七种呼吸道病毒抗原检测在儿童呼吸道感染中的分析

梁大立　陆灶其　徐淼玲　朱振杰

七种呼吸道病毒抗原检测在儿童呼吸道感染中的分析

梁大立陆灶其徐淼玲朱振杰

作者单位:511518清远市，暨南大学附属清远市人民医院检验科

目的了解广东清远地区儿童呼吸道病毒感染情况，为儿童呼吸道病毒感染的诊断提供依据。方法收集我院2014年2月-2015年1月住院的呼吸道疾病患儿5121例，采用直接免疫荧光法对其鼻咽部分泌物进行流感病毒 （influenza virus，IF）A、IFB、副流感病毒 （parainfluenza virus，PIV）1、PIV2、PIV3、呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）以及腺病毒（adenovirus，ADV）进行抗原检测，并对数据进行统计学分析。结果5121例呼吸道感染患儿中检出呼吸道病毒1801例，阳性率为35.17%。其中，RSV为937例（52.03%）、IFA为312例（17.32%）、ADV为209例（11.60%）、PIV3为186例（10.33%）、PIV1为60例（3.33%）、IFB为38例（2.11%）、PIV2为5例（0.28%）、混合感染为 54例（3.00%）。男、女感染呼吸道病毒患儿的阳性率经比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。≤1岁和2～3岁患儿感染病毒的阳性率均高于4～5岁、6～7岁和8～12岁患儿，且各组间比较差异有统计学意义 （P均＜0.05）。≤1岁和2～3岁患儿感染RSV的阳性率最高（61.84%，44.99%），其余三组患儿感染ADV的阳性率最高（44.52%，36.84%，53.49%）。5121例患儿在春季感染病毒的阳性率高于夏、秋、冬季，经比较差异有统计学意义（P＜0.05），其中春、夏、秋季均以感染RSV的阳性率最高（52.26%，73.61%，33.12%），冬季以感染ADV的阳性率最高（23.34%）。5121例患儿中，患急性气管炎的患儿感染病毒的阳性率高于患上呼吸道感染、肺炎和支气管炎的患儿，经比较差异有统计学意义（P＜0.05），其中上呼吸道感染、急性气管炎和肺炎患儿感染RSV的阳性率最高（66.53%，38.81%，61.25%），支气管炎患儿感染IFA的阳性率最高（37.58%）。54例混合感染患儿中，以感染RSV的患儿最多（26例）。结论RSV是清远地区儿童呼吸道病毒感染的主要病原体，3岁以下儿童呼吸道病毒感染率最高，春季为呼吸道病毒感染高发季节。

呼吸道病毒；儿童；直接免疫荧光法；呼吸道合胞病毒；腺病毒；流感病毒；副流感病毒

10.3969/j.issn.1674-7151.2015.04.005

呼吸道感染是儿童感染性疾病中最常见的疾病，据统计，90%以上的急性呼吸道感染是由病毒引起［1］。为了解广东清远地区儿童呼吸道病毒的感染情况，本文采用直接免疫荧光法检测呼吸道感染患儿鼻咽部分泌物中流感病毒（influenza virus，IF）A、IFB、副流感病毒（parainfluenza virus，PIV）1、PIV2、PIV3、呼吸道合胞病毒 （respiratory syncytial virus，RSV）以及腺病毒（adenovirus，ADV）7种常见病毒，旨在探讨本地区儿童呼吸道病毒感染的分布情况。现报告如下。

1　资料与方法

1.1临床资料收集2014年2月-2015年1月我院住院的呼吸道感染患儿5121例，其中男3403例，女1718例，中位年龄3.2岁，经临床确诊为上呼吸道感染（急性鼻炎、咽炎、喉炎）2780例、急性气管炎947例、支气管炎1152例、肺炎242例。诊断标准参照《诸福棠实用儿科学》第7版［2］。5121例患儿按年龄分为≤1岁组3190例，2～3岁组1062例，4～5岁组478例，6～7岁组201例，8～12岁组190例。

1.2仪器与试剂呼吸道病毒抗原检测试剂盒为美国Diagnostic Hybrids公司产品。NIKON E100型荧光显微镜购自日本NIKON公司。

1.3方法

1.3.1标本采集与检测用植绒鼻咽拭子从患者的鼻咽部取样，将鼻咽拭子放入储存管中（含2 ml生理盐水），立即送检。采用直接免疫荧光法检测IFA、IFB、PIV1、PIV2、PIV3、RSV和ADV7种呼吸道病毒抗原。

