RSP全自动加样器改造后一次性加样针的选择及加样过程的优化

李永珍　甄志军

【摘要】 目的 评估帝肯RSP150全自动加样仪上针系统改造后使用1000、200、20μl三种不同容量规格的一次性加样针，在不同工作模式下对Anti-HCV酶联免疫吸附实验的影响。方法 利用万分之一的分析天平采用重量法对3种规格加样针，在不同模式下的加样情况进行校验，并对检测结果进行精密度对比分析。结果 20、200μl两种一次性加样针在单吸单分模式下，RSP 8根针测试蒸馏水10 mg（10p1）的CV<3%，均通过精密度试验测试；1000μl单吸单分模式和200与1000μl一吸多分模式的CV>3.0%，8根针精密度都没有通过测试。结论 应用全自动加样仪进行微量加样时，应选用满足微量样本移取精度需要的一次性加样针，并采用合适的加样模式，避免因使用不当容量规格的一次性加样针而导致血液检测质量事故的发生。

【关键词】Tip；全自动加样仪；ELISA

【中图分类号】R466 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）02-0105-02

我站在2010前，先后共采购了两套瑞士帝肯RSP150型加样仪，为了满足卫生部对于加样系统的要求，同时也为了节约成本，我站联系TECAN公司对我站的RSP加样仪进行了上针系统的升级改造，因为全自动加样仪的加样精度与选用不同容量规格的一次性加样针以及加样程序密切相关，特别是对抗-HCV酶免检测实验，因其加样量只有10μl，样本的加样准确性对其最终检测结果影响颇大[1]。针对上述情况，笔者对Anti-HCV检测试剂使用不同规格的加样针进行了加样效果的评估，选择最适合的一次性加样针以及最佳加样方式，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

RSP150全自动加样仪，Metlter AL104分析天平.仪器序列号为1231441134，最小刻度为0.1mg，Tecan LOGIC软件（版本为2.52 均为瑞士TECAN公司产品；蒸馏水（本中心血站检验科自制，密度为1.000）。

1.2 环境条件 温度20～25℃，湿度50%～80%。

1.3 测试方法

在RSP工作台面上固定设置好分析天平，调整分析天平的底座使其平衡：在程序菜单中设定好分析天平的加样位置以及单吸单分的10mg（约10μ1）加样程序和一吸多分的10mg（约10μ1）加樣程序，打开分析天平，选择不同规格的测试针，分别运行两种加样程序.测试从加样通道l开始，共8个通道，每个通道都对不同规格的加样针循环测试15次，记录分析天平的称量数据，求出平均值和变异系数。

1.4 测试标准 RSP全自动加样仪加液10mg（约10μ1） 的CV<3%。

1.5 统计学处理

应用SPSS V13.0软件对结果进行分析，以全自动加样仪使用20μl一次性加样针的单吸单分模式下的结果为对照组，其他各组检测结果分别与对照组结果进行t检验。

2结果

按照1.3的方法进行实验检测后，具体结果见表1。

3 讨论

全自动加样仪是血站检验科最为重要的检验设备[2]，它的应用，解决了血站在大量标本加样和数据传输中的问题，使加样操作过程标准化，减少了人为误差，提高了检测的准确度和特异性，实现了加样过程的可追溯性，有效的保证了血液检测质量。但是，使用永久加样针的全自动加样仪不可避免的会导致阳性标本拖带现象[3，4]，因此，卫生部在《血站实验室质量管理规范》中规定血液标本如需分样完成多项目检测需避免分样或加样过程中样品被污染或稀释[5]。

在RSP全自动加样仪更换为一次性加样针后，选择什么规格的一次性加样针，就成为保证血液检测质量的重中之重。每种规格的加样针均有其最佳分配范围和相应的分配误差，在应用全自动加样仪时，就需要根据各检测项目样本加样量选用合适容量规格的一次性加样以求最佳加样精度，在血站的实际工作中，由于RSP全自动加样仪如更换使用不同容量规格一次性加样针时，都需对仪器和操控软件的加样参数重新进行调整设置，为了避免更换不同一次性加样针后反复调整设置的麻烦，有些血站就直接采用1000μL容量规格的一次性加样针用于上述所有酶免检测项目的样本分样或加样操作。但是我们认为，这样做是有很大的风险的，尤其是对于HCV实验，因抗-HCV酶免检测的样本加样量为微量10μL，在更换加样针中，所受影响最大，因此，我站在对RSP全自动加样仪上针系统改造后，重点对不同规格一次性加样针对Anti-HCV的微量样本分配结果的影响进行评估。

由表1可知，使用20、200、1000μL一次性加样针进行10μL加样单吸单分模式检测，20、200μL一次性加样针分配试剂实验检测结果CV<3%，且各通道P>0.05；精密度无差异，表明选用20、200μL规格加样针加样准确度符合实验要求。但1000μL一次性加样针分配试剂实验检测结果孔间CV均>3%，各通道的分配结果与20μL加样针分配结果差异较大。这就表明1000μL规格一次性加样针后在移取10μL微量样本时加样精度难以保证，导致加样时各孔间精密度变化极大，影响酶联免疫吸附实验正确结果。同样，在使用200、1000μL一次性加样针进行10μL加样一吸多分模式检测时，200、1000μL一次性加样针一吸多分实验检测结果与20μL一次性加样针单吸单分实验检测结果比较，CV均>3%，各通道的分配结果与20μL加样针分配结果差异较大（P<0.05）；精密度有明显差异。这同样表明200、1000μL规格一次性加样针后在一吸多分模式下移取10μL微量样本时加样精度难以保证，会导致加样时各孔间精密度变化增大，影响酶联免疫吸附实验正确结果。

根据以上实验结果，并参考我站采购耗材的实际情况，我科在应用升级改造后的全自动加样仪进行抗-HCV酶联免疫吸附实验检测加样时，坚持使用200μL一次性加样针采用单吸单分的模式对Anti-HCV进行加样，虽然这样做，会增加加样针的消耗，延长加样工作时间，但是，我们认为，只有这样，才能满足10μL微量样本移取的精度要求，保证检验质量。

参考文献

[1] 中华人民共和国国家计量检定规程（JJG 464—2006）

[2] 李荣，庞丽丽，杜新风.全自动加样仪的应用[J].中国医药指南，2011.9（20）：171-172.

[3] 段友斌，寸伟，裘俊海，等.全自动加样系统抗-HIV阳性样本拖带现象对实验的影响及其解决方案[J].中国输血杂志，2007.20（5）：385.

[4] 孙振秀，于仁波，马秀敏，等.对加样针至高滴度阳性标本污染酶标板后孔的观察[J].中国输血杂志，2005.18（1）：46-47.

[5] 中华人民共和国卫生部，血站实验室质量管理规范[S].2006.