喜树苗期高效栽培关键技术研究

苏付保，黎健杏，兰健花，秦凤梅，温中林

(广西生态工程职业技术学院 林业工程系，广西 柳州 545004)

喜树(Camptotheca acuminate Decne)各器官中提取的喜树碱及其衍生物，是医疗上常用的抗肿瘤和抗艾滋病的药剂。杨磊等研究表明:喜树各组织中以叶片的喜树碱含量最高[1];郭勇等研究表明:嫩叶中喜树碱含量极显著高于同期的成熟叶[2]。因此，苗期高效栽培将成为提供大量高喜树碱含量原料的重要途径。王博文等研究表明:轻度遮荫(透光60%)可提高喜树碱含量[3];吴子龙、于洋等研究表明:接种丛枝菌能有效提高喜树幼苗生物量与碱的含量[4－5];牧文等研究表明:叶面喷施50 mg/L浓度的水杨酸能有效提高喜树碱含量[6];邢军会、孙世芹等在砂盘中栽培表明:在适当的低氮水平中喜树碱含量高，而在适当的高氮水平中喜树幼苗生物量大[7－8];魏焕勇研究认为:100株/m2时喜树幼苗的单位面积喜树碱产量最高，而25株/m2时喜树幼苗生物量大[9]。现以广西13个地点的45个喜树单株及当年生播种苗和留床苗为试材，研究不同单株喜树碱含量差异及密度、施肥、截干对喜树叶片生物量和喜树碱含量的影响，总结喜树苗期高效栽培的几项关键技术。

1 材料与方法

1.1 试验地概况

试验地设在广西生态工程职业技术学院苗圃，北纬 24°28'05″～24°28'06″，东经 109°23'02″～109°23'03″，海拔123～126 m。年均气温20.1℃，极端高温39.4℃，极端低温－5.8℃;年均降水1429.7 mm，年均空气相对湿度78%。土壤为红壤，土层厚度≥100 cm，呈酸性。

1.2 材料来源

建圃材料来自广西兴安县、灵川县、永福县、天峨县、南丹县、东兰县、隆林县新州镇、隆林县德峨乡、凌云县、西林县、金秀县、田林县和德保县，共45个单株[16]。培育嫁接用砧木的种子来源于天峨县。

1.3 研究方法

1.3.1 建立种质资源圃

在广西区内根据喜树分布情况选13个采集点，采集枝条通过嫁接育苗在苗圃建立45个喜树单株的种质资源圃。

1.3.2 当年生播种苗密度与施肥试验

幼苗高约5 cm时，按Ⅰ—33株/m2、Ⅱ—50株/m2和Ⅲ—67株/m2等3个密度种植，每个密度3个重复，每个重复每个密度移植9行。

施肥试验在50株/m2的密度下进行，每个处理3个重复。移植成活后，于6月、7月和8月中旬在种植行内打孔施肥，共9个处理。分别为:1(1N1P1K 26.7 g/m2)、2(1N1P1K 33.3 g/m2)、3(1N1P1K 26.7 g/m2+B 6.7 g/m2)、4(1N1P1K 33.3 g/m2+B 6.7 g/m2)、5(1.5N1P1K 26.7 g/m2)、6(1.5N1P1K 33.3 g/m2)、7(1.5N1P1K 26.7 g/m2+B 6.7 g/m2)、8(1.5N1P1K 33.3 g/m2+B 6.7 g/m2)和 CK(对照)，其中 N指尿素、P指过磷酸钙、K指硫酸钾、B指硼砂。

1.3.3 留床苗截干与密度试验

春季萌芽前对留床苗进行截干处理，截干高度分别为A—10 cm、B—15 cm、C—20 cm和D—25 cm，设置3个重复。同一重复中每个截干高度1行，每行10株。

在另一苗床，4种截干高度设计G—5株/行(17株/m2)、H—10株/行(33株/m2)等2种密度，设置3个重复。

1.3.4 数据测定

⑴生物量测定。当年生播种苗分别在8月上旬、10月上旬和落叶前采集枝叶，测定叶片生物量;留床苗分别于5月和7月采集枝叶，测定叶片生物量。

⑵喜树碱含量测定。45个单株叶片样品7月5日从种质资源圃采集，当年生播种苗密度与施肥试验的叶片样品于9月30日从试验区采集。样品采集后放在干燥的室内自然风干，并送专业检验所检测。检测仪器为Agilent 1100高效液相色谱仪;检测重复数为3次;色谱条件为色谱柱Agilent C18，柱温25℃，流速10 mL/min，检测波长 254 nm，进样量 10 μL。

