隋国香
1胚胎因素
胚胎采集。采胚方法可选择输卵管采集法和子宫采集法。输卵管采集法一般是在供体母羊受精后前4天使用,尽管具有很高的回收率,但术后非常容易导致卵巢和输卵管伞出现黏连,从而使卵子以后的接收和运行过程受到影响,如果出现双侧同时黏连的现象,甚至可能使其终生无法受孕。目前,通常采用子宫采集法收集胚胎,通常在受精后的第6天进行,虽然这种方式的回收率比输卵管回收略低,但收集胚胎的胚龄稍大,同时经过子宫环境的自然选择,即使有一些胚胎可能发生退化,但移植存活的胚胎后能够使受体母羊具有很高的妊娠率。
胚胎形态。正常胚胎的形态是透明带完整、外观饱满,卵间隙较小,卵裂球界限清晰、大小均匀,同时细胞质也很均匀,没有明显的颗粒状物。如果胚胎发育不正常,其透明带发生变形,外观不圆整,卵间隙较大,卵裂球界限不清楚,细胞质比较浑浊,存在破碎的块状物。通常来说,胚胎具有正常的形态和发育时期,移植后具有较大的可能性发育成活。但是并不是指形态稍差的胚胎完全不能够用于移植胚胎,这是由于胚胎早期的调整性较大,一些小的缺陷能够在之后发育过程中進行弥补,然后再继续发育。因此,只要胚胎具有形态基本正常的卵裂球,即使形态存在一些其他问题,也能够用于移植,常常也能够使受体母羊受孕。
胚胎移植的部位。在胚胎移植过程中,移植的部位要根据胚胎的实际日龄以及采集前所在的部位来确定。通常来说,胚胎移植部位要与采集胚胎的部位相对应。在输卵管内移入胚胎时,在其深部移入具有较高的受胎率。在子宫角移入胚胎时,在子宫角项部也就是输卵管一侧的子宫角接合处附近移入5~6日龄的胚胎的存活率要高于移入到子宫角中部,之后随着胚胎日龄的增长,胚胎的移植部位也要相应的朝子宫角基部移动。一般来说,母羊发情后的第7天卵巢静脉内的孕酮浓度达到最高,并且能够相对恒定地持续到第15天,因此使母羊发情期的后段,受体与供体将有可能存在一段幅度较大的同步时间,这样能够保证移植成功率较大。
2受体母羊
对受体母羊进行选择时,以选细毛绵羊为最好,这是由于细毛绵羊具有较强的季节性发情。胚胎移植通常选择在9~12月份进行,此时细毛绵羊机体正处于体质健壮、精力旺盛的阶段,能够使移植妊娠率较高。而其他品种母羊具有较差的同期发情性,因此导致黄体形成不一致的成熟度。另外,受体母羊最好选择已经生产一胎以上的经产母羊,年龄是2~4岁。如果受体母羊年龄较大,大部分会由于子宫内膜发生损伤、体质较差等原因而导致移植受胎率受到影响。另外,受体母羊在进行胚胎移植的前后必须加强饲养管理,这是由于受体母羊饲养管理的好坏直接与受胎率存在关系,也就是受体母羊胚胎移植前后的营养状况是否适宜会对整个生殖过程产生直接影响。如果受体母羊膘情良好,大多数胚胎着床后都能够正常发育成活。但如果营养条件较差,不利于胚胎着床和羔羊产出后的生长,使受体胚胎移植效果明显降低。
3移植操作
移植胚胎时可采取手术法或者非手术法。采取手术法移植胚胎能够损伤供体母羊,导致卵巢、子宫以及周围组织出现黏连,从而使优良种母羊重复使用的次数减少,不过采取腹腔镜技术进行非手术移植能够将这些缺点克服。据报道,当供、受体母羊的非同期发情时间在8h以内,采取腹腔镜移植胚胎的妊娠率基本上与正规手术法移植相同。但是要在生产实践中推广非手术法胚胎移植,还需要对操作技术进一步熟练,使用的仪器设备还要不断改进,如此才能使妊娠率提高效率。供体和受体母羊术后必须进行精心护理,尽可能防止发生应激反应。供体母羊术后发情属于正常现象,但受体母羊正好与之相反,如果术后出现发情,说明没有成功妊娠,也就是移植失败,这可能是由于胚胎在移植过程中丢失或移植后死亡造成。
4应激因素
在胚胎移植过程中,受体母羊如果改变饲养管理,或者气候温度发生改变,或者手术前的处于饥饿状态等,这些应激因素都能够导致机体出现非特异性应答反应,引起其体内的黄体出现退化,进而对胚胎的正常着床和发育产生影响。如果受体母羊处于持续的应激情况下,机体内的胎盘激素、褪黑素会失去活性,进而影响黄体状态,最终使胚胎的生存受到影响。另外,如果温度过高,能够使受体母羊减少分泌孕酮及促乳素,造成胚胎迟缓发育,甚至可能中止妊娠。因此,胚胎移植最好不要在7~9月份温度过高的阶段进行。