甘肃荒漠地区野生白刺的组织培养

张艳萍等

摘要：以荒漠野生白刺作为试验材料，研究不同消毒方式对白刺茎段无菌外植体建立的影响及不同激素、不同浓度组合对野生白刺试管苗增殖和生根的影响。结果表明：选取室内种子萌发的实生苗茎段为外植体，用10% NaClO 消毒15～18 min可以获得理想的成活率；适宜的增殖培养基是MS+0.2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA或MS+0.5 mg/L IBA；比较适宜的生根培养基是1/2 MS+0.5 mg/L IBA。不添加激素的简化培养基MS0对白刺也有较为理想的增殖和生根效果。

关键词：甘肃；荒漠地区；野生白刺；增殖；生根；组织培养

中图分类号： S580.4文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）09-0080-03

收稿日期：2014-09-12

基金项目：国家农村领域科技计划 （编号：2012BAD16B0303）。

作者简介：张艳萍（1978—），女，甘肃武威人，助理研究员，主要从事分子生物学、病毒检测以及中药材组培研究。E-mail：64929217@qq.com。

通信作者：董治宝。E-mail：zbdong@lzb.ac.cn。当前，全球盐碱地面积已达9.5亿hm2 [1]，其中我国盐碱土地资源约为0.99亿 hm2，其中现代盐碱土面积为0.37亿hm2，残余盐碱土约0.45亿hm2，并且尚存在有约0.173亿hm2的潜在盐碱土[2]。大面积盐碱地、荒漠地的开发利用对环境的改善具有重要的现实意义。白刺（Nitraria L.），灌木，蒺藜科，全世界有12个种，我国有 8个种，甘肃有5种 [3]，其根系发达，具有很强的防风固沙、抗旱、抗盐碱、耐热、耐土壤瘠薄和耐沙埋能力，可明显改良土壤物理性状，提高土壤肥力[4]。此外，白刺根寄生的锁阳（Cynomorium songaricum Rupr）为传统名贵的温补药材[5]，白刺果含多种营养成分和丰富的微量元素，具有极高的营养和药用价值[6]。近年来，从野生植物资源中寻找新的、潜在的药食同源植物，已成为国内外学者研究的热点，而沙生植物白刺则是经过长期的自然筛选而保留下来的优胜者之一，白刺因其顽强的生命力和优良的遗传基因而受到沙区人们的喜爱[7]。然而据调查，白刺种间杂交混乱，分化严重[8]，同时随着自然环境的严重恶化和人为的大幅度破坏，白刺出现了不同程度的退化，大面积死亡或生长不良，结实率下降或不结实，使得这一特殊野生资源的种群繁衍面临着严重的威胁[9]。因此，为可持续利用这一野生资源，保持其优良性状的稳定性，采用离体繁育技术就成为重要途径之一。

目前，较多学者对白刺进行过多方面的研究[10-14]，其中关于白刺组培再生方面的研究已有不少[15-18]，发现不同品种的白刺分化增殖所需的激素种类差异很大。西伯利亚白刺和唐古特白刺需要6-BA和IBA的浓度与配比存在很大差异[16，19]，添加一定量的IAA和GA更有利于天津野生白刺的增殖。可见，不同区域品种的基因型不同，所需激素不同，这是组培研究工作中普遍存在的问题[20-21]。本试验以甘肃荒漠野生白刺为材料，对其组培快繁进行研究，以期建立一套甘肃地区野生白刺较为简易的组培方法，为白刺的离体繁育提供参考。

1材料与方法

1.1试验材料

试验材料为荒漠野生白刺，采自甘肃省酒泉市巴丹吉林沙漠边缘，地理坐标为39°44′N、98°31′E，海拔1 000～1 500 m。于2012年7月和2013年4月先后2次采样，第1次于2012年7月下旬采摘的带果实枝条，冰盒内带回实验室，剪取顶端幼嫩枝条备用，同时采摘果实收集种子备用；第2次于2013年4月下旬，剪取当年旺盛新枝，冰盒内带回实验室备用。2次采样均为同株野生白刺枝条。

实生苗获得：2013年2月，将收集的野生白刺种子种于温室花盆内，即可获得实生苗。

1.2试验方法

1.2.1取材和消毒处理取7月和4月野外白刺单株茎段，流动自来水冲洗30 min，放于超净工作台，用75%乙醇消毒30 s，0.1%氯化汞处理4、6、8、10 min；取4月野外采集的茎段和种子发芽得到实生苗的茎段，流动自来水冲洗30 min，放于超净工作台，用75%乙醇消毒30 s，10%次氯酸钠处理7、10、12、15、18 min。消毒剂处理完之后，用无菌水冲洗4～5次，接于MS培养基上，在温度（25±2） ℃、光照强度2 000 lx、光照周期16 h/d下培养1周，统计消毒率和无菌苗成活率。

1.2.2增殖培养基筛选取启动培养获得的无菌苗茎段，接种于添加不同激素浓度配比的MS培养基中，激素浓度水平和组合见表1。以简化MS培养基为对照，简化培养基以自来水配置，市售白糖代替蔗糖，简写为MS0。60 d后调查增殖系数。

1.2.3生根诱导将切取的单芽茎段，接种于添加不同浓度IBA和IAA的1/2MS培养基中，进行生根诱导，浓度水平和组合见表2，以简化培养基MS0作对照。记录生根时间，40 d

1.3数据处理

数据用Excel 2003进行整理，用DPS 7.0进行数据分析。

2结果与分析

2.1不同取材与消毒方法对启动培养的影响

7月和4月在荒漠取的枝条，采用第1种消毒方案，随着消毒时间的增加消毒率呈逐渐上升趋势，成活率呈先微升后降趋势（表3）。2个时期采摘的枝条活性均较弱（表3），消毒时间在8～10 min时，外植体基本褐化死亡，消毒时间在4～6 min 时，消毒不彻底，外植体污染严重。0.1%氯化汞处理10 min时，消毒率最高，7月下旬和4月上旬采取的枝条，消毒率分别高达91.67%和96.67%，可相对应的成活率却都为0；消毒6 min时，2个时期的枝条成活率达到了各自的最高值，分别仅为5%和8.33%，相对应的消毒率分别为1833%和21.67%。