2 结果与分析

2.1 不同单株对喜树碱含量的影响

方差分析和多重比较表明，45个喜树单株的喜树碱含量有极显著的差异，其中排名第1的德保1与其余44个单株有极显著差异;排名第2的西林3与排名4～45的单株有极显著差异，与排名第3的金秀1无显著差异;排名第3的金秀1与排名4～45的单株有极显著差异;排名第4的兴安1与排名6～45的单株有极显著差异，与排名第5的德保2无显著差异;排名第5的德保2与排名6～45的单株有极显著差异。综合考虑不同单株的喜树碱含量、单株之间含量差异显著性和梯度关系，筛选出德保1、西林3、金秀1、兴安1、德保2等5个优良单株，其喜树碱含量分别是45个单株平均值的199.9%、167.8%、166.1%、145.0%和144.4%[10]。

2.2 密度与施肥对叶片生物量和喜树碱含量的影响

2.2.1 密度与施肥对当年生播种苗叶片生物量的影响

表较比重多量物生片叶树喜合组肥施与度密同不1表）/行g（值差重鲜片叶合组肥施与度密肥施与度密鲜片叶合组1#K C C 2#K C!3#1"2"4#3"1!2!8#5#4"3!7#8"4!5!5"7"6#8!6"7!6!）/行g（重1 5 3 0 3 3 4 0 5 0#8 8#9 0#8 9#1 0 5#1 2 9#1 3 0#1 4 4#1 4 7#1 5 0#1 6 0#1 6 7#1 8 7#1 9 0#1 9 3#1 9 4#1 9 8#2 0 7#2 3 6#2 3 9#2 4 4）6 2 5（K C#4 2 9 3 2 3 9 4 9#8 7#8 9#9 7#1 0 4#1 2 8#1 2 9#1 4 3#1 4 6#1 4 9#1 5 9#1 6 6#1 8 6#1 8 9#1 9 2#1 9 3#1 9 7#2 0 6#2 3 5#2 3 8#2 4 3）6 2 6（1#2 5 2 8 3 5 4 5#8 3#8 5#9 3#1 0 0#1 2 4#1 2 5#1 3 9#1 4 2#1 4 5#1 5 5#1 6 2#1 8 2#1 8 5#1 8 8#1 8 9#1 9 3#2 0 2#2 3 1#2 3 4#2 3 9）6 3 0（K C"3 1 0 2 0 5 8*60*#6 8#7 5#9 9#1 0 0#1 1 4#1 1 7#1 2 0#1 3 0#1 3 7#1 5 7#1 6 0#1 6 3#1 6 4#1 6 8#1 7 7#2 0 6#2 0 9#2 1 4）6 5 5（2#7 1 7 5 5*57*65*#7 2#9 6#9 7#1 1 1#1 1 4#1 1 7#1 2 7#1 3 4#1 5 4#1 5 7#1 6 0#1 6 1#1 6 5#1 7 4#2 0 3#2 0 6#2 1 1）6 5 8（K C!1 0 4 8 5 0 5 8*65*#8 9#9 0#1 0 4#1 0 7#1 1 0#1 2 0#1 2 7#1 4 7#1 5 0#1 5 3#1 5 4#1 5 8#1 6 7#1 9 6#1 9 9#2 0 4）6 6 5（3#3 8 4 0 4 8 5 5*#7 9#8 0#9 4#9 7#1 0 0#1 1 0#1 1 7#1 3 7#1 4 0#1 4 3#1 4 4#1 4 8#1 5 7#1 8 6#1 8 9#1 9 4）6 7 5（1"2 1 0 1 7 4 1 4 2 5 6*59*62*#7 2#7 9#9 9#1 0 2#1 0 5#1 0 6#1 1 0#1 1 9#1 4 8#1 5 1#1 5 6）7 1 3（2"8 1 5 3 9 4 0 5 4*57*60*#7 0#7 7#9 7#1 0 0#1 0 3#1 0 4#1 0 8#1 1 7#1 4 6#1 4 9#1 5 4）7 1 5（4#7 3 1 3 2 4 6 4 9 5 2*62*#6 9#8 9#9 2#9 5#9 6#1 0 0#1 0 9#1 3 8#1 4 1#1 4 6）7 2 3（3"2 4 2 5 3 9 4 2 4 5 5 5*62*#8 2#8 5#8 8#8 9#9 3#1 0 2#1 3 1#1 3 4#1 3 9）3 0（1!1 1 5 1 8 2 1 3 1 3 8 5 8*61*64*65*#6 9#7 8#1 0 7#1 1 0#1 1 5）7 5 4（2!1 4 1 7 2 0 3 0 3 7 5 7*60*63*64*#6 8#7 7#1 0 6#1 0 9#1 1 4）7 5 5（8#3 6 1 6 2 3 4 3 4 6 4 9 5 0 5 4*63*#9 2#9 5#1 0 0）7 6 9（5#3 1 3 2 0 4 0 4 3 4 6 4 7 5 1*6 0*#8 9#9 2#9 7）7 7 2（4"1 0 1 7 3 7 4 0 4 3 4 4 4 8 5 7*#8 6#8 9#9 4）7 7 5（3!7 2 7 3 0 3 3 3 4 3 8 4 7#7 6#7 9#8 4）7 8 5（7#2 0 2 3 2 6 2 7 3 1 4 0#6 9#7 2#7 7）7 9 2（8"3 6 7 1 1 2 0 4 9 5 2*57*）8 1 2（4!3 4 8 1 7 4 6 4 9 5 4*）8 1 5（5!1 5 1 4 4 3 4 6 5 1*）8 1 8（5"4 1 3 4 2 4 5 5 0）8 1 9（7"9 3 8 4 1 4 6）8 2 3（6#2 9 3 2 3 7）8 3 2（8!3 8）8 6 1（6"5）8 6 4（7!8 6 9）（6!。异差著显有示表*注，标异差著显极有示#表注6 7.6 2；2.标=）0.0 1（S D L，5 0.7 8=）0.0 5（S D L：1.注

