鹿角藤提取物的抑菌活性

李敦禧，廖凤仙，连春枝，钱 军，吴海霞，骆焱平

(1.海南省林业科学研究所，海南 海口 571100； 2.海南大学环境与植物保护学院，海南 海口 570228)

鹿角藤提取物的抑菌活性

李敦禧1，廖凤仙2，连春枝1，钱 军1，吴海霞1，骆焱平2

(1.海南省林业科学研究所，海南 海口 571100； 2.海南大学环境与植物保护学院，海南 海口 570228)

采用生长速率法测定鹿角藤甲醇粗提物、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇4种溶剂萃取物及氯仿萃取物的层析组分对6种靶标菌的抑菌活性。结果表明，在质量浓度5 mg·mL-1条件下，4种萃取物中，氯仿萃取物的抑菌活性最好，尤其是对香蕉炭疽菌及芒果炭疽菌，其抑制率达82.48%、71.57%；氯仿萃取物的进一步层析组分中，E组分的抑菌活性最好，且具有广谱抑菌活性，在质量浓度0.5 mg·mL-1条件下，组分E对香蕉炭疽菌的抑制率达74.12%，具有进一步研究开发的潜质。

鹿角藤；生长速率法；抑菌活性

海南鹿角藤(ChonemorphasplendensChun et Tsiang)为夹竹桃科(Apocynaceae)鹿角藤属(ChonemorphaG.Don)多年生藤本植物[1]。该属植物具有重要的药理活性，有通经活络、活血止痛、接骨生肌、降压等作用[2]。如《本草便读》云：“凡藤蔓之属，皆可通经入络，盖藤者缠绕蔓延，犹如网络，纵横交错，无所不至，其形如络脉[3-4]”。赵学敏[5]在《本草纲目拾遗》中提到鹿角藤的老茎，可用来治疗妇女黄疸病，漾濞鹿角藤的茎药用亦可治疗风湿骨痛、骨折筋伤、外伤出血等症。Chatterjee等[6]从大叶鹿角藤根中分离出鹿角藤碱，发现该碱对感染寄生虫的黄金鼠防效达100%，对肠道感染寄生虫的幼鼠防效为90%；2005年，Roy等[7]报道了大叶鹿角藤作为骨骼肌松弛剂的研究机理；Shende等[8]2009年发现大叶鹿角藤根乙醇提取物对高血糖大白鼠具有降血糖的作用。

近年来，对该属植物的杀虫活性研究有零星报道，如2005年，刘红芳等[9]发现密脉崖鹿角藤叶的乙醇提取物对斜纹夜蛾4龄幼虫有较高的拒食活性；杀菌活性方面鲜有报道。为此，笔者对海南鹿角藤的提取物进行抑菌活性研究，一方面拟扩大鹿角藤的综合利用价值；另一方面期待探明鹿角藤的抑菌活性，促进热带植物资源在农药方面的研发，为鹿角藤属植物的开发与应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试药剂 0.36%苦参碱水剂(河北阔达生物制品有限公司)。

1.1.2 供试菌种 芒果蒂腐病菌(BotryodiplodiatheobromaePat.)、芒果炭疽病菌(ColletotrichumgloeosporioidesPenz.)、香蕉枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.cubense)、香蕉炭疽病菌(Colletotrichummusae(Berk&Curt) Arx)、橡胶棒孢霉落叶病菌(Corynesporacassiicola(Berk.Curt.)Wei)、水稻纹枯病菌(RhizoctoniasolaniKühn)为供试靶标菌，由海南大学环境与植物保护学院农药实验室提供。

1.2方法

1.2.1 供试药剂的制备 海南鹿角藤采自海南大学儋州校区周边。采用渗漉法[10]，将鹿角藤洗净，室内自然晾干，粉碎，称重后加入干粉5倍体积的甲醇，避光浸提3 d，反复浸提3次。合并浸提液，45 ℃减压浓缩成膏状物为甲醇粗提物。随后将其依次分别用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，减压浓缩各萃取液获得鹿角藤4种浸膏为萃取物。置于4 ℃冰箱保存备用。

将氯仿萃取物用丙酮溶解，用适量硅胶(60～100目)拌样，采用干法装柱，硅胶为200～300目(青岛海洋化学试剂公司生产)。用石油醚∶乙酸乙酯(50∶1；25∶1；15∶1；5∶1；1∶1；0∶1)系统按照比例从小到大排序进行洗脱，合并得到6个层析相组分，减压浓缩、干燥，置于4 ℃冰箱保存备用。

