麦冬酯类提取物的分离鉴定

赵长春 袁艺刚

【摘   要】 麦冬为常见传统中药材，具有生津润肺、养阴清热等功效，多用于治疗热病伤津，心烦口渴等症。近年来，国内外学者对麦冬进行了广泛研究，从麦冬类植物中分得45种皂甘，21种高异黄酮等成分。临床和药理学研究表明麦冬汤剂及注射剂对于治疗冠心病、心绞痛有一定疗效，麦冬、山麦冬注射液能显著提高小鼠的抗缺氧能力和抗实验性心律失常能力。本研究旨在建立一种麦冬酯类提取物的分离鉴定方法，将有助于麦冬类药物的研究与开发。

【关键词】 川麦冬;高异黄酮;甾醇;提取;分离;重结晶;结构鉴定

【中图分类号】 R282.5    【文献标识码】 A

2010年版中国药典收裁百合科植物麦冬（Ophiopongo  japonicus）一种。据文献记载和实地调查，全国各地有以麦冬或野麦冬为名的沿阶草属（Ophiopion）和山麦冬属（Liriope）植物多种。目前，国内主要流通的是麦冬的块根，约占46%。其中，大多为栽培品种，主产于四川绵阳、三台和浙江慈溪、肖山地区，分别称川麦冬和杭麦冬。近年来，产于湖北襄阳地区的湖北麦冬（Radix Liriopis Proliferae）销售量逐年增多，约占31%，且野生资源丰富，有超过川麦冬和杭麦冬的趋势。其他品种包括短葶山麦冬L.muscari （约占7%），山麦冬L.Spicata（约占4%）、沿阶草O. Bodilieri（约占6%）、阔叶山麦冬L.Platyphulla（约占9%）的块根。此外，还包括间型沿阶草O.Intermedies、连叶沿阶草O.Bockianus、短药沿阶草O.Angustifoliatus、四川沿阶草O.Szochuanensis、狭叶沿阶草O.Stenophyllus、西南沿阶草O.Mairei等的块根（约占7%），且多为数种植物块根的混合品，主要为地方用药[1，2]。本实验采用的是四川三台产麦冬，即俗称的川麦冬。

我国及日本学者做过大量研究，主要药效成分有沿阶草皂甘（ophiopogonin） A、B、C、D，b-谷甾醇，豆甾醇和酚类物质（包括高异二氢黄酮类）等[3]。研究表明麦冬皂苷在抗心脑血管疾病、抗衰老、改善学习记忆障碍、抗肿瘤、抗辐射、抗炎、免疫调节、镇咳、改善肝肺病理性损伤等方面具有一定药理作用[4]。本实验是在对麦冬有效成分的追踪下进行了分离工作，以期变复杂的中药成分为简单的单一化合物。

1  仪器和试剂

400 Hz氢谱核磁仪，400 Hz碳谱核磁仪，硅胶柱，Sephadex LH-20柱;乙醇，乙醚，乙酸乙酯，正丁醇，氯仿，甲醇。

2  实验部分

2.1  提取  麦冬的提取过程为，取绵麦冬数十克用乙醇提取[5]，浓缩液呈咖啡色，无醇味。在2个大试剂瓶中用乙酸乙酯进行萃取，前六次用量为1500ml，以后每次每瓶1000ml，共11次，取少量乙酸乙酯溶液挥干于紫外灯下检查，无荧光则萃取完毕。乙酸乙酯层减压浓缩，回收乙酸乙酯（T=32，P=0.13Mpa），浓缩液在蒸发皿中干燥，置于干燥器中得乙酸乙酯提取物约50g。

乳化层减压回收乙酸乙酯，残留水溶液收集在一起，与分液漏斗中用正丁醇单独萃取至醋酐-浓硫酸反应阳性现象不明显。

水层在大试剂瓶中用正丁醇萃取[6]，共13次，第一次每次每瓶各用1500ml，以后12次每次每瓶各用1000ml，取少量正丁醇溶液和水溶液分别挥干，作醋酐-浓硫酸反应，两者的阳性现象均不明显，则萃取完毕。（a）水层是橙红色，澄明度好。（b）正丁醇层件压浓缩，回收正丁醇。

