长角血蜱性信息素成分的研究

胡玉红，张 岩，靳 尚，刘敬泽

（河北师范大学生命科学学院，石家庄050024）

Berger[1]首次发现 2，6-二氯酚（2，6-DCP）为后沟类硬蜱中的吸引性信息素（attractant sex pheromone，ASP）成分，目前确定该成分至少在7属18种硬蜱中存在[2-5].刘敬泽等[6]在长角血蜱（Haemaphysalis longicornis）雌蜱提取物中检测到2，6-DCP，并研究了该成分在不同发育期的含量变化和生物学作用[6].2，6-DCP作为蜱类防治的药物已有成功先例[7].

多年来，人们一直在寻找蜱类性信息素中是否还存在2，6-DCP以外的其他物质.Hanson等[8]在变异革蜱（Dermacentor variabilis）雌蜱提取物中鉴定出 2，4-DCP，同时确定2，4-DCP与2，6-DCP的含量比例为1∶9，该物质对雄蜱也具有吸引作用，且2，4-DCP可以作为 2，6-DCP 的替代物[9]，2，4-DCP 和 2，6-DCP 对变异革蜱吸血雄蜱、吸血若蜱具有相同的作用[10-11].迄今，仅在革蜱属（Dermacentor）中有2，4-DCP的报道.

为阐明其他蜱种中是否存在2，4-DCP，分析该种性信息素成分在蜱类不同发育期的含量变化，本研究以长角血蜱为对象，对其雌蜱挥发性ASP的主要成分、生物学作用等进行了分析.

1 材料与方法

1.1 蜱的采集和喂养

长角血蜱采自河北省小五台山国家自然保护区.饥饿的幼蜱、若蜱和成蜱均在兔耳上饱血，非寄生期在人工气候箱中培养，培养温度（26±1）℃，相对湿度75%，6 L（光照）∶18 D（黑暗）.不同发育期的雌蜱：饥饿期（未吸血）、刚吸血（吸血1 d）、吸血期（吸血 2～3 d）、交配期（吸血 3～5 d）、交配后（吸血 5～7 d）、饱血当天（吸血5～7 d），分别取材用于研究.

1.2 样品制备

将不同发育期的成蜱20头分别放入磨口玻璃管中，加入5.0 mL正己烷后，封紧玻璃管，置4℃下充分抽提2h，正己烷重提2次，每次30 min.浓缩定容至20μL，用于生物测定、色谱和质谱分析.

1.3 色谱条件

1.3.1 气相色谱条件

色谱柱为OV-101毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.15μm），气化室温度和Fid检测器温度为280℃，柱温为60℃（5 min），以10℃/min升温至280℃，信号采集时间25 min，载气为高纯度氮气.

1.3.2 质谱条件

色谱柱为DBS-MS毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.15μm），气化室温度和Fid检测器温度为280℃，柱温为80℃（5 min），然后以10℃/min升温至280℃，信号采集时间25 min，载气为氦气.扫描质量范围为30～800 m/z，电子能量为 70 eV.

1.4 生物测定

①用蘸有正己烷的脱脂棉在刚开始吸血雌蜱的体表进行擦拭，上、下午各1次；②不做任何处理（作为空白对照）；③在①处理后连续3 d在雌蜱体表点滴正己烷，每天1μL（作为正己烷对照）；④在①处理后连续3 d点滴不同发育期雌蜱体表抽提物，每天1μL；⑤在（1）处理后连续3 d点滴标准样品，分别为2，4-DCP（100 ng）、2，6-DCP（30 ng）和 2 种成分的混合物（100 ng的 2，4-DCP 和 30 ng的 2，6-DCP）.各处理组重复5次.

2 结果与讨论

2.1 雌蜱不同发育期体表抽提物的生物学测定

长角血蜱的生殖行为在吸血3～5 d后进行.刚开始吸血的雌蜱经正己烷擦拭后生殖行为基本中止，施加不同发育期雌蜱的体表抽提物后，长角血蜱生殖行为的恢复程度如表1所示.