1.2.2 粗提物对植物病原菌的抑菌活性测定 采用生长速率法[11-12]测定供试药剂对6种热带作物靶标菌的抑菌活性：首先，将供试药剂用适量丙酮溶解，然后用质量分数为1‰吐温-80的无菌水将供试药剂配成质量浓度为100 mg·mL-1的母液。取1 mL母液与19 mL PDA培养基充分混匀(培养基温度不宜太高，约50 ℃左右)，然后分装到3个培养皿(Ф=6 cm)中，冷却，备用，此时药剂质量浓度为5 mg·mL-1。

用打孔器(Ф=5 mm)在靶标菌菌落边缘取菌饼，菌丝面朝下，接种于带药平板中央。以含相应质量浓度的溶剂(适量丙酮与1‰吐温-80的无菌水)作空白对照，以0.36%苦参碱水剂(稀释1000倍，根据使用说明最低推荐浓度设置的)作标准药剂对照，每处理设3个重复，适温培养，十字交叉法测量菌落直径，按下列公式求抑菌率：抑制率(%)=(对照组菌落直径-处理组菌落直径)/(对照组菌落直径-菌饼直径)×100。(下同)。

1.2.3 氯仿相柱层析组分对植物病原菌的活性测定 采用生长速率法测定供试药剂对靶标菌的抑制作用：将供试组分先用少量的丙酮溶解，然后用质量分数为1‰吐温-80的无菌水将供试药剂配成质量浓度为10 mg·mL-1的母液。取1 mL母液与19 mL PDA培养基充分混匀(培养基温度不宜太高，约50 ℃左右)，然后分装到3个培养皿(Ф=6 cm)中，冷却，备用。此时药剂质量浓度为0.5 mg·mL-1。余下方法同上述1.2.2。

2 结果与分析

2.1 海南鹿角藤粗提物抑菌活性

当萃取物质量浓度为5 mg·mL-1时，甲醇粗提物和4种溶剂萃取物对供试病原菌菌丝生长的抑制作用见表1。由表1可知，甲醇粗提物和4种溶剂萃取物对供试病原菌菌丝生长具有较好的抑制作用，其中氯仿萃取物对6种供试菌株的抑制效果最好，对香蕉炭疽菌、芒果炭疽菌的抑制率分别达到82.48%、71.57%；对其它4种供试菌种的抑制率都在46%以上，显著高于对照药剂(苦参碱水剂)；同时，高于甲醇粗提物和其它3种溶剂萃取物的活性。其他3种萃取物活性与甲醇粗提物活性相当，或者活性稍差，表明鹿角藤中的抑菌活性物质可能主要存在于氯仿萃取物中。

比较同一种萃取物对不同靶标菌抑制效果可以发现，菌种之间存在较大差别。海南鹿角藤氯仿萃取物对香蕉炭疽菌、芒果炭疽菌活性最好，对芒果蒂腐菌及香蕉枯萎菌效果次之，对橡胶棒孢菌和水稻纹枯菌抑菌效果稍差。差异显著性检验结果显示，氯仿萃取物对供试靶标菌抑菌活性均比对照药剂效果突出，尤其对芒果炭疽菌、香蕉炭疽菌差异极显著。

表1 海南鹿角藤甲醇粗提物及4种萃取物(5 mg·mL-1)对6种植物病原菌的抑菌活性

*：不同小写字母为P=0.05的差异水平，不同大写字母为P=0.01的差异水平，±后数字为标准误。下同。

2.2 氯仿相柱层析组分的抑菌活性

由表1分析可知，抑菌活性物质主要存在于氯仿萃取物中，因此对氯仿萃取物进行层析分离，以石油醚和乙酸乙酯为洗脱剂，经过薄层层析归类划分，获得6个层析组分，分别标记为组分A、B、C、D、E、F。在质量浓度为0.5 mg·mL-1条件下，采用生长速率法测定上述6个组分对供试靶标菌的抑菌效果，结果见表2。

由表2可知：6个组分对供试靶标菌有较好的抑菌效果。其中组分E效果最突出，除芒果蒂腐菌外，组分E对香蕉枯萎菌、香蕉炭疽菌、芒果炭疽菌和水稻纹枯菌的活性都优于其他组分，对香蕉炭疽菌的抑菌率高达74.12%，对另外4种靶标菌也呈现明显的抑菌活性，抑菌率均大于50%。芒果蒂腐菌为敏感菌株，在6种组分中，组分C的抑制活性最好，抑制率为88.35%；其次为组分A和组分D，抑制率在70%以上。由此表明，组分E具有广谱抑菌活性，而组分C具有很好的针对性，对芒果蒂腐菌有特效。