2.2  分离  乙酸乙酯提取物湿重50g，取其中的20g过硅胶柱[7]。用400g硅胶进行柱层析，分别以氯仿，氯仿-甲醇9：1，8：2，7：3，甲醇洗脱。收集得到20个流分。第7份用石油醚洗去强亲脂部分，再用甲醇洗去极性较大的部分，余下部分用氯仿溶解，过Sephadex LH-20柱，脱去色素，浓缩，用甲醇热溶重结晶，得浅黄色针晶1#。第12部分用石油醚洗去强亲脂部分，再用甲醇洗去极性较大部分，得到白色固体。此固体用95%乙醇进行热溶，过滤，浓缩，得白色粉末2#。第8份，先用石油醚洗去强亲脂部分，再用甲醇洗去极性较大部分。剩余部分用氯仿溶解，过Sephadex LH-20柱，得4份样，将第3份再过Sephadex LH-20柱纯化，得到化合物3#。

2.3  结构鉴定  白色粉末2#，它的NMR图谱与b-谷甾醇相同，在薄层层析中其Rf值与b-谷甾醇完全一样，故认为其为b-谷甾醇。

浅黄色针晶1#，从核磁谱可看出，浅黄色针晶是由两个化合物所构成，二者的比例是0.78：1;6，8-二甲基-5，7-二羟基-4甲氧基-二氢高异黄酮（a）和6，7-二甲基-5，7-二羥基-2，4-二羟基-二氢高异黄酮（b）。化合物（a）的CNMR为2-C 69.4，3-C 46.8，4-C 198.4，5-C158.3，6-C 104.6， 7-C 160.3， 8-C 101.5， 9-C 158.3， 10-C 101.5，11-C 32.6，6，8-CH3 8.5，1-C 130.6， 2-C 130.6， 3-C 114.5，4-C 158.3，5-C 114.5，6-C 130.6，4-Ome 55.2.其HNMR有2A-4.3（dd），2B-4.2（dd），3H-3.0（dd）  11A-3.3（dd），11B-2.8（dd）， 6-CH3-2.3，8-CH3-2.4，  4OMe-3.7，  5-OH-13.1，Φ-H 6.0， 6.7， 6.8， 7.0.从差谱中可看出，混合物中甲氧基是在黄酮B环的4位。化合物（b）的CNMR为2-C 69.4，3-C 46.9，4-C 198.6，5-C 158.9，6-C 104.6，7-C164.2，8-C 102.2，9-C 158.3，10-C 101.5，11-C 32.1，1-C 114.5，2-C 158.9，3-C 103.4，4-C 156.0，5 -C  108.6，6-C 130.8，6，8-CH3 8.8. 其HNMR有2A-4.3（dd），2B-4.2（dd），3H-2.8，11A-3.3（dd），  11B-3.8（dd），6-CH3 2.4，8-CH3 2.4，5-OH 13.1，Φ-H 6.7， 6.7， 6.8， 7.0.从氢谱、碳谱、二维谱、差谱数据可初步得出化合物（a）和（b）的结构[8]。又从CA上未查到化合物（b）的结构式，故初步认为化合物（b）是一个新化合物，有待进一步研究。化合物3#，从其氢谱判断，可能为一长链脂肪烯。

3  展望

从麦冬的相关资料可看出，麦冬的有效成分主要是二氢高异黄酮。有资料报道从麦冬中已分得的二氢高异黄酮为27个[9]，其中大有得到新化和物的可能。希望麦冬的乙酸乙酯部分能继续研究，以获得新的有效的化合物。同时正丁醇部分能得到相应的分离鉴定。

参考文献

[1] 易进海.麦冬研究进展[J].华西药学杂志，1993，8（1）：32-38.

[2] 刘霞，曹秀荣，陈科力，詹亚华.湖北麦冬的研究进展[J].医药导报，2008，27（10）：1231-1233.

[3] 周跃华，徐德生，冯怡，吴笑如，李谨谨.麦冬总皂苷提取工艺的研究[J].中草药，2002，33（12）：1076-1078.

[4] 于晓文，杜鸿志，孙立，袁胜涛.麦冬皂苷药理作用研究进展[J].药学进展，2014，38（4）：279-284.

[5] 朱桢禄，刘洪，陈玲.正交法探讨麦冬的提取工艺[J].重庆中草药研究，1999，40：74-77.

[6] 张敬华，任璐，马玉芳，鲍和，赵桂兰，井航，王军宪.麦冬花化学成分研究[J].西北药学杂志，2013，28（6）：562-565.

[7] 林韵涵，李崇明，张雪琼，刘霞.湖北麦冬总皂苷提取纯化工艺研究[A]，中药与天然药高峰论坛暨第十二届全国中药和天然药物学术研讨会论文集[C].中国：海口，2012：320-325.

[8] 孟玲芝.麦冬化学成分研究[A]，长春中医药大学硕士论文集[C].长春：长春中医药大学，2013.

[9] 马海波.麦冬化学成分的研究[A]，北京中医药大学论文集[C].北京：北京中医药大学，2013.