方差分析和多重比较表明(见表1)，27个密度与施肥组合的叶片生物量有极显著差异，其中排名第1的Ⅱ6组合与排名9～27的组合有极显著差异，与排名6～8的组合有显著差异，与排名第2～5的组合无显著差异;排名第2的Ⅱ7组合与排名10～27的组合有极显著差异，与排名第9的组合有显著差异，与排名第3～8的组合无显著差异;排名第3的Ⅲ6组合与排名10～27的组合有极显著差异，与排名第4～9的组合无显著差异。综合考虑不同组合的生物量、组合之间的差异显著性和梯度关系，Ⅱ6组合(50株+1.5N1P1K 33.3 g/m2)、Ⅱ7组合(50株+1.5N1P1K 26.7 g+B 6.7 g/m2)与Ⅲ6组合(67株+1.5N1P1K 33.3 g/m2)效果好。

2.2.2 密度与施肥对当年生播种苗喜树碱含量的影响

(1)密度对当年生播种苗喜树碱含量的影响

方差分析和多重比较表明(见表2)，3种密度的喜树碱含量有极显著差异，33株/m2(Ⅰ)、50株/m2(Ⅱ)和67株/m2(Ⅲ)等3种密度中以50株/m2的喜树碱含量最高，其中B和A与C之间、B与A之间有极显著差异。与魏焕勇[9]“400株/m2、100株/m2、44株/m2、25株/m2和16株/m2等5种密度中以100株/m2的喜树碱含量最高”的研究结论略有不同。这可能与测定时的苗龄不同相关。

表2 不同密度喜树碱含量多重比较表

(2)施肥对当年生播种苗喜树碱含量的影响

方差分析和多重比较表明(见表3)，9种施肥处理的喜树碱含量有极显著差异，其中处理1与其它8个处理间有极显著差异，处理3与其它7个处理间也有极显著差异，且处理1(1N1P1K 26.7 g/m2)和处理3(1N1P1K 26.7 g/m2+B 6.7 g/m2)的喜树碱含量明显高于其它处理，表明低氮比例和适当低用量施肥处理的喜树碱含量高。这与邢军会、孙世芹等[7－8]的研究结论是一致的。