1.3.2细胞涂片制备在漩涡混匀器上轻微混匀3次，见浑浊后去掉植绒拭子。以离心半径10 cm，2000 r/min离心10 min，留取200 μl上清液，吸管上下吹打混匀，形成混浊细胞悬浮液，在载玻片上点样，每个点加25 μl细胞悬液，电吹风冷风下风干10-15 min至干燥，浸没在冷丙酮溶液固定10 min，取出玻片，风干。在标本玻片和试剂盒配套已点样的对照玻片的每个细胞点上加1滴相应的荧光抗体（约25 μl），在37℃湿盒孵育15-30 min，PBS冲洗一遍后浸没入PBS中洗两遍（PBS不能重复使用），风干后每个细胞点上加1滴封闭液。最后覆上盖玻片。在荧光显微镜下观察结果。

1.3.3结果判断在检测标本前先检查阳性和阴性对照。荧光显微镜下显示苹果绿荧光的细胞，为阳性细胞，当放大倍数为200倍时，在视野中找到≥2个阳性细胞，判为标本阳性。而未发生抗原抗体特异性反应的细胞，被Evans蓝染成红色，判为标本阴性。

1.3.4统计学处理采用SPSS 13.0统计软件对数据进行分析，计数资料的比较采用R×C卡方检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.15121例患儿呼吸道病毒检出的情况5121例患儿中共检出呼吸道病毒感染者为1801例，总阳性率为35.17%，其中各类型呼吸道病毒的构成比分别为 IFA（17.32%，312/1801）、IFB（2.11%，38/1801）、ADV（11.60%，209/1801）、RSV（52.03%，937/1801）、PIV1（3.33%，60/1801）、PIV2（0.28%，5/1801）、PIV3（10.33%，186/1801）及混合感染（3.00%，54/1801）。3403例男性患儿中有1176例（34.56%）呼吸道病毒感染阳性，1718例女性患儿中有625例（36.38%）呼吸道病毒感染阳性，两者阳性率经比较，差异无统计学意义（χ2=1.662，P=0.197）。感染病毒类型中，RSV的阳性率明显高于其他6种呼吸道病毒及混合感染的阳性率，经比较差异具有统计学意义（χ2=356.18，P＜0.05），见表1。

2.25121例患儿呼吸道病毒感染阳性率与年龄的关系5个年龄组患儿呼吸道病毒感染总阳性率经比较，差异有统计学意义 （χ2=556.01，P＜0.05），其中≤1岁、2～3岁两组患儿呼吸道病毒感染总阳性率分别为 36.55%（1166/3190）和 36.63%（389/ 1062），明显高于其他三组，而≤1岁组和2～3岁组患儿呼吸道病毒感染总阳性率经比较，差异无统计学意义 （χ2=0.002，P=0.964），≤1岁组和2～3岁组均以RSV感染阳性率最高，4～5岁组、6～7岁组和8～12岁组均以ADV感染阳性率最高，见表2。

表1　5121例患儿7种呼吸道病毒检出的情况［n（%）］

2.35121例患儿呼吸道病毒种类的季节分布5121例患儿在春 （2014年2月-2014年4月）、夏（2014年5月-2014年7月）、秋（2014年8月-2014年10月）、冬（2014年11月-2015年1月）四季的呼吸道病毒总阳性率分别为 43.80%（773/1765）、39.42%（557/1413）、15.91%（154/968）和 32.51%（317/975），经比较差异有统计学意义（χ2=6.176，P＜0.05），其中春季呼吸道病毒感染的阳性率最高。病毒感染类型中，春、夏、秋季均以RSV阳性率最高，冬季以ADV阳性率最高，见表3。

2.45121例患儿呼吸道病毒在不同疾病中的检出情况4种呼吸道疾病中，急性气管炎的病毒总阳性率最高（44.35%），上呼吸道感染次之（35.79%），其后为肺炎（33.06%）和支气管炎（26.56%）。不同疾病呼吸道病毒阳性率经比较，差异有统计学意义（χ2=31.334，P＜0.05）。病毒感染类型中，上呼吸道感染、急性气管炎和肺炎均以RSV的阳性率最高，支气管炎以IFA的阳性率最高，见表4。

2.5混合感染检出情况1801例呼吸道病毒感染患儿中有54例为混合感染，其中，混合感染含有RSV的例数最多，为26例，其次为IFA（20例）。

3　讨论

近年来，儿童呼吸道病毒感染的检测越来越受到重视，而呼吸道病毒感染因地区、医院、年份、季节和年龄的不同存在差异［3］。婴儿RSV感染率最高，随着年龄的增加感染率明显下降。文献［4］报道，婴儿出生后第1年约50%感染过RSV。ADV在我国的感染率较高，多数人在婴幼儿时期被感染，有时可形成潜伏感染而成为病毒携带者，特别是7b型ADV往往导致婴幼儿重症肺炎。在IF感染中，3～7岁患儿以A型为主，近年来B型有上升趋势［5］。PIV对于成人主要侵犯呼吸道黏膜的表层组织，引起上呼吸道感染，对于5岁以下的婴幼儿，常侵犯气管、支气管黏膜上皮细胞，引起黏膜糜烂，当侵犯肺泡上皮及间质细胞则引起间质性肺炎或急性阻塞性喉气管支气管炎和肺炎。

