新型免疫分子TIPE2对肝癌细胞转移与侵袭的影响探析

蒋玲玲

【摘要】目的：对新型免疫分子TIPE2在肝癌患者癌细胞转移、侵袭中的影响情况进行调查。方法：选取我院2012年9月-2014年9月间31例肝癌患者，同时选择同期来院体检的35例健康人员，采用实时荧光定量发对两组人员外周血细胞中TIPE2表达情况进行检测，并将结果进行比较。结果：正常人群的外周单核细胞水平明显高于肝癌患者，两组比较有明显差异，P<0.05。肝癌患者平均细胞距离为（795±21.6）μm；健康人群平均细胞距离为（474±32.4）μm，两组比较存在明显差异，P<0.05。肝癌患者的细胞迁移数目平均为（493±11.2）个；健康人群的细胞迁移数目平均为（1492±46.3）个，两组比较存在明显差异，P<0.05。结论：TIPE2可能参与到肝癌疾病的发生、发展过程中，对肝癌细胞转移和侵袭造成影响。

【关键词】新型免疫分子TIPE2；肝癌；细胞转移

【中图分类号】R735.7 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）02-0626-01

近年来，我国肝癌的发病率越来越高，严重影响着人们的生活和健康。有研究表示TIPE2是一种新型免疫分子，其在肝癌标本中的表达水平非常低，进而认为其有可能参与了肝癌的发病过程。为进一步了解TIPE2与肝癌细胞的关系，我院在2012年9月-2014年9月间对新型免疫分子TIPE2在肝癌患者癌细胞转移、侵袭中的影响情况进行调查，现将结果汇报如下。

1.资料与方法

1.1一般资料

选取我院2012年9月-2014年9月间31例肝癌患者，患者平均年龄为（52.1±5.6）岁，男性14例，女性17例；同时选择同期来院体检的35例健康人员，所有人员平均年龄为（50.6±6.2）岁，男性15例，女性16例。

1.2一般方法

1.2.1标本采集：出去患者静脉血，所有血液均进行抗凝处理。将血液加入生理盐水中稀释，而后缓缓滴入淋巴细胞分离液上层，在3000r/min条件下离心振荡，时间为15min，提取白膜层，收集标本中的外周单核细胞。

1.2.2实时荧光定量实验：提取外周单核细胞后采用TRIzol 法提取标本总RNA，根据试剂盒说明将其转录成CDNA待用。

1.2.3基因转染、阳性细胞克隆筛选：采用Lipo2000脂质体对pcDNA3.1-TIPE2表达载体和空白载体细胞进行瞬时转染，所有操作流程均按照试剂盒说明进行。转染后的细胞放置48h，而后进行培养基抗性筛选实验。

1.2.4划痕试验：BEL7402-TIPE2 细胞和BEL7402-pcDNA3.1 对照组细胞培养过夜，每组3复孔，待所有细胞贴壁后将口径为10μl的枪头放置在孔板中间，至上而下做划痕，划痕宽度为10μl，而后采用PBS清洗漂浮细胞，共清洗三次。清洗后更换无血清的培养基，而后进行观察。測量划痕前后距离并分析细胞迁移距离。

1.2.5 Tran swell实验：将BEL7402-TIPE2和对照组细胞分别接种于24孔板上，孔板的孔径为8μm，每组3复孔，孔板下层放置含有10%胎牛血清的培养基，培养时间为24h。培养后用棉签擦除未迁移细胞，采用甲醇固定10min后清洗，而后采用1%结晶紫染色，时间为20min，干燥后放置显微镜下观察。

1.3数据统计

文中数据采用spss18.0软件进行处理，计数资料采用%表示，资料采用卡方检验；计量资料采用 X±s表示，资料采用t值检验，P<0.05认为差异具有统计学意义。

2.结果

2.1两组人员外周血单核细胞水平：图a为正常人群外周单核细胞水平，图b为肝癌患者外周单核细胞水平，正常人群的外周单核细胞水平明显高于肝癌患者，两组比较有明显差异，P<0.05（详见下图）。

