野生与栽培川西獐牙菜和椭圆叶花锚药效学的比较研究

何卫华

（解放军第四医院药械科，青海　西宁　810007）

野生与栽培川西獐牙菜和椭圆叶花锚药效学的比较研究

何卫华

（解放军第四医院药械科，青海西宁810007）

目的 研究野生和栽培川西獐牙菜和椭圆叶花锚的乙醇提取物对CC14致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法采用一次性腹腔注射四氯化碳花生油（0.12%）方法制造染毒小鼠模型，分别给其注射不同剂量的野生和不同剂量、不同地点的栽培川西獐牙菜和椭圆叶花锚对模型动物进行干预性保护，然后测定不同实验组小鼠的ALT和AST活性。结果 不同剂量的野生和不同剂量、不同地点的栽培川西獐牙菜和椭圆叶花锚均能降低四氯化碳导致的小鼠血清ALT和AST活性升高。结论 栽培川西獐牙菜和椭圆叶花锚完全可以代替野生种，同样对小鼠实验性肝损伤具有一定的保护作用。

川西獐牙菜；椭圆叶花锚；四氯化碳；肝损伤

川西獐牙菜Swertia mussotii和椭圆叶花锚Halenia elliptica为龙胆科Gentianaceae两种二年生多分枝草本植物，广泛分布于青海省玉树州及其他牧区的高山草甸、沼泽、灌丛、草地以及田埂中，主要生长于海拔2 400 m以上的青藏高原地区。其性寒、味苦，有清肝利胆、清热解毒、祛湿、消炎愈疮的功效［1］。目前，对龙胆科植物药理和化学性质的研究已有较多报道［2］，已从獐牙菜属和花锚属的多种植物中分离出100多种不同类型的化合物，包括黄酮、苷类、萜类、内酯、生物碱、有机酸等［3-7］，并对两种植物的生物活性进行了研究［8-11］。迄今为止，关于野生与栽培川西獐牙菜和椭叶花锚药效学的比较研究国内外未见报道，本实验采用两种藏药的乙醇提取物对CC14致小鼠急性肝损伤模型的作用，阐述了野生与栽培川西獐牙菜和椭圆叶花锚的药效学，旨在为栽培藏药川西獐牙菜和椭圆叶花锚能否代替野生藏药的研究提供科学依据。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物 昆明种纯系健康小白鼠，体质量18～20 g，由兰州生物制品厂提供，合格证号SCXK（兰）2010-0008。

1.1.2药品与试剂 四氯化碳分析纯（广东西陇化工厂，用花生油配成0.12%）；食用鲁花花生油；吐温80（莱阳市双双化工有限公司）；谷丙转氨酶试剂盒（南京建成生物工程研究所）；谷草转氨酶试剂盒（南京建成生物工程研究所）。

1.1.3仪器与设备 721分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；高速台式离心机、高速冷冻离心机（上海安亭仪器厂）；电子分析天平；电热鼓风干燥箱（重庆实验设备厂）；电热恒温水浴锅（北京科学仪器厂）；匀浆机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；低温冰箱；微量加样器100UI、250UI、500UI、1000UI（上海求精生化试剂仪器有限公司）。

1.2方法

1.2.1乙醇提取物 将药材进行粉碎，测定含水量后取1 kg干品，用90%乙醇以1∶8热提2h，提后滤去上清液，滤出物以上述条件继续提取，共提取4次，合并提取液，在60℃下用旋转蒸发仪将乙醇挥发干净（每1g川西獐牙菜和椭圆叶花锚分别相当生药材22.98g和19.69g），待用。

1.2.2小鼠处理 将308只雌雄各半小白鼠，随机分组，口服给药。各样品药物分4个剂量，分别为0、0.075、0.210、0.640g/kg的乙醇提取物。

1.2.3血清和肝组织样品的制备 动物断头采血，以3500r/min离心10～20min，取上清液低温保存，待用；取0.1g肝组织，加1mL生理盐水匀浆，以3500r/min离心10～20min，取上清液低温保存，待用。

1.2.4ALT活性测定 参照改良赖氏法测定［12］。首先用丙酮酸标准液作标准曲线，然后测定样品的吸光度，根据标准曲线，计算ALT的活性。

1.2.5AST活性测定 参照改良赖氏法测定［12］。首先用丙酮酸标准液作标准曲线，然后测定样品的吸光度，根据标准曲线，计算AST的活性。

1.3数据处理 采用t检验。

2　结果

2.1川西獐牙菜对CC14致小鼠急性肝损伤的作用 与未处理组相比，CC14肝损伤组小鼠血清ALT和AST的活性均明显升高，说明造模成功；不同剂量的野生与栽培川西獐牙菜的乙醇提取物均可使升高的血清ALT和AST活性显著降低，只是降低程度有所不同（表1）。

表1　川西獐牙菜对CCI4致小鼠急性肝损伤的作用（±s）

表1　川西獐牙菜对CCI4致小鼠急性肝损伤的作用（±s）

注：与CC14处理组对照比较，*表示存在差异，**表示存在显著差异，***表示存在极显著差异

组别剂量鼠数/只ALT活性/（U·L-1）AST活性/（U·L-1）未处理—14113.86±27.48108.93±38.68 CC14—14676.98±326.52412.64±153.00川西獐牙菜（西宁）高14188.76±54.22***240.01±57.35***川西獐牙菜（西宁）中14206.61±55.67***230.54±34.93***川西獐牙菜（西宁）低14291.14±63.99***233.16±43.89***川西獐牙菜（玉树）高14176.72±72.28***266.38±82.15***川西獐牙菜（玉树）中14214.77±65.22***274.59±42.70***川西獐牙菜（玉树）低14382.84±92.56**309.32±72.47**川西獐牙菜（野生）（西宁）高14150.25±47.29***208.75±42.48***川西獐牙菜（野生）（西宁）中14305.06±108.75***283.25±97.16**川西獐牙菜（野生）（西宁）低14495.84±292.13*346.50±152.70*川西獐牙菜（野生）（玉树）高14158.64±67.83***296.45±72.89***川西獐牙菜（野生）（玉树）中14298.46±78.02***314.29±45.67***川西獐牙菜（野生）（玉树）低14432.18±89.65**389.64±78.65**

