穿山龙配方颗粒质量标准研究△

陈海兰，李晓华，初洪波，于洋，刘同彦，高越，刘同帅，邱智东，位鸿*

(1.长春中医药大学，吉林 长春 130117；2.吉林敖东集团力源制药股份有限公司，吉林 133700)

·中药工业·

穿山龙配方颗粒质量标准研究△

陈海兰1，李晓华1，初洪波1，于洋1，刘同彦2，高越1，刘同帅1，邱智东1，位鸿2*

(1.长春中医药大学，吉林 长春 130117；2.吉林敖东集团力源制药股份有限公司，吉林 133700)

目的：建立穿山龙配方颗粒质量标准。方法：采用薄层色谱法(TLC)对穿山龙配方颗粒进行定性鉴别；用高效液相色谱法(HPLC)对其中的薯蓣皂苷进行含量测定。结果：薄层色谱鉴别特征斑点清晰，专属性强；薯蓣皂苷进样量在0.604 8～7.560 0 μg与峰面积线性关系良好，r=0.999 9，平均回收率为97.46%，RSD为1.84%(n=6)。结论：本试验建立的定性及定量方法简单可行、重复性好，能有效地控制穿山龙配方颗粒的质量。

穿山龙配方颗粒；薄层鉴别法；高效液相色谱法；质量标准

穿山龙为薯蓣科植物穿龙薯蓣DioscoreanipponicaMakino的干燥根茎[1]，为《中华人民共和国药典》2010版收录药材，气微，味苦涩，性温。具有祛风止痛、舒筋活血、止咳化痰的功能。临床上用于风湿痛、风湿关节痛、筋骨麻木、大骨节病、跌打损伤、咳嗽喘息、气管炎等疾病的治疗。中药配方颗粒又称免煎中药，主要通过对单味中药进行加工提取，将其有效成分制成新剂型[2]。临床应用及相关药理实验研究表明，单味中药配方颗粒和传统的水煎剂具有基本相同的疗效和药理作用，且中药配方颗粒具有体积小、易于携带保存、质量稳定等优点[3]。穿山龙配方颗粒是穿山龙饮片经水提、浓缩、干燥、制粒等工序制成的单味中药配方颗粒剂。据报道[4-6]，薯蓣皂苷为穿山龙具有止咳、祛痰、脱敏、消炎用的甾体皂苷类活性成分。本试验采用HPLC[7-10]测定制剂中薯蓣皂苷含量，并参考《中华人民共和国药典》一部穿山龙项下鉴别内容，进行穿山龙配方颗粒质量标准研究，为其质量控制提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪(日本岛津，LC-2010A)；紫外检测器，CLASS-VP色谱数据工作站，色谱柱：Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；KQZ3200E型超声波清洗机(天鹏电子新技术有限公司)；DIF-6050型真空干燥箱(上海一恒实验仪器厂)；数码照相机(索尼公司，型号：DSC-RX100)；硅胶G板(青岛海洋化工有限公司)。

1.2 试药

薯蓣皂苷元对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111539-200612，供含量测定用，规格：20 mg)；薯蓣皂苷对照品(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，规格：20 mg)；穿山龙对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：121378-200401，供鉴别用，规格：5.0 g)；3批穿山龙配方颗粒中试样品(批号分别为20130401，20130402，20130403)；乙腈、甲醇为色谱纯(美国Fisher公司)；娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)；其他试剂均为分析纯。

2 薄层色谱鉴别

2.1 对照品溶液制备

按照《中华人民共和国药典》2010年版一部穿山龙饮片【鉴别】项下规定，取薯蓣皂苷元对照品，加甲醇制成质量浓度为1 mg·mL-1的溶液，作为对照品溶液。

2.2 对照药材溶液制备

取穿山龙对照药材0.5 g，加甲醇25 mL，超声处理(功率：250 W，频率：40 kHz)30 min，滤过，滤液蒸干。残渣加浓度为3 mol·L-1的盐酸溶液20 mL，使其溶解，置水浴中加热水解30 min，放冷，再加入三氯甲烷30 mL，加热回流15 min，滤过，取三氯甲烷液蒸干。残渣加三氯甲烷-甲醇(1∶1)的混合溶液2 mL，使其溶解，作为对照药材溶液。

2.3 供试品溶液制备

另取3批中试样品的配方颗粒各2 g，研细，同2.2项下方法制成供试品溶液。

2.4 薄层色谱鉴别

照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(20∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。配方颗粒与对照药材显示相同的斑点。结果见图1。

注：1.薯蓣皂苷元对照品；2.穿山龙对照药材；3.一批样品；4.二批样品；5.三批样品。图1 三批穿山龙配方颗粒中试样品薄层鉴别图

3 薯蓣皂苷含量测定

3.1 色谱条件

色谱柱：Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(43∶57)；柱温为室温；体积流量：1.0 mL·min-1；检测波长：203 nm；进样体积：10 μL。阴性对照品、薯蓣皂苷对照品和供试品的HPLC 图谱见图2。

