依达拉奉注射液中有关物质检查方法的研究

孙　莹*　姜　波　林大专　孙全乐

（1 长春医学高等专科学校，吉林 长春 130031；2 长春海悦药业有限公司，吉林 长春 130021）

依达拉奉注射液中有关物质检查方法的研究

孙莹1*姜波2林大专1孙全乐1

（1 长春医学高等专科学校，吉林 长春 130031；2 长春海悦药业有限公司，吉林 长春 130021）

目的 建立依达拉奉注射液中有关物质的控制方法。方法 采用高效液相色谱法，通过筛选色谱条件确定有关物质方法i和有关物质方法ii。结果 在筛选出的色谱条件下杂质能有效检出并与依达拉奉峰完全分离。结论 该方法可作为有效控制依达拉奉注射液中杂质的方法。

依达拉奉注射液；高效液相色谱法；有关物质

依达拉奉注射液是日本三菱东京制药株式会社开发的中枢神经系统用药，于2001年在日本首次上市。国内外文献相继报道其有关物质的研究［1-3］，主要采用HPLC法控制。但国内质量标准中测定有关物质的色谱条件并不完善，不能有效检出本品的有关物质。本项研究依据日本最新公布的依达拉奉注射液质量标准，结合本品合成工艺，对可能产生的杂质及制剂的降解产物进行分析，筛选适合的色谱条件，为建立真正能够有效控制产品质量的标准提供试验依据。

1　仪器与试药

1.1主要仪器：岛津LC-15C，二极管阵列检测器（检测波长240 nm）；有关物质（i），C18柱（岛津Wondasil，长250 mm，内径4.6 mm，填料粒径5μm）；有关物质（ii），C18柱（岛津Wondasil，长150 mm，内径4.6 mm，填料粒径5μm）；微电脑光照培养箱（上海博迅实业有限公司，SPR-250B-G）；数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，KQ-300DA）。

1.2主要试药：甲醇（Fisher Scientific，色谱级）；冰醋酸（西陇化工股份有限公司，AR）；氨水（北京化工厂，AR）；盐酸（西陇化工股份有限公司，AR）；过氧化氢（北京化工厂，AR）；氢氧化钠（北京化工厂，AR）。

2　方法与结果

2.1色谱条件筛选：文献报道本品氧化破坏杂质较多［3］，故用氧化破坏后的同一份样品进行有关物质检查，色谱条件（表1）的筛选，由图谱可知，国内标准Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ有关物质峰形较差，有关物质检出较少，国内标准Ⅳ依达拉奉主峰前面杂质分离较差，日本标准中有关物质峰形较好，与主峰分离度也符合要求，所以选择日本方法。

2.2方法：按照日本标准，进行有关物质的检查。取某药厂依达拉奉注射液（批号为20120301）作为供试液；精密量取1mL置50mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取1mL置20mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。精密量取供试品溶液和对照溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，结果有关物质i单个杂质为0.02%；有关物质ii相对保留时间0.3杂质为0.03%；相对保留时间0.4杂质为0.01%；其他单个杂质最大为0.01%，均符合规定要求。

2.3方法学验证

2.3.1专属性

2.3.1.1未破坏样品：取供试品溶液、对照溶液、阴性溶液、溶剂，按有关物质方法测定，结果见表2。

2.3.1.2光照破坏样品：取供试品1mL，置5mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，置强烈日光下照射16 h，结果见表3。

2.3.1.3高温破坏样品：取供试品1mL，置5mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，置98 ℃水浴中加热6 h，取出，放冷，再用流动相定容至刻度，结果见表4。

2.3.1.4酸破坏样品：取供试品1mL，置5mL量瓶中，加1mol/L盐酸1.5mL，置98 ℃水浴中加热5 h，取出，放冷，再加1mol/L氢氧化钠1.5mL中和，加流动相稀释至刻度，结果见表5。

2.3.1.5碱破坏样品：取供试品1mL，置5mL量瓶中，加1mol/L氢氧化钠1.5mL，置98 ℃水浴中加热5 h，取出，放冷，再加1mol/L盐酸1.5mL中和，加流动相稀释至刻度，结果见表6。

