T-SPOT.TB检测在脊柱结核诊断中的应用

李宝田，焦云龙，孙文星

T-SPOT.TB检测在脊柱结核诊断中的应用

李宝田，焦云龙，孙文星

目的探讨结核感染T细胞斑点（T-SPOT.TB）检测在脊柱结核诊断中的应用价值。方法对2012年1月至2014年10月郑州市骨科医院收治的110例疑似脊柱结核病例同时进行结核菌素皮试试验（TST）及T-SPOT.TB检查，其中TST分别采用红肿硬结直径≥5 mm和≥15 mm两种标准，标记为TST 5和TST 15。以临床诊断结果作为标准，对比分析上述检测方法的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果110例疑似脊柱结核患者最终诊断为脊柱结核68例、非脊柱结核42例。TST 5、TST 15和T-SPOT.TB检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为93%、33%、69%、74%，47%、83%、82%、49%和91%、90%、94%、86%。T-SPOT.TB检测敏感度优于TST 15，特异度优于TST 5，阳性预测值和阴性预测值均优于TST 5和TST 15 （P＜0.05）。结论与TST比较，T-SPOT.TB检测诊断脊柱结核敏感度、特异度均较高，可用于脊柱结核的早期诊断。

结核，脊柱；诊断；分枝杆菌，结核；结核菌素试验；干扰素Ⅱ型；T淋巴细胞；免疫测定；敏感性与特异性

脊柱结核是最为常见的骨关节结核，晚期可引起病椎塌陷、脊柱畸形并常伴有严重的神经功能损害，早期诊断与治疗可阻断病情进展，改善预后。临床常用的结核菌素皮试试验（tuberculin skin test，TST）诊断肺外结核具有敏感度低、易受患者自身免疫功能水平干扰等缺点［1］。作为一种新型免疫学诊断方法，γ-干扰素释放试验（interferon-γ release assay，IGRA）具有较高的灵敏性及特异性，近年来在结核病的早期诊断中获得推广应用，结核感染T细胞斑点（T-cell spot of tuberculosis，T-SPOT.TB）检测就是较早引入国内的IGRA之一［2］。2012年1月至2014年10月我科对110例可疑脊柱结核患者同时行TST与T-SPOT.TB检查，旨在探讨T-SPOT.TB在脊柱结核早期诊断中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本组患者110例，其中男48例，女62例；年龄14～80岁，平均年龄45.5岁。病程1～8个月，平均病程3.5个月。均行病变部位X线片、CT及MRI检查。病变部位：颈椎7例、颈胸交界区6例、胸椎36例、胸腰交界区26例、腰骶椎35例。病变累及单个椎间隙及相邻椎体86例、累及2个椎间隙及相邻椎体24例，未有3个及以上椎间隙及跳跃节段受累病例。患者均同时接受TST和T-SPOT.TB检测。

1.2 TST检测方法及结果判定

取5 U结核菌素纯蛋白衍化物（purified protein derivative，PPD）稀释液，于前臂屈侧行皮内注射，72 h后测量皮肤红肿硬结直径。临床上通常以红肿硬结直径≥5 mm（TST 5）和≥15 mm （TST 15）作为判断卡介苗接种者与未接种者是否感染结核分枝杆菌的标准。由于本组绝大多数患者无法准确提供卡介苗接种情况，因此分别采用TST 5、TST 15两种标准进行记录。TST检测操作及结果判读均由同一位医师完成。

1.3 T-SPOT.TB检测方法及结果判定

使用结核感染T细胞检测试剂盒（英国Oxford Immunotec公司）进行免疫斑点法检测。肝素抗凝管采集8 mL静脉血，4 h内分离单核细胞，配制500 μL终溶液（每100 μL含250 000个外周血单核细胞）；在已包被抗γ-干扰素（interferon，IFN）抗体的微量板的4孔中，分别加入4种不同的对照物［AIM-V细胞培养液（阴性对照物）、抗原A （ESAT-6抗原）、抗原B（CFP-10抗原）、植物血凝素（阳性对照物）］进行对比，然后在每孔中加入细胞终溶液100 μL；将微量板放入37°C、5%CO2培养箱培养16～20 h，PBS缓冲液洗板4次，加入碱性磷酸酶标记的抗γ-IFN抗体，PBS缓冲液洗脱、显色后终止反应，干燥；最后计数斑点数。阳性结果判定：空白对照孔斑点数为0～5时，（抗原A或抗原B孔斑点数）—（空白对照孔斑点数）≥6；空白对照孔斑点数为6～10个时，抗原A或抗原B孔斑点数≥2×空白对照孔斑点数。如不符合上述标准且阳性质控对照孔正常时检测结果为阴性。空白对照孔斑点数超过10个、阳性质控对照孔斑点数少于20个时，检测结果被认为是“不确定”。T-SPOT.TB检测操作及结果判读均由同一位医师完成。

