中药组方治疗鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌混合感染试验

徐光科 吴海港 陈宏智

摘要：对“加味附子泻心汤”治疗鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌混感病例进行临床拆方治疗试验，选用死亡率、治愈率、免疫器官指数（脾脏指数、腔上囊指数、胸腺指数）、血液生化指标（谷丙转氨酶、总胆固醇、总蛋白）作为临床评价体系对“加味附子泻心汤”治疗效果进行综合评价，最终确定：黄连、黄芩、茵陈、丹参、川芎、附子为最佳有效组方。治愈率86.3%、保护率90.7%；组方能显著提高提高感染鸭只的免疫力、提高免疫指数。降低感染鸭只血液胆固醇含量，抑制肝细胞脂质过氧化反应，减轻肝细胞的坏死。

关键词：鸭疫李氏杆菌；大肠杆菌；中药；治疗效果

鸭疫里氏杆菌病是由鸭疫里氏杆菌引起的鸭、鹅、火鸡等多种禽类的一种急性或慢性传染病。该病呈急性或慢性败血症过程，以纤维性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪性输卵管炎为特征。

鸭大肠杆菌病“是由禽致病性大肠杆菌所引起的局部或全身性感染的疾病，两种病在临床上常呈混合感染”且二者在临床症状病理变化及流行病学等方面都存在诸多相似之处不易区别。

本研究根据中兽医扶正驱邪、标本兼治的理论，以清热燥湿、平肝利胆、活血化瘀、温中为治则，选取黄连、黄芩、茵陈、叶下珠、丹参、川芎、附子等中药按照一定比例组成组方，对人工感染鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌的鸭只进行治疗试验，观察中药复方治疗效果，从而为筛选出疗效确实中药组方提供坚实的理论和临床依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 原料试验动物为7日樱桃谷鸭购信阳华英集团。试验用菌种RA，血清型为（1型），E.coli，血清（078）购自中国兽药监察所。黄连、黄苓等8味中药购自信阳市药材公司；试验培养基为TSA胰酶大豆琼脂（TSA）、胰酶大豆肉汤（TSB）、麦康凯培养基。

血清总胆固醇、谷丙转氨酶和血清总蛋白质测定试剂盒。（南京建成科技有限公司产品）

1.1.2 主要仪器专用培养皿；全自动生化分析仪（SYNCHRON CX5）；紫外一可见分光光度计（UV-1601）；RE10-50旋转蒸发仪（上海亚荣）。

1.2 中药组斤和中药药液的制备

1.2.1 中药组方根据中药组方原则，做成6个试验组分别为：方I黄连、黄芩、叶下珠、丹参、川芎；方Ⅱ黄连、黄芩、茵陈、丹参、川芎；方Ⅲ黄连、黄芩；方Ⅳ黄连、黄芩、叶下珠、丹参、川芎、附子；方V黄连、黄芩、茵陈、丹参、川芎、附子；方Ⅵ黄连、黄芩、附子。

1.2.2 中药药液的制备准确称取中药粉末（过20目筛），用10倍温水浸泡12h，100℃煎煮三遍，300目纱布过滤，，合并药液，用旋转蒸发仪器浓缩中药液浓度为1g/mL，加1%的山梨酸钾，分装，灭菌备用。

1.3 试验方法

1.3.1 菌悬液的制备

将鸭疫里默氏杆菌接种于10mL的灭菌大豆胰酶肉汤+2%的小牛血清培养基中，在37℃恒温箱中孵育增菌30h后作为感染原菌液；将原菌液用灭菌生理盐水稀释至1×l0⁵CFu/mL备用。

大肠杆菌菌种接种于麦康凯平板，37℃、24h后，挑选出典型菌落，放于肉汤中，在37℃环境下培养46h取出；用生理盐水校正至1麦氏比浊管标准，使其含菌量为1×l0⁵CFu/mL备用。