表2　5121例患儿呼吸道病毒阳性率与年龄的关系［n（%）］

表3　呼吸道病毒的季节分布［n（%）］

表4　几种常见呼吸道疾病的病毒检出情况［n（%）］

本文对5121例患儿的呼吸道病毒感染情况进行研究，有1801例患儿呼吸道病毒感染阳性，总阳性率为35.17%。其中男、女患儿呼吸道病毒感染阳性率经比较，差异无统计学意义（P＞0.05），说明呼吸道病毒感染情况与性别无关。与季伟、田曼等［6，7］报道的基本一致，但低于赵百惠等［8］报道的2009-2010年上海市儿童呼吸道病毒感染阳性率（58%）。

本文研究将5121例患儿根据年龄划分为≤1岁、2～3岁、4～5岁、6～7岁，8～12岁五个组，各组的病毒总阳性率分别为 36.55%、36.63%、30.54%、28.36%和22.63%。其中≤1岁和2～3岁组的检出率明显高于其他三组，各组病毒检出率差异有统计学意义 （P＜0.05），提示3岁以下儿童更易受病毒感染，与文献［9］报道的相似。随着年龄增长，病毒感染阳性率逐渐下降，可能与相应年龄阶段的免疫功能状态等因素有关。RSV和ADV感染分别在3岁以下和 4～12岁患儿中的阳性率最高（61.84%，44.99%，44.52%，36.84%，53.49%），因此这两种病毒是儿童呼吸道感染的防治重点。

呼吸道病毒感染有一定的季节性，以春、冬季为最多见。本文研究结果显示，5121例患儿在春季的病毒感染阳性率最高，为43.80%，各季节病毒阳性率差异有统计学意义（P＜0.05），提示春季为本地区呼吸道病毒感染的高发季节。春、夏季病毒感染阳性率高于秋、冬季，这与文献［10，11］报道的结果不一致，主要是夏季RSV检出率较高引起，这与清远地区气候有一定关系，RSV感染有很强的季节性［12］，清远属亚热带气候，夏季时间长、降雨多、温度高、湿度大，易发生RSV感染。

不同疾病中，急性气管炎的呼吸道病毒感染总阳性率最高，上呼吸道感染次之，其次依次为肺炎、支气管炎，阳性率分别为44.35%、35.79%、33.06%和26.56%。不同疾病的呼吸道病毒感染阳性率经比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；病毒感染类型中，RSV感染的阳性率最高，为52.03%，且该病毒在上呼吸道感染、急性气管炎和肺炎中的阳性率均最高，提示RSV感染易引起急性气管炎和上呼吸道感染，是防治儿童呼吸道感染的关键。IFA在支气管炎中的阳性率最高，是支气管炎的主要病原体。在上呼吸道感染中，IFA及PIV3也不容忽视。而在肺炎中主要检出了RSV和IFA。PIV2在常见呼吸道疾病中的检出率最低。

5121例患儿中，RSV单独感染的例数最多（937例），说明RSV是2014年2月-2015年1月清远地区呼吸道病毒感染的主要病原体，这与兰州［13］报道的不一致，而与广州、杭州、嘉兴［14-16］报道的结果一致。在54例两种及以上病毒混合感染的患儿中，与RSV相关的感染最多（26例），提示RSV易发生混合感染。

综上所述，春季为本地区呼吸道病毒感染的高发季节，且3岁以下儿童感染呼吸道病毒的可能性较高，其中RSV是呼吸道病毒感染的主要病原体。因此，监测儿童呼吸道病毒感染情况，为指导临床合理用药，预防及控制疾病的流行提供科学依据。

1张卓然，主编.临床微生物学和微生物检验.第3版.北京:人民卫生出版社，2003，351.

2胡亚美，江载芳，主编.诸福棠实用儿科学.第7版.北京:人民卫生出版社，2002，1167-1175.

3张雪清，胡骏，宁小晓，等.2425例小儿呼吸道感染7种常见病毒检出情况分析.检验医学，2013，28:602-605.

4Welliver RC.Respiratory syncytial virus and other respiratory viruses. Pediatrinfect Dis，2003，22:6-10.

