脑功肽口服液抗焦虑作用实验研究*

雷健，胡长鹏，邢茂，向俊马，张蓉

（中国人民解放军第三军医大学新桥医院药学部，重庆400037）

脑功肽口服液抗焦虑作用实验研究*

雷健，胡长鹏，邢茂，向俊马，张蓉

（中国人民解放军第三军医大学新桥医院药学部，重庆400037）

目的通过动物行为学试验模型研究脑功肽口服液的抗焦虑作用。方法采用小鼠高架十字迷宫试验（EPM）和大鼠敞箱试验（OFT），EPM试验选取开臂时间百分比（OT%）、开臂次数百分比（OE%）、总入臂次数、总入臂时间为观察指标；OFT试验选取总路程、中央区域路程、中央区域时间为观察指标。分别设空白对照组、地西泮组、脑功肽高剂量组与脑功肽中剂量组进行观察。结果在EPM试验中，OT%与OE%地西泮组分别为（51.23±17.47）%和（53.28±14.96）%，脑功肽高剂量组分别为（38.67±15.23）%和（57.43±8.16）%，均与空白对照组有显著性差异（P＜0.05）；OFT试验中，地西泮能显著增加中央区域时间（P＜0.05）。结论EPM试验显示，脑功肽口服液具有抗焦虑作用。

脑功肽口服液；焦虑；高架十字迷宫试验；大鼠敞箱试验

脑功肽口服液为我院院内制剂，由远志、酸枣仁、天麻、石菖蒲等14味中药组方，具有调节脑功能、平衡大脑兴奋与抑制过程、增强记忆力、促进脑细胞代谢、改善脑循环和醒脑提神等作用［1-4］，能缓解睡眠障碍患者的焦虑症状。我科对该制剂分别进行了质量标准研究和急性毒性研究［5］，但对其抗焦虑作用的机制未进行研究。本研究中通过小鼠高架十字迷宫试验（EPM）与大鼠敞箱试验（OFT）［6］，研究脑功肽口服液对动物行为学的影响，以考察其抗焦虑作用。

1　材料与方法

1.1仪器、动物与试药

ZH-DSG型高架十字迷宫试验视频分析系统，ZH-ZFT型自发活动视频分析系统（安徽淮北正华生物仪器设备有限公司）；ME235S型电子分析天平（德国赛多利斯公司）。清洁级健康雄性昆明种小鼠60只，初始体重18～22 g；清洁级健康雄性SD大鼠［许可证号：SCXK（渝）2012-0005］60只，初始体重160～180 g，由第三军医大学大坪医院动物实验中心提供。所有动物提前1周购入，清洁级动物［许可证号：SYXK（渝）2012-0011］常规饲养。地西泮片（湖北制药有限公司，批号为20110604），试验时用双蒸水配制成0.2 g/L的溶液；脑功肽原液（NGT）由第三军医大学新桥医院药剂科中药制剂室提供（批号为20130114），高、中剂量组用双蒸水分别配制每1mL含1.8，0.9 g生药的药液，双蒸水为新桥医院药剂科普通制剂室制备。

1.2试验方法

分组与给药：行为学试验前，将动物饲养于正常昼夜循环的环境中。室温控制在（20±2）℃，自由摄食饮水，适应性喂养3 d后，每天安抚动物2min，持续3 d，减少无关刺激对试验的影响。给药前将动物随机分为空白对照组（A组）、地西泮阳性对照组（B组）、脑功肽高剂量组（C1组）、脑功肽中剂量组（C2组），各15只，各组每天8：00～21：00灌服给药，灌胃量小鼠每20 g体重0.2mL，大鼠每200 g体重2 mL，连续7 d，末次给药30min后进行行为学试验，试验时间段为8：00～14：00。

EPM与OFT试验：实验室光线保持恒亮，以1.5m距离处能辨认小鼠细微活动的最低亮度为准，室温约15℃，保持实验室安静。测试前将每只小鼠放于60 cm×60 cm×35 cm敞箱中，自由探究5 min，然后迅速置试验系统的中央平台上，头朝向一开放臂，放开后开始计时，由仪器记录5min内的活动指标。观察指标包括，进入开放臂次数（OE）；进入到任一开放臂的次数，以小鼠4个爪子均进入到臂内为准，中途1个爪子从该臂中完全退出则为该次进入活动完成；进入开放臂时间（OT）；进入封闭臂次数（CE），进入到任一封闭臂的次数，以小鼠4个爪子均进入到臂内为准；进入封闭臂时间（CT）；开臂时间百分率（OT%）=OT/（OT+CT）×100%；开臂次数百分率（OE%）=OE/（OE+CE）× 100%；总入臂次数，OE+CE；总入臂时间，OT+CT。实验室保持安静，大鼠迅速置于敞箱中央（尺寸为100 cm×100 cm×45 cm），释放后记录10min内大鼠活动指标。每次完成记录后，用5%醋酸水溶液擦拭箱底，清除粪便，继续用干布擦净，排除气味对下一只大鼠的干扰。观察指标包括总路程（mm）、中央区域路程（mm）、中央区域时间（s）。

1.3统计学处理

2　结果

2.1小鼠EPM试验

结果见表1。可见，地西泮组能明显增加小鼠OT%和OE%（P＜0.05），而不增加总入臂次数和总入臂时间，显示模型造模成功。与空白对照组相比，高剂量脑功肽口服液能增加OT%和OE%（P＜0.05），显示具有一定的抗焦虑作用；与空白对照组相比，中剂量脑功肽口服液的OT%和OE%无显著性差异。

