Toll受体4的表达与胎膜早破患者绒毛膜羊膜炎的关系探讨

李凯霞+++刘福民

[摘要] 目的 探讨分析Toll受体4（TLR4）的表达与胎膜早破患者绒毛膜羊膜炎的关系。方法 随机选取2013年1月—2015年4月胎膜早破病例30例（研究组）与正常a晚期妊娠女性30例（对照组），分别测定胎盘组织TLR4定位、表达特点以及白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）水平，予以产后胎膜病理检查。结果 2组TLR4胎盘表达情况以及胎盘TLR4 mRNA水平差异无统计学意义（P>0.05）；研究组血清IL-8水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。最终检查发现组织绒毛膜羊膜炎23例，TLR4表达水平差异无统计学意义（P>0.05），TLR4 mRNA水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者，组织绒毛膜羊膜炎者IL-6、IL-8水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者，差异有统计学意义（P<0.05）。该组胎膜组织病理检查确认为亚临床型绒毛膜羊膜炎，三期急性炎性改变，Ⅰ期、Ⅱ、Ⅲ期改变逐渐明显。结论 TLR4上升以及IL-8上升均与绒毛膜羊膜炎有关联，IL-8变化关系到胎膜完整性，对TLR4的监测是防控胎膜早破、绒毛膜羊膜炎的关键。

[关键词] Toll受体4；表达；胎膜早破；绒毛膜羊膜炎

[中图分类号] R4.433 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2015）07（a）-0001-03

胎膜早破主要因感染所致，Toll样受体与固有免疫左右有直接关联，而TLRs作用于细胞信号转导等环节，TLR4关系到内毒素信号传导过程，且可能与胎膜早破绒毛膜羊膜炎的发生有关[1]，该研究随机选取2013年1月—2015年4月胎膜早破病例30例为研究对象，探讨分析了TLR4与胎膜早破绒毛膜羊膜炎之间的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取2013年1月—2015年4月胎膜早破病例30例（研究组）与正常晚期妊娠女性30例（对照组），研究组年龄22～34岁，平均年龄（26.8±2.4）岁；对照组年龄23～33岁，平均年龄（26.3±2.8）岁，其中15例孕周在28～37周之间（对照1组），另15例孕周≥37周（对照2组）。2组基础资料对比差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 方法

2组均在剖宫产之时剪取脐带附着处胎盘垂直断面中央标本2块，使用0.9%氯化钠溶液将标本漂洗干净，其中1块以液氮冷冻处理，置于-70℃环境中备用，另1块用来提取RNA。

2组孕妇分娩前均常规抽取肘静脉血标本各5 mL，高敏放射免疫测定标本中IL-6、IL-8水平，产后均在破口部分剪取胎膜组织标本，以10%甲醛固定送检。

免疫组化。冰冻切片取出，厚度维持在10 μm，并以冷丙酮固定处理、将内源性过氧化物酶去除。山羊血清与0.1%Triton X-100溶液通透细胞封闭处理。将兔抗人TLR2 IgG抗体滴到切片之上，置于4℃湿盒内一夜。取出后清洗，将生物素化山羊抗兔IgG/HRP二抗滴入，二氨基联苯氨显色处理，显色后再以苏木素染色，梯度乙醇处理后脱水，封片。观察组织细胞结构变化，若结构依然完整，且发现棕褐色胞浆，胞核为蓝色阳性；细胞结构完整但胞核为蓝色，未见棕褐色胞浆，则胞核映衬下可见浅蓝色，判定为阴性细胞。

检测胎盘组织TLR 4的mRNA。组织标本置于冰盒，Trizol液研磨处理，将胎盘组织总RNA以Trizol一步法提取出来，逆转录得到cDNA，将TLR2、TLR4引物加入并诱导扩增。分别在94℃环境下处理5 min、30 s，72℃环境下处理30 s、54℃环境下处理30 s，72 ℃延伸处理7 min，进行PCR反应。参照2%琼脂糖快速电泳β-actin，凝胶成像系统进行扩增产物分析。

1.3 诊断标准

参照第8版谢幸主编的《妇产科学》诊断胎膜早破[2]。胎膜组织病理检查出现炎性反应，产前阶段或分娩后24 h后测量体温在37.5 ℃之上，有高于标准值的白细胞计数，恶露有臭味；胎膜病理检测为炎性，即诊断为绒毛膜羊膜炎[3]。

1.4 统计方法

采用SPSS 16.0软件对该研究的数据进行统计学的分析，计量资料用（x±s）表示，对比应用t检验，P<0.05时，差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TLR4表达情况

2组TLR4胎盘表达情况以及胎盘TLR4 mRNA水平差异无统计学意义（P>0.05）；研究组血清IL-6、IL-8水平明显高于对照组差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 TLR4表达与绒毛膜羊膜炎关联

最终检查发现组织绒毛膜羊膜炎23例，TLR4表达水平差异无统计学意义（P>0.05），TLR4 mRNA水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者，组织绒毛膜羊膜炎者IL-6、IL-8水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 该组胎膜组织病理检查

组胎膜组织病理检查确认为亚临床型绒毛膜羊膜炎，均采用HE染色，图1为Ⅰ期绒毛膜羊膜炎胎膜组织，图2为Ⅱ期绒毛膜羊膜炎胎膜组织，图3为Ⅲ期绒毛膜羊膜炎胎膜组织，三期绒毛膜羊膜炎胎膜组织均呈现出阳性反应，且出现了急性炎性改变，Ⅰ期、Ⅱ、Ⅲ期改变逐渐明显。

3 讨论

生殖道病原微生物的上行性感染等因素会直接导致胎膜早破等现象的发生。国外学者提出，正常足月妊娠者胎盘免疫组化研究可见TLR2、TLR4正常表达，这是因为上述物质在分娩发动调节过程中发挥着一定的作用[4]，研究还发现，TLRs直接影响介导母体胎儿之间的天然免疫工作[5]。该研究为探讨分析Toll受体4（TLR4）的表达与胎膜早破患者绒毛膜羊膜炎的关系，使用RT-PCR技术以及免疫组化技术分别测定正常妊娠晚期以及胎膜早破孕妇胎盘组织TLR4 mRNA表达情况以及蛋白表达特点，检测结果发现，2组TLR4胎盘表达情况以及胎盘TLR4 mRNA水平差异无统计学意义（P>0.05）；研究组血清IL-8水平明显高于对照组差异有统计学意义（P<0.05）。最终检查发现组织绒毛膜羊膜炎23例，TLR4表达水平差异无统计学意义（P>0.05），TLR4 mRNA水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者，组织绒毛膜羊膜炎者IL-8水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者差异有统计学意义（P<0.05）。提示TLR4在正常妊娠情况下以及胎膜早破情况下有相似的胎盘组织表达特征，胎膜早破确实不是因单一因素产生的。