1.4 评价指标

依据患者的症状体征、既往病史和传染病接触史，影像学检查、病原学检查、组织病理学检查结果以及患者对抗结核药物治疗的反应，结合专家会诊意见综合评估做出临床诊断。以临床诊断结果为标准，评价两种检测方法的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。

1.5 统计学分析

应用SPSS 17.0统计软件进行分析，计数资料以例数或百分数表示，两组比较采用卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

110 例疑似脊柱结核患者最终诊断为脊柱结核68例；非脊柱结核42例，其中布氏杆菌脊柱炎21例、非特异性细菌感染13例、无菌性终板炎4例、强直性脊柱炎2例、脊柱肿瘤2例。TST、T-SPOT. TB检测结果与临床诊断结果的比较见表1，两种检测方法的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值结果见表2。T-SPOT.TB检测敏感度与TST 5相当（χ2=0.099，P=0.753），特异度优于TST 5（χ2= 21.600，P=0.000）；特异度与TST 15相当（χ2= 0.000，P=1.000），敏感度优于TST 15（χ2= 31.003，P=0.000）；阳性预测值优于TST 5和TST 15（χ2=27.782，11.971，P=0.000，0.001），阴性预测值优于TST 5和TST 15（χ2=4.500，31.202，P= 0.034，0.000）。

3 讨论

3.1 脊柱结核的临床特点

脊柱结核占结核感染的1%～3%，占骨关节结核的50%左右［3］。尽管脊柱结核为继发性病灶，但很多患者并无明确的肺结核病史，在确诊脊柱结核的患者中能查到肺部原发灶的也不多，本组68例脊柱结核病例中有明确肺结核病史者仅11例，肺部CT检出原发灶者仅19例。本病起病缓慢，早期无特异性临床表现，疼痛常是最先出现的症状。患者往往表现为轻微疼痛，休息后症状减轻，劳累后加重，部分患者有低热、疲倦、消瘦、盗汗、食欲不振、贫血等症状；晚期可出现骨骼畸形或累及椎管造成神经压迫而截瘫，严重威胁患者健康。病理学表现为受累区骨质破坏和坏死、干酪样改变和脓肿形成，椎体可因病变和承重而发生塌陷［4］。早期诊断和治疗对脊柱结核预后尤为重要，可有效阻止病变的发展进程，减少致畸致残等晚期并发症的发生几率［5-6］。

3.2 脊柱结核的诊断方法

脊柱结核患者早期症状体征不特异，早期诊断较为困难。影像学检查尤其是MRI的发展为脊柱结核的早期诊断提供了可能，但除非有典型的寒性脓肿出现，MRI检查也无法判断炎症的类型，如何从MRI检查诊断为炎性的患者中甄别出脊柱结核，是困扰临床医生的难题；细菌学及病理学检查是结核病诊断的“金标准”，但对于脊柱结核患者来讲，标本的获取需要穿刺或手术，但穿刺技术条件要求高，存在一定风险；手术是结核晚期的治疗方案，对早期诊断无意义；血清学诊断结核病特异度欠佳，敏感度较差［7］，并不能提高临床诊治效果［8］；TB-DNA检测虽然有较好的敏感度和特异度，但试验条件要求高，假阳性率及假阴性率高［9］，且标本仍难于获取；TST所使用的PPD与卡介苗存在交叉免疫，诊断特异性较差；近年来发展起来的包括QFT-GIT［10］、T-SPOT.TB［11］在内的IGRA诊断方法，特异性和敏感性较高，标本来源方便，对早期诊断脊柱结核有较高的应用价值［12］。

表1 TST及T-SPOT.TB检测与临床诊断结果的比较（例）

表2 TST与T-SPOT.TB检测价值的比较（%）

3.3 T-SPOT.TB检查在脊柱结核的应用

诸多文献报道IGRA诊断肺结核及肺外结核的应用价值［13-15］，在欧美等国家，该方法已被推荐为TST的替代检查手段，用于结核病的辅助诊断［16］。其中T-SPOT.TB对于肺外结核，尤其是处于免疫抑制状态或粟粒型结核患者，诊断敏感度较高［17］；一项纳入19项研究的系统评价结果显示，T-SPOT. TB较TST敏感性更高，特异性更强（但可信区间有重叠）；而QFT-GIT虽然似乎较TST更敏感，但特异性却与TST相似［18］。

