上皮性卵巢癌组织中ASAP1蛋白的表达及其临床意义

刘亚南，高爱华，朱维培

（苏州大学附属第二医院妇产科，江苏苏州215000）

上皮性卵巢癌组织中ASAP1蛋白的表达及其临床意义

刘亚南，高爱华，朱维培

（苏州大学附属第二医院妇产科，江苏苏州215000）

目的：探讨ASAP1蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义。方法：采用免疫组织化学法检测73例上皮性卵巢癌患者卵巢癌组织石蜡切片中ASAP1蛋白的表达。采用χ2检验分析ASAP1表达与卵巢癌患者病理资料间的关系。并采用Kap1an-Meier进行单因素生存分析，比较不同ASAP1蛋白表达水平的卵巢癌患者的预后。结果：ASAP1蛋白表达与腹腔积液量相关（P=0.005）；单因素生存分析显示，ASAP1蛋白高表达组与低表达组总生存时间、无复发生存时间比较，差异具有统计学意义（P=0.005，0.001）。结论：ASAP1蛋白高表达是上皮性卵巢癌患者预后不良的高危因素。

ASAP1；上皮性卵巢癌；免疫组化

上皮性卵巢癌是常见的妇科肿瘤，2008年全球约有225 500卵巢癌新增病例，死亡约140 200例［1］。卵巢癌患者的生存率与肿瘤细胞的扩散及转移相关。ASAP1［a phosphatidy1inosito1 4，5-bisphosphate-dependent Arf GTPase-activating protein（Arf GAP）］是磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸依赖Arf（ADP糖基化因子）的GTP激活蛋白，与细胞的黏附和树突状伪足形成有关［2］。文献报道，近来有ASAP1的表达与前列腺癌及宫颈癌的转移有关［3-4］。目前国内暂无ASAP1蛋白在卵巢癌转移方面的相关研究报道，因此，本研究通过免疫组化法检测卵巢癌组织中ASAP1的表达，分析ASAP1与上皮性卵巢癌患者临床指标和预后的关系，初步探讨ASAP1在上皮性卵巢癌发展以及预后判断中的作用。

1 资料与方法

1.1 标本来源

收集2004年1月至2008年12月在我院行全面分期手术或肿瘤细胞减灭术、经病理证实具有完整病历和随访资料的上皮性卵巢癌患者卵巢癌组织蜡块73例，患者术前未接受化疗。患者年龄22～75岁，平均50.75岁；病理类型：浆液性癌44例，非浆液性癌29例。按照国际妇产科联盟（FIGO）2000年的手术病理分期标准，Ⅰ期16例，Ⅱ期5例，Ⅲ期45例，Ⅳ期7例；病理分化程度：低分化26例，高分化47例。本实验所采用的石蜡标本均取得患者的知情同意。以因子宫肌瘤行子宫加附件切除患者的正常卵巢组织标本为对照。

1.2 免疫组化检测ASAP1蛋白表达

采用SP法，所有标本经10％甲醛固定，石蜡包埋，选择具有代表性的组织蜡块进行4 μm连续切片，常规脱蜡，抗原修复，加1∶100 ASAP1一抗小鼠抗人单抗（美国Abcam公司）4℃过夜，二抗1∶200生物素化的抗小鼠抗体（丹麦Dako公司）室温孵育30 min，二氨基联苯胺（DAB）显色，苏木精复染，中性树胶封固。PBS代替一抗为阴性对照。

1.3 免疫组织化学结果判断

由2位病理医师进行独立双盲评分，每张切片在400倍镜下随机选择5个肿瘤细胞区，每个区域观察100个肿瘤细胞。光镜下ASAP1阳性表达主要分布于细胞核及细胞质，以出现棕色或棕褐色颗粒作为阳性结果，将所选取区域中细胞的染色范围和染色强度参考文献［5］标准进行半定量化，①染色强度的评分标准：未染色为0分，淡黄色为1分，棕色为2分，棕褐色为3分。②染色范围计分以阳性细胞数占总细胞数的比例计算：阳性细胞率＜5％计0分，6％～10％计1分，11％～50％计2分，51％～80％计3分，≥80％计4分。染色结果总分为染色强度与染色范围计分的乘积，0～4分为低表达，6～12分为高表达。

1.4 随访

对73例卵巢癌患者进行随访，随访截止时间为2013年6月，随访时间为2.6～107个月（中位随访时间为29.2个月）。

1.5 统计学方法

应用SPSS 15.0软件进行统计学分析，采用χ2检验分析ASAP1表达与卵巢癌患者病理资料间的关系。采用Kap1an-Meier和Log-rank检验进行单因素生存分析，比较ASAP1蛋白高表达和低表达卵巢癌患者的预后。

2 结果

2.1 ASAP1蛋白在卵巢癌组织中的表达

ASAP1蛋白的表达主要位于细胞核与细胞质，呈棕色，见图1。根据ASAP1蛋白的表达将卵巢癌患者分为2组：ASAP1蛋白低表达组37例，ASAP1蛋白高表达组36例。

