、作下屯和古城屯等4自然屯作为试验点，这4个自然屯每屯约有居民10户，并且相对独立，各种环境条件、饲养动物种类和规模以及人口数基本一样，试验对象屯与屯之间距离约1km。

（2）试验分组。以那座屯为对照组，试验期间与其他试验组同时使用捕蚊器采集蠓、蚊等昆虫；以仙峨屯为试验组A，按10%高效氯氟氰菊酯使用说明书进行稀释，对全屯畜禽栏、露天地面、人居房间地板、开放式粪坑、死水坑等表面按150ml/m2进行喷洒，15d后再以同样方法用药；以作下屯为试验组B，按5%氯氰菊酯使用说明书进行稀释，对全屯畜禽栏、露天地面、人居房间地板、开放式粪坑、死水坑等表面按150ml/m2进行喷洒，15d后再以同样方法用药；以古城屯为试验组C，对全屯开放式粪坑、死水坑等使用1%双硫磷杀虫颗粒按15g/m3投药，投药后使用竹钯搅拌以便药物溶于水中，15d后再以同样方法用药。

（3）采样方法。将捕蚊器固定在各试验组马栏内距地面药1m，分别于试验前1d、第一次投药第1d、5d、9d、14d、第二次投药第1d、5d、9d、14d、20d晚上8时开启捕蚊器捕捉蠓、蚊等昆虫，第二天早上 8时关闭捕蚊器电源，收集捕捉到的昆虫样品置于自封袋中并冰冻保存。

3.2统计分析

应用Microsoft Excel软件对各组蠓、蚊下降率进行统计分析。

3.3试验结果

从试验结果来看，单独使用捕蚊器在固定的区域内对蠓、蚊具有一定的杀灭作用，但效果不是很理想；使用高效氯氟氰菊酯喷洒灭蠓、蚊效果最好；使用双硫磷杀虫颗粒对开放式粪坑、死水坑等用药后，显示蠓、蚊数持续下降，这也说明在广大农村开放式粪坑、死水坑等是滋生蠓、蚊的主要地方。见表4、图2。

表4　使用不同的药物对蠓、蚊杀灭效果统计表

图2　使用不同的药物后蠓、蚊下降率

4 小结与体会

（1）通过使用马传贫琼脂凝胶免疫扩散试验（AGID）、斑点单抗ELISA（DB）及免疫试纸快速检测法（ICLF）等多种方法对辖区马属动物进行监测，确保了检验结果的准确性、时效性和实用性。2005-2010年，使用AGID与 DB相结合的监测方法，可以很好地区分自然病毒感染抗体和疫苗免疫抗体。ICLF法用于引种、劳役输出或外出演出的马属动物检测，检测时间快、操作方法简易，实用性强。自 1990年以来，百色市马传贫监测面广量多，检测结果全部呈阴性，表明全市马传贫防控效果相当显著。

（2）为了进一步了解蠓、蚊等马传贫传播媒介昆虫带毒情况，对与疫区云南省交界村屯蠓、蚊进行采样检测，结果全部为阴性。对马传贫风险区域蠓、蚊等马传贫传播媒介带毒情况进行监测目前国内尚未见报道，通过全方位开展监测，对评估消灭马传贫疫情工作提供强有力的科学依据。

（3）通过使用高效氯氰菊酯、溴氯氰菊酯和双硫磷杀虫颗粒等三种药物对吸血昆虫灭杀效果试验，结果显示高效氯氰菊酯的灭虫效果最好，双硫磷杀虫颗粒投药使用比较方便简单。根据试验结果，结合全市灭蚊活动，笔者使用高效氯氰菊酯和双硫磷杀虫颗粒等药物在与马传贫疫区云南省毗邻的2218个自然屯开展灭蠓、蚊工作，取得了明显效果，有效地控制风险区域马传贫通过吸血昆虫的传播。

百色市作为广西饲养马属动物最多的地级市，常年饲养马属动物有20万匹左右，做好马传贫疫情的防控对广西乃至全国巩固消灭马传贫成果具有重要的现实意义。

The test report of monitoring equine infectious anemia and eliminate the blood-sucking insects in Baise

In order to eliminate the epidemic of Equine infectious anemia and strengthen the results of prevention and control in baise.From 1990 to 2014, successively using AGID test, single spots of ELISA and immune strip rapid test monitoring the 9844 copies of Equine infectious anemia antibodies, the results are all negative;To find out the media of the disease as Ceratopogonidae , Mosquito that blood-sucking insects with virus, from 2011 to 2014, RT-PCR method were used to detect the 370 samples of blood sucking insects in the boundary village with Yunnan province，all the results are negative;To carried out using three drugs of efficient cypermethrin, bromine cypermethrin and double sulphur phosphorous pesticide particles for blood sucking insects killing test, the results show that the efficient cypermethrin disinsection effect is best, the double sulfur phosphorus pesticide particles drug delivery using more convenient and simple, vigorously promote the use after test, effectively control the spread of the Equine infectious anemia by blood-sucking insects in Baise .To through a series of monitoring and control measures for Equine infectious anemia in 25 years, the test results are negative, have reached the target of eliminating Equine infectious anemia.

Equine infectious anemia; monitor; eliminate; media;control

S85

A

1008-1151(2015)04-0116-03

2015-03-15

百色市科学研究与技术开发项目“百色市消灭马传染性贫血综合技术集成与应用”（百科计20111801）。

黄百花（1984-），女，广西百色人，广西百色市动物疫病预防控制中心兽医师，硕士研究生，从事动物疫病防控工作。