有研究表明，对肺外结核IGRA检查的诊断效果有赖于结核杆菌所累及的肺外部位。Shin等［19］应用IGRA技术检测418例疑似肺外结核的患者，结果表明，其对结核性淋巴结炎的敏感度和特异度（81.8%、80.0%）远高于结核性胸膜炎（38.5%、50.0%）；钟一鸣等［1］的研究结果亦显示，T-SPOT. TB对肺外结核的诊断价值随肺外结核感染部位的不同而发生变化，其诊断敏感度与有无浆膜腔积液、机体免疫状态有一定关系。因此，明确IGRA对国人脊柱部位结核的诊断效果，可为脊柱结核早期诊断辅助方法的选择提供可靠的临床数据，具有重要的现实意义。

Yuan等［20］对65例疑似非典型性脊柱结核患者进行T-SPOT.TB检测，敏感性和特异性分别为82.8%和81.3%，作者认为营养不良和年龄可能是影响该方法诊断非典型性脊柱结核阳性率的相关因素；地里下提等［21］对156例疑似脊柱结核患者进行检测，结果表明，T-SPOT.TB试验的灵敏度、特异度分别为85.7%和86.4%，假阴性率和假阳性率分别为14.3%和13.6%；其灵敏度、特异度及假阴性率和假阳性率数据均优于TST（硬结直径≥10 mm考虑为TST阳性）；袁凯等［22］应用T-SPOT. TB试验对34例脊柱结核感染患者及31例对照组患者进行检测，结果表明，该试验的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为85.5%、77.4%、80.6%和82.8%，提示该试验可能成为脊柱结核感染早期诊断的一项重要筛查工具。本研究T-SPOT.TB诊断脊柱结核灵敏度和特异度分别为91%和90%，高于上述报道，推测可能与样本量、地域差异等有关。

如前所述，TST特异性较差，故临床上将判断标准由红肿硬结直径5 mm提高到15 mm，特异性虽获提高，但却降低了检出率［23］，本组病例也呈现出相同结果［（结核病组TST 5的敏感度为93% （63/68），而TST 15仅为47%（32/68）］。本研究结果提示，T-SPOT.TB诊断脊柱结核敏感度与TST 5相当，特异度优于TST 5；特异度与TST 15相当，敏感度优于TST 15；阳性预测值和阴性预测值均优于TST 5及TST 15。这一结果说明，与TST检查比较，T-SPOT.TB的灵敏度和特异度均较高，可用于国人脊柱结核的早期诊断。

［1］钟一鸣，谷秀梅，刘文恩，等.T细胞斑点试验辅助诊断不同部位肺外结核感染的应用［J］.中华医院感染学杂志，2014，24 （17）:4415-4417.

［2］张卫平，韩文，白玉峡，等.结核感染T细胞斑点试验辅助诊断小儿肺结核的临床研究［J］.临床儿科杂志，2009，27（7）: 635-637.

［3］胡自强，卢丹.脊柱结核的诊断与手术治疗进展［J］.医学综述，2014，20（18）:3372-3374.

［4］Lange C，Mori T.Advances in the diagnosis of tuberculosis ［J］.Respirology，2010，15（2）:220-240.

［5］Mota PC，Sá D，Mota M，et al.Extrapulmonary tuberculosis: importance of differential diagnosis［J］.BMJ Case Rep，2011，Sep 19.doi:10.1136/bcr.06.2011.4363.

［6］Wu X，Ma Y，Li D，et al.Diagnostic value of ELISPOTtechnique for osteoarticular tuberculosis［J］.Clin Lab，2014，60（11）:1865-1870.

［7］中华医学会结核病学分会.肺结核诊断和治疗指南［J］.中华结核和呼吸杂志，2001，24（2）:70-74.

［8］World Health Organization.Commercial serodiagnositic tests for diagnosis of tuberculosis:policy statement［M］.Geneva: World Health Organization，2011:1-8.

［9］胡静，袁文清.PCR技术检测体液中结核分枝杆菌的结果分析［J］.国际检验医学杂志，2013，34（5）:588-589.

［10］Mazurek GH，Jereb J，Lobue P，et al.Guidelines for using the QuantiFERON-TB Gold test for detecting Mycobacterium tuberculosis infection，United States［J］.MMWR Recomm Rep，2005，54（RR-15）:49-55.

［11］Meier T，Eulenbruch HP，Wrighton-Smith P，et al.Sensitivity of a new commercial enzyme-linked immunospot assay（T SPOT-TB）for diagnosis of tuberculosis in clinical practice ［J］.Eur J Clin Microbiol Infect Dis，2005，24（8）:529-536.