表3 不同施肥处理喜树碱含量多重比较表

综合考虑施肥对叶片生物量和喜树碱含量的影响，当年生播种苗以按1N∶1P∶1K的比例施肥约30 g/m2为宜。

2.3 截干高度与密度组合对留床苗叶片生物量的影响

方差分析和多重比较表明(详见文献[11])，8种截干高度与密度组合的叶片生长量有显著差异，其中排名第1的DH组合与排名5～8的组合有极显著差异，与排名3～4的组合有显著差异，与排名第2的CH组合无显著差异;排名第2的CH组合与排名7～8的组合有极显著差异，与排名第5～6的组合有显著差异，与排名第3～4的组合无显著差异。综合考虑不同组合的生物量、组合之间的差异显著性和梯度关系，以保留10株/行(33株/m2)且在25 cm和20 cm的高度截干等两个组合(DH和CH组合)的效果好。

3 结论

3.1 高效栽培应选用优良单株的繁殖材料

在广西13个地点采集的45个喜树单株的喜树碱含量有极显著差异，综合考虑不同单株的喜树碱含量、单株之间含量差异显著性和梯度关系，筛选出德保1、西林3、金秀1、兴安1、德保2等5个优良单株，其喜树碱含量分别为45个单株平均值的199.9%、167.8%和166.1%、145.0%和144.4%。故，喜树高效栽培应选用德保1、西林3、金秀1、兴安1、德保2等优良单株的材料进行繁殖。

3.2 当年生苗高效栽培以50株/m2+施等比例NPK约30 g/m2为宜

不同密度与施肥组合对叶片生物量有显著差异，综合考虑不同组合的生物量、组合之间的差异显著性和梯度关系，50株 +1.5N1P1K 33.3 g/m2、50株 +1.5N1P1K 26.7 g/m2+B 6.7 g/m2与67株 +1.5N1P1K 33.3 g/m2等3个组合效果好;不同密度与施肥对叶片的喜树碱含量也有显著影响，33株/m2、50株/m2和67株/m2等3种密度以50株/m2的喜树碱含量最高;9个施肥处理中1N1P1K 26.7 g/m2和1N1P1K 26.7 g/m2+B 6.7 g/m2等两个处理明显高于其它处理。综合考虑密度与施肥对喜树苗期叶片生物量和喜树碱含量的影响，当年生苗以50株/m2+施等比例NPK约30 g/m2为宜。

3.3 留床苗高效栽培以33株/m2+20～25 cm处截干为好

不同截干高度与密度组合的叶片生长量有显著差异，综合考虑不同组合的生物量、组合之间的差异显著性和梯度关系，以保留10株/行(33株/m2)且在25 cm和20 cm的高度截干等两个组合的效果好。故，喜树留床苗高效栽培以33株/m2+20～25 cm处截干为好。

[1]杨磊，李晓娟，赵春建，等.喜树生物碱在喜树植株中的分布[J].植物生理学通讯，2008，44(5):873－876.

[2]郭勇，林桂芸，孙雁霞，等.喜树叶片中喜树碱含量的季节变化研究[J].西南农业学报，2006，19(1):143－145.

[3]王博文，王洋，阎秀峰.光强对喜树幼苗喜树碱含量及分配的影响[J].黑龙江大学自然科学学报，2006，23(2):260－264.

[4]吴子龙，赵昕.混合接种菌根真菌对喜树幼苗生长及喜树碱含量的影响[J].北方园艺，2009(10):52－54.

[5]于洋，于涛，王洋，等.接种时期对丛枝菌根喜树幼苗喜树碱含量的影响[J].植物生态学报，2010，34(6):687－594.

[6]牧文，刘文哲.伤害及诱导子对喜树幼苗中喜树碱含量的影响[J].西北植物学报，2007，27(5):977－982.

[7]邢军会.氮素营养对喜树幼苗生长及其叶片喜树碱含量的影响[D].哈尔滨:东北林业大学，2003.

[8]孙世芹，阎秀峰.氮素水平对喜树幼苗喜树碱含量的影响[J].中国中药杂志，2008，33(4):356－359.

[9]魏焕勇.种群密度对喜树幼苗生物量及喜树碱含量的影响[D].哈尔滨:东北林业大学，2005.

[10]苏付保，粟本超，陈荣，等.广西喜树碱优良单株选择研究[J].河池学院学报，2014，34(5):23－29.

[11]苏付保，秦凤梅，温中林，等.喜树留床苗截干高度和密度对叶片生物量的影响[J].北方园艺，2013(9):81－83.