正交试验法优化鼻爽排毒颗粒水提醇沉工艺

袁建

（重庆医科大学附属第二医院，重庆400010）

正交试验法优化鼻爽排毒颗粒水提醇沉工艺

袁建

（重庆医科大学附属第二医院，重庆400010）

目的优化鼻爽排毒颗粒的水提醇沉工艺。方法采用正交试验法，以黄芩苷为指标，考察用水量、提取时间、提取次数对水提取工艺的影响；以黄芩苷保留率、固形物减少率为指标，考察药液醇沉浓度对醇沉工艺的影响。结果最佳水提取、醇沉工艺为加12倍量水，煎煮3次（第1次80min，第2，3次各60min），提取液浓缩至相对密度为1.20，冷却后加入乙醇使含醇量为70.00%，除去沉淀。结论优化的水提取、醇沉工艺条件稳定可行，重复性好，可用于该制剂的工业化生产。

鼻爽排毒颗粒；正交试验法；黄芩苷；提取工艺

鼻爽排毒颗粒由黄芩、鱼腥草、川芎、白芷、甘草、辛夷等多味药组方，具有清热解毒、通窍排脓之功效，临床常用于化脓性鼻窦炎见鼻流浊涕、量多不止等症。笔者采用L9（34）正交试验设计，以黄芩苷含量和固形物减少率为测评指标优化鼻爽排毒颗粒的水提醇沉工艺，为该制剂的规范化生产和临床疗效提供理论依据。

1　仪器与试药

2010A型高效液相色谱仪（日本岛津）；LC-10ATVP型输液泵（双泵）；SPD-10AVP紫外检测器。黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110715-200514）；甲醇、磷酸为色谱纯；水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1黄芩苷含量测定［1-2］

2.1.1色谱条件

色谱柱：迪马公司-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液（44∶56）；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；紫外检测波长：280 nm。

2.1.2溶液制备

精密称取干燥至恒重的黄芩苷对照品3.45mg，置50mL容量瓶中，用甲醇适量使溶解，并用甲醇定容至刻度，摇匀，即得0.069 g/L黄芩苷对照品溶液。取正交试验项下的提取液，浓缩、定容至100 mL，精密量取2 mL，置50 mL容量瓶中，用甲醇适量，超声处理10 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，过微孔滤膜（0.45μm），离心，即得供试品溶液。照处方比例，称取缺黄芩各味药材，按正交试验的优化工艺制成缺黄芩阴性对照品溶液。

2.1.3方法学考察

专属性试验：取2.1.2项下3种溶液各10μL，按拟订色谱条件测定。结果表明，阴性对照品溶液对黄芩苷的测定无干扰，黄芩苷色谱峰与相邻色谱峰分离度大于2（见图1）。

图1　高效液相色谱图

线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液2，4，8，10，16，20μL，按拟订色谱条件进样测定峰面积。以黄芩苷进样量（C）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程A= 2 862 744C-185 583，r=0.999 8（n=6）。结果表明，黄芩苷进样量在0.138～1.38μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液，重复进样6次，每次进样10μL。结果的RSD=0.72%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，分别在0，2，4，8，12 h时进样测定。结果的RSD=0.79%（n=5），表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

重复性试验：取样品适量，平行制备5份供试品溶液，按拟订色谱条件测定。结果的RSD=0.98%（n=5），表明该方法重复性良好。

加样回收试验：精密量取同一供试品6份，分别加入对照品适量，依法测定并计算回收率。结果平均回收率为99.43%，RSD=1.22%（n=6）。

2.2水提取工艺优化［3-4］

正交试验及结果：照处方比例称取药材，以提取液中的黄芩苷为考察指标，选取用水量（因素A）、煎煮时间（因素B）、煎煮次数（因素C）为考察因素，采用L9（34）正交表设计进行考察。因素水平见表1，试验结果见表2。可见，各因素对提取效果均有影响，影响黄芩苷提取因素中C＞B＞A，最佳组合为A3B3C3，即用水量为14倍，煎煮3次，煎煮时间为80min；C因素对试验结果有一定影响，B因素无影响，A2及A3差异较小，从生产中省时节能的角度考虑，用水量选择12倍量煎煮3次，第1次80 min，第2、3次60min，即可。

