高效液相色谱法检测鸡蛋中四种激素残留量

汪竟芝，胡琳，曹莹莹，程桂林，胡金玲

（池州市食品药品检验中心，安徽池州247000）

高效液相色谱法检测鸡蛋中四种激素残留量

汪竟芝，胡琳，曹莹莹，程桂林，胡金玲

（池州市食品药品检验中心，安徽池州247000）

建立一个简便、重现性好测定鸡蛋中的雌二醇、雌酮、雌三醇及睾酮残留量的方法。使用高效液相色谱法，选择流动相为：乙腈∶甲醇∶四氢呋喃∶（0.01 mol/l）醋酸钠=2∶2∶1∶5，能够有效提高色谱峰的分离度，190 nm～800 nm波段下扫描，选择270 nm为最佳吸收波长，柱温：30℃。结果表明4种激素的方法检出限为0.06 mg/kg～0.17 mg/kg，样品回收率是79.23%～102.26%，相对标准偏差为1.05%～4.21%。该方法准确度高，操作简便。

激素残留；鸡蛋；分析；高效液相色谱

甾体激素药物在动物体内代谢缓慢，残留多集中在动物的内脏组织，食用极小量激素残留的动物性食品会造成人体代谢紊乱，导致人体各器官、系统的疾病甚至癌症的高发。生活中大多数人选择鸡蛋来补充营养，而一些不法养殖户为追求更高的经济效益，通过在饲料中添加各种激素类药物来提高鸡的产蛋量。因此鸡蛋中不仅含有内源性激素，也可能含有外源性激素。对这类鸡蛋进行甾类激素残留量的检测是保障食品安全的一项重要工作。雌二醇、雌三醇、雌酮、睾酮是具有代表性的甾类激素，因此，参考相关文献资料，笔者采用高效液相色谱法，摸索检测条件，对鸡蛋中激素多残留同时进行检测具有一定的实际意义［1-3］。

1材料与方法

1.1主要仪器及试剂

［Ultimate3000］高效液相色谱仪DAD检测器：美国赛默飞世尔公司，色谱柱AcclaimTM120 Lot Validation -C18 5 um 120A.（4.6×150 mm）离心机：DT5-2型低速台式离心机：北京时代北利离心机有限公司；涡动混合器：XW-80A旋涡混合器：上海青浦泸西仪器厂；分析天平：XP205电子天平：瑞士梅特勒公司。乙腈、甲醇均为色谱纯；醋酸钠、四氢呋喃均为分析纯；实验用水为UP水。标准品来源：雌二醇、雌三醇、雌酮均购自中国食品药品检定研究院，批号分别为：100182-201205、100934-200701、100849-200501；睾酮（德国进口），批号为：10519。供试样品：鸡蛋（购自池州永辉超市）。

1.2色谱条件

流动相：乙腈∶甲醇∶四氢呋喃∶0.01 mol/L醋酸钠=2∶2∶1∶5；流速1.0 mL/min；检测波长270 nm；进样量10 μL；柱温：30℃。

1.3标准溶液的配制、多点校准

4种激素的标准工作溶液见表1。

1.4样品的制备

将新鲜鸡蛋打碎后搅拌均匀，称取样品5.0 g（精确到0.1 g）置入50 mL聚丙烯具塞离心管中，加入10.0 mL甲醇，在快速混匀器上涡动混合，震荡20 min，再用超声波提取20 min，于4 000 r/min离心10 min，将上清液移出，残渣中再加10.0 mL甲醇，在快速混匀器上涡动混合，中速震荡20 min，超声提取20 min，于4 000 r/min离心10 min，合并上清液，用0.45 μm微孔滤膜过滤成待测溶液。

表1　4种激素的系列标准工作溶液Table 1A series of standard working solution of four kinds of anabolic steroids

