新型微生态饲料添加剂的致畸试验

郝福星　周泽伟　郑玲敏　张雨梅

摘要：微生态制剂是饲料及养殖业中应用比较广泛的一类添加剂，通过大鼠传统致畸试验，评价某生物有限公司研制的新型微生态饲料添加剂的致畸作用。在Wistar大鼠受孕7～15 d期间，分别对其给予500、100、20 mg/kg剂量的微生态饲料添加剂进行灌胃，以生理盐水作为阴性对照；用畸胎率、活胎仔平均畸形率、母体畸胎率等指标评价其致畸作用。结果表明，受试物各剂量组的孕鼠行为正常，无中毒或死亡情况；受试物各剂量组的吸收胎率、死胎率、畸胎率、活胎仔平均畸形率、母体畸胎率均不高于对照组，且无显著差异。综合试验结果可知，该饲料添加剂传统致畸试验呈阴性，无明显的致畸作用。

关键词：微生态制剂；饲料添加剂；粪肠球菌；致畸试验；大鼠

中图分类号： S816.73 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2015）07-0218-02

微生物饲料添加剂也称微生态制剂，是当前饲料及养殖业中应用比较广泛的一类添加剂，常作为药物添加剂的有效替代品使用。动物微生态制剂是由正常菌群微生物制成的一类环保生物制品，它可通过调节机体微生态平衡来预防疾病、提高饲料转化率、促进动物健康、保护生态环境，是无毒、无污染的饲料添加剂产品[1]，在畜牧业、水产养殖业中有广泛应用前景[2-3]。粪肠球菌别称粪链球菌，是乳酸菌中的一种，该菌是一种兼性厌氧菌，是能产多种酶、维生素（主要是B族维生素）的有益菌，在动物体内可产生大量乳酸、分解酶、多种促生长因子[4]。作为畜禽饲料添加剂，粪肠球菌可用于防治畜禽因肠道菌群失调引起的下痢，具有调节肠道菌群失调、减少病原菌侵袭、抑制有害菌生长的作用，并且能够提高饲料转化率、降低生产成本[5-6]。本研究通过大鼠的传统致畸试验，考察蛋白质修饰粪肠球菌微生态新制剂作为饲料添加剂使用是否存在致畸作用，以期为该产品的应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验试剂

试验试剂为蛋白质修饰粪肠球菌粉剂，活菌数 5×109 CFU/g，由江蘇省某生物有限公司研制。配制不同浓度的水溶液，以10 mL/kg的体积灌胃。

1.2 试验动物

8周龄Wistar大鼠（清洁级），约100只，购自扬州大学比较医学中心。动物生产许可证号：SCXK（苏）2012-0004，使用许可证号：SYXK（苏）2012-0029。分笼饲养，自由采食饮水，室温（22±3） ℃，自然光照，相对湿度55%～75%。

1.3 试验方法

1.3.1 孕鼠及剂量设置 雌鼠、雄鼠按1∶1同笼，次日早晨以检查到阴道栓的为受孕鼠，记为受孕开始。在受孕7 ～15 d，每天经口给予微生态制剂。试验分3个受试物剂量组和阴性对照组，每组10只大鼠。添加剂剂量分别设为500、100、20 mg/kg，灌胃给药；阴性对照组用生理盐水代替。给药期间隔天称1次质量，并根据体质量调整添加剂剂量。

1.3.2 畸形检查 于孕20 d称质量后处死孕鼠，剖开腹腔，取出子宫。分别检查并记录左、右侧的黄体数、窝质量（子宫连胎鼠）、子宫质量，计数活产幼仔数、死胎、吸收胎数。根据农业部1247号公告中《兽药大鼠传统致畸试验指导原则》中的相应方法进行胎鼠外观畸形、内脏畸形、骨骼畸形的检查，记录畸胎总数和畸形总数[3]，计算死胎率、吸收胎率、畸胎率、活胎仔平均畸形率、母体畸胎率。

1.4 数据统计

用SPSS 12.0软件进行数据处理，数据用“平均值±标准差（x±s）”表示；显著性分析采用t检验或χ2检验。

2 结果与分析

2.1 对孕鼠体质量的影响

给药期间孕鼠的一般状况良好，饮食正常，未出现异常症状。试验期间各剂量组孕鼠体质量与阴性对照组比较无显著性差异，受孕20 d孕鼠体质量见表1。

2.2 对大鼠生殖机能的影响

受孕20 d后统计微生态制剂处理及正常对照组孕鼠的黄体数、着床数、活胎数、吸收胎数、死胎数。由表2可见，各处理组吸收胎率、死胎率均低于对照组；黄体数、着床数、总仔数、活胎数、吸收胎数、死胎数与对照组比较差异不明显。

2.3 对胎鼠发育的影响

受孕20 d对各试验组孕鼠进行剖检，由表3可见，各处理组平均窝仔数、尾长与对照组无显著差异；受试物处理组胎鼠体质量、体长显著低于阴性对照组（P<0.05）；100、500 mg/kg 剂量胎盘质量显著低于阴性对照组（P<0.05）。

2.4 对胎鼠畸形的影响

畸形检查中发现500 mg/kg剂量处理组有1只胎鼠一侧眼球缺失，20 mg/kg剂量处理组、阴性对照组各有1只一侧肾脏缺失，未发现骨骼畸形；各剂量组在常见各畸形指标上，与正常对照组无明显差异，详见表4。

3 结论与讨论

试验结果表明，本新型微生态饲料添加剂对Wistar大鼠无明显的致畸作用。本试验中受试物对大鼠的生殖机能指标如怀孕率、黄体数、着床数、窝仔数、吸收胎率、死胎率等无明显影响，对胎鼠也无明显的致畸作用。但受试物处理组胎鼠的体质量及体长均低于对照组，是受试物的胚胎毒性还是由于饲料摄入不足导致母体营养水平不够引起的，还须进一步的试验研究。受试物组怀孕母鼠体质量均稍低于对照组数据，可能与受试物添加后饲料适口性不够好引起摄入减少有关。如果进行繁殖试验，特别是多代的繁殖试验，可以进一步评估对胎儿生长的影响。

参考文献：

[1]滕 颖，陈先国. 动物微生态制剂的研究进展[J]. 中国兽药杂志，2005，39（11）：47-50.

[2]王金合. 微生态饲料添加剂及其在畜禽生产中的应用研究现状[J]. 畜牧与饲料科学，2009，30（2）：36-38.

[3]丁昕颖，韩永胜，丁得利，等. 饲用微生态制剂在畜牧生产中的应用及问题[J]. 中国畜禽种业，2014（2）：25-27.

[4]王 红，许玉军. 动物微生态制剂的分类与应用条件[J]. 养殖技术顾问，2012（11）：56.

[5]李笑樱，范 彧，马秋刚，等. 微生态制剂对产蛋后期蛋鸡饲料营养物质消化率的影响[J]. 中国饲料，2011（20）：20-23.

[6]潘宝海，孙冬岩，孙笑非，等. 不同微生物饲料添加剂对断奶仔猪生长性能的影响[J]. 饲料研究，2014（5）：46-47.