［12］王宗义，胡爱荣，蒋素文，等.T-SPOT.TB痰涂片和TB-DNA平行检测在结核病中的诊断评价［J］.中国预防医学杂志，2014，15（5）:473-476.

［13］李津，潘燕玉，张宝华，等.IGRA检测在结核性胸膜炎中的诊断价值［J］.临床肺科杂志，2014，19（6）:1055-1057.

［14］Ringshausen FC，Schablon A，Nienhaus A.Interferon-gamma release assays for the tuberculosis serial testing of health care workers:a systematic review［J］.J Occup Med Toxicol，2012，7（1）:6.

［15］陈永芳，任鹏飞，陈裕，等.探讨外周血T-SPOT.TB检测对结核性脑膜炎的诊断价值［J］.中国实用神经疾病杂志，2014，17（17）:87-88.

［16］Moon HW，Hur M.Interferon-gamma release assays for the diagnosis of latent tuberculosis infection:an updated review ［J］.Ann CLin Lab Sci，2013，43（2）:221-229.

［17］Lee YM，POark KH，Kim SM，et al.Risk factors for false-negative results of T-SPOT.TB and tuberculin skin test in extrapulmonary tuberculosis［J］.Infection，2013，41（6）: 1089-1095.

［18］De Keyser E，De Keyser F，De Baets F.Tuberculin skin test versus interferon-gamma release assays for the diagnosis of tuberculosisinfection［J］.ActaClinBelg，2014，69（5）: 358-366.

［19］Shin JA，Chang YS，Kim HJ，et al.Diagnostic utility of interferon-gammareleaseassayinextrapulmonarytuberculosis［J］.Diagn Microbiol Infect Dis，2015.doi:10.1016/j. diagmicrobio.2015.02.002.［Epub ahead of print］

［20］Yuan K，Zhong ZM，Zhang Q，et al.Evaluation of an enzyme-linked immunospot assay for the immunodiagnosis of atypical spinal tuberculosis（atypical clinical presentation/ atypical radiographic presentation）in China［J］.Braz J Infect Dis，2013，17（5）:529-537.

［21］地里下提，古甫丁，马良.结核感染T细胞斑点试验在脊柱结核诊断中的应用［J］.脊柱外科杂志，2014，12（6）:357-359.

［22］袁凯，吴雪琼，张强，等.结核杆菌抗原特异性γ干扰素释放试验在脊柱结核辅助诊断中的应用研究［J］.实用医学杂志，2013，29（14）:2314-2316.

［23］张向东，郑蓉蓉，何水珍.TB-IGRA与TST检测菌培阳性肺结核患者比较［J］.中国人兽共患病学报，2012，28（5）: 464-466.

Application of T-SPOT.TB assay in the diagnosis of spinal tuberculosis

LI Baotian，JIAO Yunlong，SUN Wenxing.Department of Spinal SurgeryⅡ，Zhengzhou Orthopedics Hospital，Zhengzhou，Henan 450052，China.

Objective To investigate the diagnostic value of T-cell spot of tuberculosis（T-SPOT.TB）assay for patients with spinal tuberculosis.Methods From January 2012 to October 2014，a total of 110 suspected patients with spinal tuberculosis accepted both tuberculin skin test（TST）and T-SPOT.TB assay in Zhengzhou Orthopedics Hospital，in which TST using two standards of TST 5（induration size≥5 mm）and TST 15 （induration size≥15 mm）.According to the results of clinical diagnosis，the sensitivity，specificity，positive predict value and negative predict value of the two tests were evaluated and compared with each other.Results There were 68 patients diagnosed as spinal tuberculosis finally.The sensitivity，specificity，positive predict value and negative predict value of TST 5，TST 15 and T-SPOT.TB assay was 93%，33%，69%，74%，and 47%，83%，82%，49%，and 91%，90%，94%，86%respectively.The sensitivity of T-SPOT.TB was higher than TST 15，and the specificity was higher than TST 5；The positive predict value and the negative predict value were all higherthan TST 5 and TST 15（P＜0.05）.Conclusion Compared with TST，T-SPOT.TB assay possesses more satisfactory sensitivity and specificity in the diagnosis of spinal tuberculosis，which could be used to help the early diagnosis of spinal tuberculosis.

Tuberculosis，spinal；Diagnosis；Mycobacterium tuberculosis；Tuberculin test；Interferon typeⅡ；T-lymphocytes；Immunoassay；Sensitivity and specificity

R529.23，R446.6

A

1674-666X（2015）02-074-05

2015-02-14；

2015-02-28）

（本文编辑：白朝晖）

10.3969/j.issn.1674-666X.2015.02.002

450052郑州市骨科医院脊柱Ⅱ科

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