2.2椭圆叶花锚对CC14致小鼠急性肝损伤的作用 与未处理组相比，CC14肝损伤组小鼠血清ALT和AST的活性均明显升高，说明造模成功；不同剂量的野生与栽培椭圆叶花锚的乙醇提取物均可使升高的血清ALT和AST活性显著降低，同川西獐牙菜类似，也是降低幅度有所不同（表2）。

表2　椭圆叶花锚对CCI4致小鼠急性肝损伤的作用（±s）

表2　椭圆叶花锚对CCI4致小鼠急性肝损伤的作用（±s）

注：与CC14处理组对照比较，**表示存在显著差异，***表示存在极显著差异

组别剂量鼠数/只ALT活性/（U·L-1）AST活性/（U·L-1）未处理—14113.86±27.48108.93±38.68 CC14—14676.98±326.52412.64±153.00椭圆叶花锚（西宁）高14154.68±61.35***180.37±58.48***椭圆叶花锚（西宁）中14172.70±75.56***169.76±35.09***椭圆叶花锚（西宁）低14192.86±48.84***253.94±54.31***椭圆叶花锚（玉树）高14147.40±44.23***178.37±44.27***椭圆叶花锚（玉树）中14160.74±33.25***193.70±39.99***椭圆叶花锚（玉树）低14164.44±45.00**229.12±61.42**椭圆叶花锚（野生）（西宁）高14151.76±44.26***187.03±52.33***椭圆叶花锚（野生）（西宁）中14198.74±56.12***227.85±62.61***椭圆叶花锚（野生）（西宁）低14206.78±55.67***287.03±51.89***椭圆叶花锚（野生）（玉树）高14133.87±38.96***189.65±48.31***椭圆叶花锚（野生）（玉树）中14189.65±43.18***298.82±44.59***椭圆叶花锚（野生）（玉树）低14175.66±56.13**307.08±59.24**

3　讨论

川西獐牙菜和椭圆叶花锚是两种较典型的高山植物，齐墩果酸、龙胆苦苷、芒果苷、当药黄素和酮类为其重要有效成分，尤其酮类化合物应是其含有量较高的有效成分。目前，已从川西獐牙菜中得到8种酮，藏茵陈酮是新近发现的一种成分。丁莉等［8］和罗桂花等［13］的研究分别表明，玉树獐牙菜和川西獐牙菜的醇提物均可以明显降低CC14引起的小鼠血清ALT和AST活性增高，并且具有一定的量效关系，认为其有效成分在一定程度上具有保护肝细胞膜结构的功能，我们的研究结果与其基本一致，从而进一步验证了前人的研究。本研究发现，CC14处理后，小鼠血清中ALT和AST活性明显高于空白对照组的，说明CC14对小鼠肝组织具有损伤作用。CC14是一种典型的肝脏毒物，经肝脏微粒体细胞色素P-450激活后，发生均裂产生自由基（CC13·）。这样，一方面CC13·可攻击细胞膜上的磷脂分子，引起脂质过氧化，并与膜蛋白结合，破坏膜的结构和功能；另一方面CC14还可抑制内质网上的钙离子泵，使钙离子升高，从而激活肝细胞膜上的磷酸化酶，引起脂质过氧化，导致肝细胞膜损伤［14］。当肝细胞受损时，由于肝细胞内转氨酶的浓度比血清中的高，胞浆内的ALT和AST因浓度差释放入血，造成高血清ALT和AST，故血清中的ALT和AST的活性是反映肝受损的敏感指标，也能反映肝细胞损伤的程度。CC14可引起化学性肝损伤，导致肝细胞变性、坏死、间质细胞浸润，也能引起肝纤维化，其中成纤维细胞在肝纤维化中起着主要作用［14］。不同剂量和不同地点野生和栽培川西獐牙菜和椭圆叶花锚的醇提物均能明显降低CC14引起的大鼠血清ALT和AST活性增高，这不仅表明川西獐牙菜和椭圆叶花锚有效成分在一定程度保护肝细胞膜结构，减少自由基的攻击而减轻肝细胞的损伤，从而对急性肝损伤具有较好的降酶、保护肝细胞和治疗作用；而且，还说明栽培和野生川西獐牙菜和椭圆叶花锚对小鼠急性肝损伤均有保护作用，只是略有不同，因此本研究结果初步可以说明栽培川西獐牙菜和椭圆叶花锚可代替野生川西獐牙菜和椭圆叶花锚，从而进一步表明采用人工栽培可以解决野生川西獐牙菜和椭圆叶花锚的资源供给问题，满足生产需要，同时有利于保护珍稀野生川西獐牙菜和椭圆叶花锚植物资源，为野生川西獐牙菜和椭圆叶花锚的保护和合理开发利用提供科学依据。

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R285.5

B

1001-1528（2015）01-0204-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.01.045

2013-10-10

教育部“春晖计划”合作科研项目（Z2010078）；青海省高原作物种质资源创新与利用国家重点实验室培育基地开放课题资助项目（2013-01）

何卫华（1977—），男，学士，主管药师，主要从事药剂学方面的研究。Te1：18697105279，E-mai1：HeweihuaS10@ sohu.com