表1　水提工艺优化因素水平表

表2　水提工艺优化L9（34）正交试验设计与结果（n=3）

验证试验：按处方比例称取药材，分别采用最佳工艺条件和拟采用工艺条件提取，按拟订色谱条件测定黄芩苷含量。结果见表3。可见，在鼻爽排毒颗粒选定提取工艺条件下，样品中黄芩苷含量相近，表明选定的工艺条件稳定、可行。

2.3醇沉工艺优化

试验方法与结果：采用水煎煮提取工艺，在满足临床需要的前提下，以最大限度提取药物中的活性成分为目标，选择适当的醇沉浓度。按处方比例称取一定量饮片，按拟订的提取工艺条件进行提取，趁热滤过，浓缩至一定体积，分别以70%，80%，85%的醇沉浓度进行除杂，再取各上清液，测定黄芩苷含量。结果见表4。可见，醇沉浓度在70%时黄芩苷含量较高，故选择水煎液浓缩至一定体积以70%的醇沉浓度进行醇沉，黄芩苷保留率和除杂效果明显。

表3　水提取工艺验证试验结果

表4　不同醇沉浓度除杂效果比较

验证试验：取相对密度为1.15的药液3份，分别加入一定量乙醇，使含醇量为70%进行醇沉。醇沉时边搅拌边缓慢加入乙醇，以避免药液中局部乙醇浓度过高造成有效成分被沉淀物包裹造成损失。静置24 h后，过滤，分别测定黄芩苷的保留率，并测定固形物重量计算固形物减少率。结果3次试验的黄芩苷保留率分别为93.35%，93.42%，93.28%，固形物减少率分别为20.16%，20.44%，20.48%。可见，醇沉工艺验证试验结果与正交试验筛选结果基本一致，表明该分离纯化工艺条件稳定可行，重复性好。

3　讨论

为便于服用、保持原方疗效，选择将鼻爽排毒颗粒采用水提醇沉工艺进行提取。通过L9（34）正交试验法优化水提取工艺参数，并根据工业化生产的要求，对某些参数进行了改进；以黄芩苷含量为指标，对优化参数与改进参数进行了验证试验。试验结果表明，改进后的提取工艺测定黄芩苷的含量，与优化参数结果相近，可满足实际生产的需要。

中药水提取物杂质较多，如淀粉、果胶、树脂、黏液质、树胶、蛋白质、蜡质等，常用的除杂方法有板框压滤法、乙醇沉淀法、吸附澄清法、高速离心法等［5-11］。吸附澄清法近年来使用较多，其主要除去蛋白质、蜡质、淀粉等胶体不稳定性成分，对中草药中有效成分如黄酮、生物碱、皂苷类、萜类、多糖、氨基酸、多肽、维生素、矿物质等无影响，但此法实际操作中工序多，加入澄清剂搅拌后仍需离心，成本较高。高速离心法是一种物理分离方法，分离程度与离心机转速直接相关，转速越高除去杂质越多，但在大生产中药液生产量大，单纯用高速离心机离心除杂必然会增加资产投资。水提醇沉法是中药口服制剂精制最常用的方法，能获得较好的澄明度。

醇沉工艺试验中，以醇沉前后黄芩苷的相对保留率作为指标，并综合考虑固形物的减少量等综合因素，确定了该复方制剂制备工艺中醇沉的最佳工艺条件。结果表明，该制剂采用水提取、乙醇沉淀方法稳定可行，可用于该产品的工业化生产。

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Optim ization of W ater Extract and Alcohol Precipitation Process of Bishuang Paidu Granules by Orthogonal Test

Yuan Jian
（The Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing，China 400010）

Objective To optimize the water extract and alcohol precipitation method of Bishuang Paidu Granules.M ethods The orthogonal test was adopted to inspect the influence of volume of water，extract time and extract frequency on the water extraction with the content of baicalin as the index；the influence of liquid alcohol concentration in the alcohol precipitation process with the retention rate of baicalin and decrement of solid mater as the index.Results The best optimizations of water extract and alcohol precipitation were adding 12 times water，boiled 3 times（the first time boiled 80 min，the second and third time 60 min respectively），the extract was concentrated to a relative density of 1.20，cooled，and added alcohol to make the alcohol content 70.00%，removed precipitate.Conclusion The optimized method of water extraction and alcohol precipitation process were stable，feasible and has good repeatability，and is suitable for industrial production.

Bishuang Paidu Granules；orthogonal test；baicalin；extraction process

TQ461；R286.0

A

1006-4931（2015）18-0059-03

2014-10-27；

2015-03-29）