5吴少慧，于伟，张眉眉，等.辽宁省1999-2005年流感病原学检测.中华流行病学杂志，2006，27:238-239.

6季伟，陈正荣，郭洪波，等.苏州儿童医院住院儿童呼吸道病毒的流行特点及与气候因素的相关性研究.中华预防医学杂志，2011，45:205-210.

7田曼，施圣云，秦铭，等.儿童急性下呼吸道感染病毒病原学分析.临床儿科杂志，2010，28:120-123.

8赵百惠，沈佳仁，高烨，等.2009-2010年上海市儿童呼吸道病毒病原谱的建立和分析.卫生研究，2011，40:635-637.

9陆小梅，黎四平，何月敬，等.呼吸道感染患儿1256例多种呼吸道病毒抗原检测结果分析.实用儿科临床杂志，2012，27:1733-1735.

10黄芳，石伟先，崔淑娟，等.北京地区2010年10月至2011年4月急性呼吸道感染病毒流行特征分析.国际病毒学杂志，2011，18: 97-100.

11章爱莲，吴鸣，张旭，等.住院儿童常见呼吸道病毒检测结果.浙江预防医学，2013，25:62-64.

12黄德珉，叶鸿瑁，罗凤珍，主译.儿科感染性疾病.第1版.辽宁:辽宁教育出版社，2000，1271.

13周兰霞，唐艳，颉晓玲，等.四种呼吸道病毒感染病原学分析.中国医师进修杂志，2013，36:47-49.

14毛晓健，曾其毅，陈焕辉，等.2005-2007年广州地区住院肺炎患儿呼吸道合胞病毒感染分析.实用儿科临床杂志，2009，24:745-747.

15汪天林，陈志敏，汤宏峰，等.杭州地区小儿呼吸道合胞病毒感染流行特点与气象学因素.中华流行病学杂志，2005，26:588-591.

16陆红霞，李红胜，李胜兵.儿童急性下呼吸道感染的病毒抗原检测及结果分析.现代医学，2013，25:686-687.

（本文编辑:李霦）

Analysis of seven detection results of respiratory viruses in chidren

LIANG Da-li，LU Zao-qi，XU Miao-ling，et al.Department of Clinical Laboratory，Qingyuan People＇s Hospital Affiliated to Jinan University School of Medicine，Qingyuan 511518，China

ObjectiveTo investigate the epidemic situation of children with respiratory viruses in Qingyuan，Guangdong.And to provide evidence for the diagnosis of respiratory virus infections in children. Methods5121 inpatients with respiratory disease were collected in our hospital from February 2014 to January 2015.Influenza virus（IF）A，IFB，parainfluenza virus（PIV）1，PIV2，PIV3，respiratory syncytial virus（RSV）and adenovirus（ADV）were detected by direct immunofluorescent.All data were analyzed statistical significance.ResultsThere were 1801 cases（35.17%）were viral positive in 5121 patients.Among the positive cases，there were 937 cases in RSV（52.03%），312 cases in IFA（17.32%），209 cases in ADV（11.60%），186 cases in PIV3（10.33%），60 cases in PIV1（3.33%），38 cases in IFB（2.11%），5 cases in PIV2（0.28%）and 54 cases in mixed infection（3.00%）.Postitive rates of respiratory viruses in male and female had no statistical significance（P＞0.05）.Positive rates of patients between≤1 age and 2～3 age were all higher than that of 4～5 age，6～7 age and 8～12 age patients，and the differences had statistical significance（Pall＜0.05）.The highest positive rate of respiratory viruses in≤1 age and 2～3 age patients was RSV（61.84%，44.99%），and in other three groups was ADV（44.52%，36.84%，53.49%）.The highest positive rate of respiratory viurses was in spring，which compared with summer，autumn and winter had statistical significance（P＜0.05）.The highest positive rate of respiratory viruses in spring，summer and autumn was RSV（52.26%，73.61%，33.12%），and in winter was ADV（23.34%）.The positive rate of patients with acute tracheitis was higher than that of patients with upper respiratory infection，pneumonia and bronchitis，and the differences had statistical significance（P＜0.05）.The highest positive rate of respiratory viruses in upper respiratory infection，acute tracheitis and pneumoniawasRSV（66.53%，38.81%，61.25%），andinbronchitiswasIFA（37.58%）.In54patientswith mixedinfection，the most cases was patients with RSV（26 cases）.ConclusionSpring is the high incidence of respiratory virus infection in children in Qingyuan.The infection rate of children under 3 years old is the highest. The main pathogen is RSV.

Respiratory virus；Chidren；Direct immunofluorescence assay；Respiratory syncytial virus；Adenovirus；Influenza virus；Parainfluenza virus

（2015-04-29）