2.2划痕试验：肝癌患者平均细胞距离为（795±21.6）μm；健康人群平均细胞距离为（474±32.4）μm，两组比较存在明显差异，P<0.05（详见下表1）。

3.讨论

TIPE2 与 TNFAIP8L （TIPE）、TNFAIP8L1（TIPE1）和 TNFAIP8L3（TIPE3）均是TNFAIP8家族成员。现阶段TIPE2蛋白的研究主要在小鼠中，很少在人体标本中进行研究。TIPE2蛋白主要在免疫器官和免疫细胞中表达，研究表示，TIPE2在Toll样受体和T细胞受体信号活化中呈高反应性表达。在脂多糖异常导致的脓毒血症小鼠中，TIPE2 敲基因小鼠组存在明显的休克反应，在研究中发现TIPE2 敲基因水平降低会导致淋巴细胞活化，进而导致TNF-α、IL-6、IL-12 和 IFN-γ分泌水平提升。在研究中发现TIPE2 敲基因能够对固有免疫细胞起到负向调控的作用，其不仅能够激活cacpase-8细胞，同时能够对活化蛋白 AP-1、核因子 NF-κB进行抑制，加速细胞凋亡。在小鼠实验中，TIPE2 敲基因能够使小鼠的梗塞面积增加。上述种种结果均表明TIPE2 敲基因能够对蛋白起到负调控的作用。而人体的TIPE2 基因主要位于染色体中，其是一种由氨基酸构成的物质，结构与死亡受体非常相似。有研究表示TIPE2 在很多慢性炎症中发挥着非常重要的作用，且在一定程度上推进了疾病的发展进程。

近年来，人们在研究中发现TIPE1在肿瘤患者中的表达率存在异常，进而认为其可能参与了肿瘤疾病的发生和发展。TIPE已被证实为一种新的癌基因，在乳腺癌和肺癌疾病的发展中有着非常重要的作用。虽然TIPE1与TIPE2在结构上非常相似，但作用却存在不尽相同，TIPE2有可能具有抑制肿瘤发展的作用，在研究中发现TIPE2的水平明显异常，因此考虑其可能参与了肝癌的疾病进程。TIPE2能够与Ras进行结合，进而对癌细胞进行抑制。在我院的调查结果中显示：肝癌患者平均细胞距离为（795±21.6）μm；健康人群平均细胞距离为（474±32.4）μm，两组比较存在明显差异，P<0.05。肝癌患者的细胞迁移数目平均为（493±11.2）个；健康人群的细胞迁移数目平均为（1492±46.3）个，两组比较存在明显差异，P<0.05。对结果进行总结后可以认为，肝癌患者细胞迁移能力明显下降，侵袭能力明显下降，因此可以认为TIPE2参与了肝癌细胞转移和侵袭过程。

总的来说，TIPE2可能参与了肝癌疾病的发生和发展，因此还需要进行更为深入的研究，了解 TIPE2 与肝细胞肝癌发生发展的具体机制。

参考文献

[1]中华医学会肝病学分会， 中华医学会感染病学分会. 慢性乙型肝炎防治指南（2010 年版）[J].中华肝脏病杂志，2011， 19（1）： 13-24.

[2]曹雪蕾.免疫负调控分子TIPE2在肝细胞肝癌中的的作用及其机制[D].山东大学2014（05）.

[3]王皓.胂瘤相关巨噬细胞促进人原发性肝癌细胞迁移及其相关机制的研究[D].山东大学2014（05）.

[4]Dong QZ， Zhao Y， Liu Y， et al. Overexpression of SCC-S2correlates with lymph node metastasis and poor prognosisin patients with non-small-cell lung cancer[J]. Cancer Sci，2010， 101（6）： 1562-1569.