表1 不同发育期雌蜱体表抽提物对交配的影响Tab.1 Effects of extraction from the femaleh.longicornis at different physiological phases on mating behavior

由表1可以看出，从饥饿期开始，随着雌蜱发育的成熟，体表抽提物作用于正己烷处理过的长角血蜱后，其完成生殖行为的百分率增大，交配期雌蜱的体表抽提物效果最好.

2.2 气相色谱/质谱分析

根据不同发育期的雌蜱体表抽提物的生物测定结果，选取典型时期（交配期）样品进行气相色谱/质谱分析，结合2，4-DC与2，6-DCP标准样品的保留时间和质谱特征.结果如图1所示，可知保留时间9.90 min的成分为2，4-DCP，保留时间10.53 min的成分为2，6-DCP.

图1 长角血蜱雌蜱交配期体表抽提物气相色谱图Fig.1 Gas chromatography of extraction from the body surfaceof mating femaleh.longicornis

2.3 标准样品的生物测定

2，4-DCP与2，6-DCP标准品对交配成功率的效果如表2所示.由表2可以看出，未处理的雌蜱（空白对照）均可饱血，擦拭正己烷后的对照组的雌蜱交配成功率不足10%.雌蜱体表经正己烷擦拭后无法完成生殖行为，施加测试样品后生殖行为得到不同程度的恢复.施加2，4-DCP的处理组饱血率接近70%；施加2，6-DCP的处理组饱血率略高于施加2，4-DCP的处理组，差异没有统计学意义（p＞0.05）.2，4-DCP 与 2，6-DCP混合组分对饱血率的影响高于单独施加其中的一种成分的影响，差异具有高度统计学意义（p＜0.01）.

表2 2，4-DCP和2，6-DCP对雌蜱交配的影响Tab.2 Effects of 2，4-DCP and 2，6-DCP on mating behavior of femaleh.longicornis

2.4 不同发育期雌蜱2，4-DCP与2，6-DCP分泌量的动态变化

通过外标法测定不同发育期时雌蜱的2，4-DCP与2，6-DCP分泌量，结果如表3所示.

表3 雌蜱不同发育期2，4-DCP和2，6-DCP分泌量的动态变化Tab.3 Dynam ic change of secretion level of 2，4-DCP and 2，6-DCPat different physidogical phases of femaleh.longicornis

由表3可以看出，饥饿期的雌蜱体表已经存在2，4-DCP 和 2，6-DCP；吸血开始后，2 种成分的分泌量都开始增加；交配期达到峰值，此后下降.在所有发育期，2种成分分泌量的比例关系基本保持一致.

3 结论

气相色谱及气质联用分析结果表明，长角血蜱雌蜱所有发育期均可分泌2，4-DCP和2，6-DCP，并随雌蜱发育期而变化，交配期达到高峰，高峰后分泌量又逐渐下降，这与刘敬泽等[12]用气相色谱法在长角血蜱盾窝腺丙酮提取物中检测的2，6-DCP含量动态变化基本吻合.不同发育期，雌蜱体表分泌2，4-DCP和2，6-DCP量的比例基本保持不变，约为3∶1，而Hanson等[8]报道的变异革蜱中该比例为1∶9，这说明不同蜱种间存在差异，可以实现种间识别的隔离.

根据硬蜱的交配行为，吸引性信息素由雌蜱在吸血后直至交配前不断释放，刺激并吸引性活动的雄蜱对雌蜱准确定位并完成交配行为.本研究证实长角血蜱中这2种成分的分泌量动态变化与交配行为相吻合，且均对交配行为的完成有显著促进作用，因此可确定2，4-DCP和2，6-DCP均为性信息素成分，有关两种成分的作用机制及其在蜱类防治中的应用尚需进一步研究.

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