图1 ASAP1蛋白的表达（×400）

2.2 ASAP1蛋白表达与卵巢癌临床病理特征的关系

ASAP1蛋白的表达与卵巢癌患者的腹腔积液量相关（P=0.005），与患者年龄、肿瘤分期、病理类型、肿瘤分化无关（P均＞0.05），见表1。

2.3 ASAP1蛋白不同表达水平的上皮性卵巢癌患者预后分析

随访期间共有21例死亡，患者的总生存时间为2.6～107个月，中位生存时间为29.2个月，无瘤生存时间为2.6～107个月，中位无复发生存时间为22个月。单因素生存分析显示，ASAP1蛋白高表达组与低表达组间总生存时间与无进展时间的差异均有统计学意义（P=0.005，0.001）。见图2、3。

3 讨论

ASAP1相对分子质量约为125 000，位于染色体8q24，与细胞的黏附和树突状伪足形成有关，敲除ASAP1或沉默ASAP1基因，树突状伪足的形成及黏附现象则消失［6-10］。ASAP1与肿瘤的发展与侵袭有关。Eh1ers等［11］报道，在恶性黑色素瘤中，ASAP1表达与促进细胞的侵袭能力有关。Mü11er等［12］研究表明，在动物实验中ASAP1能促进直肠癌的转移，在体外实验中ASAP1能促进直肠癌细胞的侵袭。本研究表明，ASAP1的表达与腹盆腔内腹腔积液量相关。卵巢癌患者有腹腔积液是预后不良的高危因素，腹腔积液的产生是晚期患者的特征［13］。本课题组前期也有研究表明，随着卵巢癌患者临床分期的增加，腹腔积液量也有增加的趋势，卵巢癌腹腔积液与肿瘤的恶性程度相关，恶性程度高者易形成腹腔积液，预后差［14］。卵巢癌患者癌细胞可阻塞淋巴管，暂时阻挡癌细胞向腹膜外转移，但同时可促进腹腔积液的产生，肿瘤转移至腹膜和大网膜时引起局部刺激，使血浆蛋白渗漏至腹腔形成腹腔积液。ASAP1可被Arf1募集至细胞周边，与细胞的跨膜转运有关。ASAP1通过阻断Arf1活性增强细胞的活动性，ASAP1高表达组易形成腹腔积液，考虑与ASAP1促进卵巢癌细胞局部黏附，调节跨膜转运及细胞支架重塑有关。上述研究证明，ASAP1在恶性肿瘤的发展及转移过程中可能起重要作用。本研究中ASAP1蛋白的表达与患者年龄、肿瘤分期、病理类型、肿瘤分化无关。

表1 上皮性卵巢癌组织中ASAP1表达与临床病理特征的关系

图2 ASAP1高低表达上皮性卵巢癌患者的总生存曲线

图3 ASAP1高低表达上皮性卵巢癌患者的无复发生存曲线

本研究结果还显示，ASAP1高表达患者总生存时间及无复发时间较ASAP1低表达患者短。由此提示ASAP1高表达是上皮性卵巢癌患者预后不良的高危因素，ASAP1不仅可作为卵巢癌的潜在标志物，而且促进上皮性卵巢肿瘤的侵袭，但分子机制有待进一步研究。研究表明，ASAP1高表达致上皮生长因子受体增多，与卵巢癌的进展有关［15］。Baron等［16］研究结果表明，ASAP1高表达使肿瘤细胞迁徙及转移与血小板衍生生长因子（PDGF）介导的细胞通路有关。ASAP1的SH3结构域可以与Src介导的细胞通路结合，与肿瘤细胞的伪足形成有关［17］。

本研究初步表明ASAP1可作为预测卵巢癌预后的潜在标志物，但其在卵巢癌发展过程中的分子机制仍需进一步研究。

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Expression and clinical significance of ASAP1 in epithelial ovarian carcinoma

LIU Ya-nan，GA0 Ai-hua，ZHU Wei-pei
（Department of Obstetrics and Gyneco1ogy，the Second Affi1iated Hospita1 of Soochow University，Suzhou Jiangsu 215000，China）

Objective：To exp1ore the expression and c1inica1 significance of ASAP1 in epithe1ia1 ovarian carcinoma（EOC）.Methods：The expression 1eve1 of ASAP1 in 73 paraffin-embedded EOC specimen was measured by immunohistochemistry staining.Statistica1 ana1ysis was performed to eva1uate the c1inicopatho-1ogic significance of ASAP1.Assemb1ed c1inica1 surviva1 data were ana1yzed with Kap1an-Meier curves.Results：Statistica1 ana1ysis disp1ayed a significant corre1ation in ASAP1 expression with ascitic f1uid（P= 0.005）.High expression of ASAP1 was corre1ated with poor overa11（P=0.005）and recurrence-free（P=0.001）surviva1 in patients with EOC.Conclusion：E1evated expression of ASAP1 may be used as a potentia1 marker of EOC patients.

ASAP1；epithe1ia1 ovarian carcinoma；immunohistochemistry

R737.31

A

1671-7783（2015）06-0495-03

10.13312/j.issn.1671-7783.y150187

2015-08-24 ［编辑］ 刘星星

刘亚南（1983—），女，湖北武汉人，主治医师，硕士，主要从事妇科肿瘤诊治研究；朱维培（通讯作者），主任医师，E-mai1：zwp333xx@126.com