3.2 样品溶液制备

3.2.1 对照品溶液的制备 取薯蓣皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成质量浓度为0.302 4 mg·mL-1含的溶液。

3.2.2 供试品溶液的制备 取穿山龙配方颗粒粉末(过四号筛)，约3.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入65%乙醇25 mL，称定重量，超声处理(功率：250 W，频率：40 kHz)30 min，放冷，用65%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.2.3 阴性对照品溶液的制备 取色谱甲醇适量，0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

3.3 方法学考察

3.3.1 线性关系考察 分别精密吸取薯蓣皂苷对照品溶液2.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 μL，注入液相色谱仪，测定，以进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，回归方程：Y=315 320X+5372，r=0.999 9，表明薯蓣皂苷在0.604 8～7.560 0 μg与其峰面积积分值呈良好的线性关系，见图3。

注：A.薯蓣皂苷对照品；B.穿山龙配方颗粒；C.阴性对照品。图2 薯蓣皂苷HPLC图谱

图3 薯蓣皂苷标准曲线

3.3.2 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，测定峰面积，RSD为1.24%，表明仪器精密度良好，结果见表1。

3.3.3 重复性试验 取本品同一批次样品6份，按3.2.2项下方法操作，按3.1色谱条件测定薯蓣皂苷平均质量分数为2.26 mg·g-1，RSD为1.33%，表明该方法重复性良好。见表2。

表1 精密度试验

表2 重复性试验

3.3.4 稳定性试验 精密吸取上述供试品溶液10 μL，分别在0、4、8、10、12、24 h进样，按3.1色谱条件测定，RSD为0.68%，色谱峰面积在24 h内基本无变化，说明稳定性较好，结果见表3。

表3 稳定性试验

3.3.5 回收率试验 取本品1.5 g(含薯蓣皂苷3.39 mg)，研细，精密称定，精密加入薯蓣皂苷对照品4.04 mg，按3.2.2项下方法制备供试品溶液，平行6份，测定薯蓣皂苷含量，结果平均回收率为97.46%，RSD为1.84%，结果见表4。

表4 回收率试验结果

3.3.6 样品测定 取3批样品(不同批次的穿山龙饮片制备而成)，按3.2.2项下方法制备供试品，按3.1色谱条件测出峰面积，采用外标法计算薯蓣皂苷的含量。结果见表5。

表5 3批样品中薯蓣皂苷含量测定 /mg·g-1

4 讨论

本试验以有效成分薯蓣皂苷为评价指标，分别通过TLC、HPLC进行定性和定量鉴别。

依照《中华人民共和国药典》2010年版一部穿山龙药材鉴别方法对穿山龙配方颗粒进行定性鉴别。供试品色谱中，配方颗粒与对照药材显示相同的斑点。

根据配方颗粒的工艺特点，依照《中华人民共和国药典》2010年版一部HPLC对样品中的薯蓣皂苷含量进行检测，本品3批中试样品含量测定数据平均为2.432 mg·g-1。含量限度按测定结果平均值的80%计算，为1.946 mg·g-1，因此暂定含量限度为每1 g穿山龙配方颗粒含薯蓣皂苷不得少于1.95 mg。

以上结果表明，本方法科学、准确，可以作为穿山龙配方颗粒的质量控制标准。对于穿山龙配方颗粒的质量控制，在完成有效成分或指标成分的量化研究后，临床疗效指标方面的研究有待进一步深入。

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ResearchonQualityStandardofRhizomaDioscoreaeNipponicaeFormulaGranules

CHENHailan1，LIXiaohua1，CHUHongbo1，YUYang1，LIUTongyan，GAOYue1，LIUTongshuai1，QIUZhidong1，WEIHong2*

(1.ChangchunUniversityofTCMChangchun130117，China；2.JilinaodongGroupLiyuanPharmaceuticalCo.Ltd.Jilin133700，China)

Objective：To establish quality standard for Rhizoma Dioscoreae Nipponicae formula granules.Methods：TLC was used for qualitative identification of Rhizoma Dioscoreae Nipponicae formula granules，the content of the main active constituent dioscin was determined by HPLC.Results：The characteristic spots in TLC identification were clear and specific.There was a good linear relationship between the peak area and quantity of dioscin at the range of 0.604 8-7.560 0 μg，r=0.999 9，and the average recovery rate was 97.46%，RSD was1.84%(n=6).Conclusion：By the study，the established qualitative and quantitative methods are simple and feasible，reproducible，and suitable for the qualitycontrol of Rhizoma Dioscoreae Nipponicae formula granules effectively.

Rhizoma Dioscoreae Nipponicae formula granules；TLC；HPLC；quality standard

2015-01-13)

吉林省科技支撑计划项目(20130201009ZY)

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位鸿，主任药师，研究方向：中药配方颗粒关键技术研究；E-mail：641538498@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.7.016