1.3.2 抗感染疗效试验

选7日龄淮南麻鸭随机分成8个组，每组50只一组，将分好组的试验鸭除空白对照组外每组鸭腹腔注入预试验中的正式攻毒鸭疫里默氏杆菌菌液1×l0⁵CFu/mL，0.5mL，大肠杆菌1×l0⁵CFu/mL，0.5mL于感染后记录7d内鸭的死亡数；死亡鸭及时解剖。每组分别灌服中药组方I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V、Ⅵ（感染后2d给药、1.5mL/羽、每天两次连用3～5d），Ⅶ组为模型对照组（只感染细菌不给药），Ⅷ组为空白对照（不感染细菌也不给药，正常饲养）

各鸭组在相同条件下隔离饲养，连续观察7d统计鸭的死亡率、治愈率、有效率。

1.3.3 生理生化试验

攻毒治疗试验结束后3d，从各组存活鴨只中随机抽取5只鸭、清晨6点采血，4000r/min转离心，收集血清测定血清谷丙转氨酶，总胆固醇和血清总蛋白。鸭只采血采血后称重、屠宰，取脾脏、胸腺和腔上囊，去除结缔组织后称重，计算免疫器官指数。免疫器官指数=器官重（g）/活体重（kg）

1.4 数据处理

试验调查数据均采用SPSS19.0软件进行单因素方差统计分析，试验结果以平均值±标准差）表示。

2 结果分析

2.1 鸭感染细菌后发病情况和病理变化

雏鸭接种菌液后第3-5天，有鸭只死亡，病鸭（出现拉稀、昏睡、食欲减退等临床不适症状）持续增多，到第5-7天，新死亡鸭只持续减少，1周内死亡48.2%。病例剖检，前期死亡鸭只病理症状不明显，后期死亡鸭只肝脏灰黄，个别出现青绿色。其他脏器无明显症状。

2.3 抗感染治疗结果

抗感染试验的结果见表1。从表1可以看出，治疗组的死亡率极显著低于Ⅶ组治愈率、保护率、显著高于Ⅶ组；V组的死亡率最低、治愈率和保护率最高；添加附子各组死亡率低于不添加附子组。

2.4 免疫器官指数

各试验组鸭的免疫器官指数测定结果见表2。由表2可知鸭接种菌株后其脾脏指数、胸腺指数、腔上囊指数相比健康对照组略有降低、差异不显著（P>0.05）。第v组脾脏指数、胸腺指数、腔上囊指数最高和其他各组相比差异显著（P<0.05）；第Ⅱ组胸腺指数、腔上囊指数高于Ⅷ组差异显著（P<0.05）；第v组胸腺指数、腔上囊指数高于第Ⅱ组差异显著（P<0.05）。

2.5 血清生化指标

各试验组鸭的血清生化指标测定结果见表3。由表3可知鸭接种菌株后，总胆固醇显著上升（P<0.05），谷丙转氨酶、总蛋白含量变化不大，差异不显著（P>0.05）；鸭灌服中药后总胆固醇量有所下降和第Ⅶ相比差异显著（P<0.05）；第V组降幅明显和其他各组相比差异显著（P<0.05）。灌服第V组中药能显著降低发病鸭的总胆固醇含量。

3 结论与讨论

本试验以7日龄淮南麻鸭为靶标动物、以RA，血清型为（1型），E.coli，血清（078）为毒株攻毒、7日内动物陆续发病死亡率48.2%；病死鸭剖检以纤维性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪性输卵管炎为特征；发病鸭胸腺指数、脾脏指数、腔上囊指数略有下滑，差异不显著；发病鸭只血清总胆固醇含量下降明显（P<0.05）。

本试验对“附子泻心汤”进行了拆方和加减治疗试验，不同用药组病鸭死亡率从9.3%～17.2%，治愈率73.6%～86.7%，保护率87.3%～90.7%。第v组脾脏指数、胸腺指数、腔上囊指数最高和其他各组相比差异显著（P<0.05）；鸭灌服中药后总胆固醇量有所下降和第Ⅶ相比差异显著（P<0.05）；第V组降幅明显和其他各组相比差异显著（P<0.05）。方Ⅱ；治疗效果方V>方Ⅳ>方I>方Ⅵ>方Ⅲ>方Ⅱ。

本试验证实黄连、黄芩、茵陈、叶下珠、丹参、川芎附子组方对鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌混合感染有很好的治疗效果，促进鸭免疫器官的发育、改善病鸭的血清生化指标。