表2 氯仿层析组分(0.5 mg·mL-1)对病原菌的抑菌活性

3 结论与讨论

海南鹿角藤粗提物、4种有机溶剂萃取物及其柱层析组分对供试靶标菌的菌丝生长具有较好的抑制作用，其中鹿角藤的氯仿萃取物抑菌活性最好。对氯仿萃取物进行层析分离，发现组分E具有广谱抑菌活性，组分C对芒果蒂腐菌有特效。

本研究中，苦参碱的稀释浓度偏大，导致抑菌活性不理想，与粗提取和萃取物活性比较，鹿角藤的提取物抑菌活性显著。同时，本研究发现了高活性层析组分，下一步将对高活性组分进一步进行色谱分离、活性追踪及结构鉴定，为发现农药先导结构和高活性化合物做准备。对其抑菌作用机理、盆裁、田间药效试验等有待进一步研究。

[1]廖凤仙，王兰英，骆焱平.鹿角藤属植物研究进展[J].广东农业科学，2013(2)：215-218.

[2]郑万钧.中国树木志：第4卷[M].北京：中国林业出版社，2004：4543.

[3]彭义平，袁作武.浅谈常用藤类药物在风湿病中的应用[J].中国民间疗法，2011，19(9)：64.

[4]赵胜华.藤类药的分类及运用[J].江西中医药，2002，33(2)：47-48.

[5]赵学敏.本草纲目拾遗[M].北京：中国中医药出版社，2007：216.

[6]Chatterjee D K，Iyer N，Ganguli，B N.Antiamoebic activity of chonemorphine，a steroidal alkaloid，in experimental models[J].Ganguli Parasitol Res，1987(74)：30-33.

[7]Roy R K，Ray N M，Das A K.Skeletal muscle relaxant effect of Chonemorpha macrophylla in experimental animals[J].Indian Journal of Pharmacology，2005，37(2)：116-119.

[8]Shende V.S.，Sawant V.A.，Turuskar A.O.，et al.Evaluation of hypoglycemic and antihyperglycemic effects of alcoholic extract of Chonemorpha fragrans root in normal and alloxan induced diabetic rats[J].Pharmacognosy Magazine，2009(5)：36-41.

[9]刘红芳，符悦冠，王祝年，等.50种热带地区植物对斜纹夜蛾的拒食活性[J].华东昆虫学报，2005，14(1)：17-20.

[10]徐任生，叶阳，赵维民.天然产物化学[M].北京：科学出版社，2004：117-119.

[11]骆焱平，卢远倩，夏治琴，等.九里香层析物的抑菌活性及成分分析[J].西北农业学报，2011，20(9)：180-183.

[12]卢远倩，王兰英，骆焱平.九里香精油的抑菌活性及成分分析[J].农药，2011，50(6)：443-445.

Fungicidal Activity of Extracts fromChonemorphasplendens

LI Dun-xi1，LIAO Feng-xian2，LIAN Chun-zhi1，QIAN Jun1，WU Hai-xia1，LUO Yan-ping2

(1.HainanProvincialForestryScienceInstitute，Haikou571100，Hainan，China； 2.CollegeofEnvironmentandPlantProtection，HainanUniversity，Haikou570228，Hainan，China)

Fungicidal activities of methanol extract and extracts with petroleum ether，chloroform，ethyl acetate，n-butanol fromChonemorphasplendensand six components from chloroform extract were tested against Colletotrichum musae，Colletotrichum gloeosporioides，Fusarium oxysporum，Botryodiplodia theobromae，Rhizoctonia solani，Corynespora cassiicola using the growth rate method.The results showed that：at the concentration of 5 mg·mL-1，the chloroform extract had significant fungicidal activity against six target fungi，especially against Colletotrichum musae and Colletotrichum gloeosporioides，the inhibitory rates became 82.48% and 71.57%.In the six components from chloroform extract，E showed the best fungicidal activity，at 0.5 mg·mL-1，its inhibitory rates was 74.12% against Colletotrichum musae.SoChonemorphasplendenshad an important research and development value.

Chonemorphasplendens；growth rate method；fungicidal activity

2014-09-11；

2014-11-01

2014年海南省应用技术研发与示范推广专项(ZDXM2014024)

李敦禧(1980—)，男，海南海口人，海南省林业科学研究所助理工程师，从事林业资源创新利用。E-mail：lidxi@126.com。

骆焱平(1973—)，男，湖北鄂州人，海南大学环境与植物保护学院教授，从事农药的教学与科研工作。E-mail：Yanpluo@126.com。

10.13428/j.cnki.fjlk.2015.03.012

Q949.95

A

1002-7351(2015)03-0060-03