2.3.1.6氧化破坏样品：取供试品1mL，置5mL量瓶中，加1%过氧化氢1mL，置60 ℃水浴中加热1.5 h，取出，放冷，用流动相稀释至刻度，结果见表7。

表1　国内外不同标准有关物质检查色谱条件

表2　未破坏样品测定结果

表3　光照破坏样品测定结果

表4　高温破坏样品测定结果

表5　酸破坏样品测定结果

表6　碱破坏样品测定结果

表7　氧化破坏样品测定结果

2.3.2检测限：取供试品用流动相逐步稀释，精密量取10μL注入液相色谱仪，样品的主峰高为基线噪音的3倍，计算检测限，有关物质方法i检测限为0.04 ng，有关物质方法ii检测限为0.05 ng。

2.4耐用性

2.4.1溶液稳定性

2.4.1.1有关物质方法i溶液稳定性：取供试品溶液和对照溶液，在10 h内于不同的时间进样，考察溶液稳定性，结果对照溶液峰面积 RSD为0.12%；杂质峰面积RSD为1.0%；主峰面积RSD为0.22%，杂质数1个。表明有关物质方法i稳定性良好。

2.4.1.2有关物质方法ii溶液稳定性：取供试品溶液和对照溶液，在12 h内于不同的时间进样，考察溶液稳定性，结果对照溶液峰面积 RSD为1.1%；杂质峰面积RSD为1.7%；主峰面积RSD为0.12%，杂质数5个。表明有关物质方法ii稳定性良好。

2.4.2色谱条件变化对有关物质的影响：按有关物质测定方法，每个条件各测试1次，考察不同色谱柱、流速变化、柱温、pH值等的变化，对测定结果的影响，有关物质方法i色谱条件发生变化时，杂质数都是1个，总杂质量都为0.02%，对测定结果没有影响。有关物质方法ii，当pH值变化时，对测定结果有影响，即pH=5.5时，杂质数5个，总杂质量为0.05%，pH=5.3时，杂质数4个，总杂质量为0.09%；pH=5.7时，杂质数5个，总杂质量为0.07%。不同色谱柱、流速变化、柱温对测定结果均没有影响，即杂质数都是5个，总杂质量都为0.06%。

3　结 论

上述试验结果表明依达拉奉注射液主要降解途径是高温与氧化，为了防止依达拉奉氧化，在制剂中加入抗氧剂并全程充氮；通过破坏试验并参考日本依达拉峰注射液质量标准，确定有关物质方法i色谱图运行时间为主成分峰保留时间的7倍，有关物质方法ii调整依达拉奉保留时间约11min，色谱图运行时间为主成分峰保留时间的2.5倍；破坏出的杂质基本上在240 nm附近有最大吸收，所以检测波长选择240 nm；依达拉奉与杂质能得到较好的分离，并能检测出破坏试验中产生的降解产物，说明方法专属性强，可用于依达拉奉注射液的有关物质的检查。

4　讨 论

4.1有关物质方法i氧化破坏时杂质较多，当流速为1.0mL/min，tR=6min时，有关物质分离的不是很好，当流速为0.8mL/min，tR=7min时，氧化破坏有关物质分离的较好；有关物质方法ii当流速为1.5mL/min，tR=9min时，碱破坏时有关物质分离的不是很好，当调整流速使tR=11min时，碱破坏时有关物质分离的很好。

4.2依达拉奉注射液在光照条件下比较稳定，5000lx光照7 d，有两个新的杂质产生，新产生杂质的量为0.01%，在强烈日光下照射16 h，有两个新的杂质产生，新产生杂质的量为0.02%，均比较小。

4.3依达拉奉注射液通过高温破坏，产生新的杂质，最大杂质达到4.10%。

4.4依达拉奉注射液在酸破坏条件相对稳定，通过酸破坏，虽有新的杂质产生，但杂质均较小。

［1］ 古铁波，陈贵平.高效液相色谱法测定依达拉奉注射液中依达拉奉及有关物质的含量［J］.中国当代医药，2013，20（21）：61-65.

［2］ 汤海燕，朱正怡.高效液相色谱法测定依达拉奉注射液的含量及其有关物质［J］.海峡医药，2010，22（5）：77-78.

［3］ 赵珍珍，党小佛.RP-HPLC法测定依达拉奉的含量和有关物质［J］沈阳药科大学学报，2012，29（5）：359-363.

R927.2

B

1671-8194（2015）10-0066-02

吉林省教育厅“十二五”科学技术研究资助项目（项目编号：545）