表1　小鼠EPM试验结果（±s）

表1　小鼠EPM试验结果（±s）

注：与A组比较，*P＜0.05。

组别A组（n=9）B组（n=14）C1组（n=12）C2组（n=12）OT（%）13.91±6.67 51.23±17.47*38.67±15.23*18.28±11.51 OE（%）34.83±7.39 53.28±14.96*57.43±8.16*42.36±11.66 OE+CE（次）47.00±7.71 48.71±23.71 53.83±8.23 45.42±11.64 OT+CT（s）200.46±30.17 180.20±54.22 185.72±36.82 196.73±39.78

2.2大鼠OFT试验

结果见表2。可见，B组中央区域时间比A组明显增加，但中央区域路程无显著性差异。与A组相比，C1组及C2组总路程、中央区域时间、中央区域路程等指标均无显著性差异，提示在该模型上未发现明显改善焦虑的作用。

表2　大鼠OFT试验结果（±s）

表2　大鼠OFT试验结果（±s）

注：与A组比较，*P＜0.05。

组别A组（n=9）B组（n=14）C1组（n=12）C2组（n=12）总路程（mm）4 295.90±515.06 4 107.36±746.34 4 716.15±1 501.40 4 302.91±1 019.25中央区域时间（s）2.85±1.81 5.52±2.73*4.73±3.46 2.34±0.62中央区域路程（mm）108.91±56.58 134.44±47.30 140.89±100.80 91.54±74.26

3　讨论

本试验中采用了2种行为学效应模型考察脑功肽口服液的抗焦虑作用，其中EPM试验是抗焦虑研究中公认结果可靠的模型［7］，动物具有探究性，放入迷宫后会主动探究开臂，但又惧怕开臂中高悬敞开的环境，抗焦虑药能增加动物在开臂的探究活动，而致焦虑剂则相反。动物OE%与OT%是该模型的重要指标，抗焦虑剂通常会增加动物OE%值与OT%值，而不影响总入臂次数与时间。本试验结果显示，地西泮组与脑功肽高剂量组对小鼠OE%值与OT%值均有显著升高作用，而总入臂次数与时间无显著性差异，说明两者均有抗焦虑作用。

在OFT试验中，大鼠进入敞箱后因其对新异环境的恐惧而主要在敞箱内靠周边的区域活动，而抗焦虑药能明显增加大鼠进入敞箱中央区的次数及在中央区停留的时间［8］。本试验结果显示，地西泮能显著增加大鼠中央区域活动时间，显示地西泮具有一定的抗焦虑作用，而高剂量与中剂量脑功肽对大鼠的中央区域活动时间与路程均无影响，说明在此模型下高剂量与中剂量脑动肽未能显示出抗焦虑作用。但大鼠OFT试验应用于焦虑模型时间不长，其稳定性及可靠性有待进一步验证。

EPM试验与临床观察结果均显示，脑功肽口服液有一定的抗焦虑作用，在进一步的研究中，将考察脑功肽口服液对动物脑组织中单胺类和氨基酸类神经递质的影响［9-11］，以揭示其抗焦虑作用的具体机制。

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［6］徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学［M］.第3版.北京：人民卫生出版社，2006：817.

［7］BarbalhoCA，Nunes-de-SouzaRL，Canto-de-SouzaA.Similaranxiolytic-likeeffects following intra-amygdala infusionsofbenzodiazepine receptoragonistand antagonist：evidence for the releaseofan endogenousbenzodiazepine inverse agonist in mice exposed to elevated plus-maze test［J］. Brain Res，2009，1 267：65-76.

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Experimental Study of Anxiolytic Effects of Naogongtai Oral Liquid

Lei Jian，Hu Changpeng，Xing Mao，Xiang Junma，Zhang Rong
（Department of Pharmacy，Xinqiao Hospital，Third Military Medical University，Chongqing，China 400037）

Objective To assess the anxiolytic effects of Naogongtai Oral Liquid through animal behavior experimental model.M ethods The elevated plus maze（EPM）test and open field test（OFT）were adopted；in EPM test the observation indicators were open arm entry%（OT%），open arm time%（OE%），total entry and total entry time，in OFT the observation indicators were total path，central area time，central area path.These indicators were observed in blank control group，diazepam group，Naogongtai high dose group and Naogongtai medium dose group.Results In EPM test，OT%and OE%were（51.23±17.47）%and（53.28±14.96）%respectively in diazepam group，and（38.67±15.23）%and（57.43±8.16）%respectively in Naogongtai high dose group，both of them were significantly higher than the blank control group（P＜0.05）.In OFT，the central area time was significantly increased in diazepam group（P＜0.05）.Conclusion The EPM test shows that Naogongtai Oral Liquid has anti-anxiety effect.

Naogongtai Oral Liquid；anxiety；elevated plus maze test；open field test

R285.5；R286

A

1006-4931（2015）18-0019-02

雷健，男，硕士研究生，主管药师，主要研究方向为药物分析与质量标准研究，（电话）023-68774770（电子信箱）fengxiao218@163.com；张蓉，硕士研究生，副主任药师，研究方向为临床合理用药与分析，本文通讯作者，（电话）023-68755580。

2014-09-16；

2015-03-15）

*重庆市卫生局中医药科技项目，项目编号：ZY20132151。