1.5测定方法

1.5.1检测条件的选择

取0.018 4 mg/mL雌二醇、0.020 1 mg/mL雌三醇、0.022 1 mg/mL雌酮、0.020 5 mg/mL睾酮的混合标准溶液于190 nm～800 nm波段下扫描，最大吸收波长均在230 nm，280 nm附近，选择270 nm作为检测波长；选择乙腈∶甲醇∶水（30∶20∶50）作为流动相，四种激素的出峰时间分别为：20、21.5、22.5、3.25 min，为了将四种标准品色谱峰能够较好地分离，选择乙腈∶甲醇∶四氢呋喃∶0.01 mol/L醋酸钠=2∶2∶1∶5。用外标法的相对保留时间进行定性，用外标法定量。

1.5.2样品的测定

在上述色谱条件下，保留时间分别为：雌二醇8.727 min、雌三醇2.977 min、雌酮10.180 min、睾酮7.560 min，将处理后的样品溶液进样10 μL，重复2次，取峰高的平均值，在标准工作曲线上查得样品浓度。并计算各组分激素的残留量。

2结果分析

2.1混合标准溶液色谱图

从图1可知，混合标准溶液在所采用的色谱条件下，目标组分得到了很好的分离。

图1　四种激素标准工作液色谱图Fig.1Four kinds of anabolic steroids standard working liquid chromatogram

图2　鸡蛋加标色谱图Fig.2Chromatogram of standard sample add egg

2.2鸡蛋加标色谱图分析

将图2鸡蛋加标色谱图与混合标准工作液色谱图（图1）对照可知，加标色谱图中目标组分同样得到很好的分离，保留时间一致，且无杂质色谱峰的干扰。说明此实验前处理过程对目标组分测定影响较小，满足实验准确度的要求。

2.3标准工作曲线与检出限

从表2可知：4种激素的线性关系良好，R2均大于0.999，说明本方法适用于甾类激素的定量分析。

表2　4种激素的线性方程、线性范围及相关系数Table 2The regression equations，linear ranges and correlation coefficients of four anabolic steroids

2.4准确度和精密度实验

采用阴性鸡蛋样品（4种激素均未检出）添加高、中、低3个浓度标准溶液，按样品的前处理方法提取和净化后进行的加标回收试验，回收率79.23%～102.26%，相对标准偏差为1.05%～4.21%，验证了此测试方法可行。计算加标回收率和RSD见表3。

表3　4种激素回收率试验结果及RSDTable 3The results of four anabolic steroids recovery rate test，RSD

3结论

通过甲醇振荡、超声波提取以及优化高效液相色谱条件，成功摸索出同时测定了鸡蛋中4种激素：雌二醇、雌三醇、雌酮、睾酮残留量的方法，该方法检出限为0.06mg/kg～0.17mg/kg，样品回收率是79.23%～102.26%，相对标准偏差为1.05%～4.21%。表明杂质干扰少，重复性好，操作简单，能够满足日常监测的要求。

［1］刘文英.药物分析［M］.北京人民卫生出版社，2007

［2］国家药典委员会.中国药典2010版二部［S］.中国医药科技出版社，2010

［3］吴启陆，沈清.高效液相色谱同时测定鸡蛋中4种激素残留量的方法［J］.安徽农业科学，2005，33（5）：852，878

Determination of Four Anabolic Steroids in Eggs by High Performance Liquid Chromatographic

WANG Jing-zhi，HU Lin，CAO Ying-ying，CHENG Gui-lin，HU Jin-ling
（Chizhou Municipal Food and Drug Inspection Center，Chizhou 247000，Anhui，China）

A efficient method for analysis of estradiol，estrone，estriol，testosterone in eggs was developed.The separation was achieved with a mobile phase composed of acetate sodium（0.01mol/L）-acetonitrile-methanoltetrahydrofuran（5∶2∶2∶1）.The mixed the standard solution of four kinds of anabolic steroids in the 190 nm-800 nm bandwidth scan，selected 270 nm with optimum absorption wavelength.The column was maintained at 30℃.The limit of detection were between 0.06 mg/kg-0.17 mg/kg.Overall recoveries were between 79.23%-102.26%，relative standard deviations between 1.05%and 4.21%.The method was suitable to simultaneously analyze the four anabolic steroids in eggs with simplicity and accuracy in a single injection.

multi-residue；egg；analysis；HPLC

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.10.026

2014-01-09

汪竟芝（1967—），女（汉），主管药师，本科，研究方向：食品安全检验等工作。