甲基化衍生—高效液相色谱法检测北五味子中的代森锰锌

张悦等

摘要：利用甲基化衍生-高效液相色谱法检测北五味子[Schisandra chinensis（Turcz.）Bail.]中代森锰锌残留量。以BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）为固定相；乙腈∶水（18∶82，V/V）为流动相；检测波长为 272 nm。结果表明，代森锰锌的平均回收率达97.0%，RSD为1.36%，最低检出限（LOD）为0.02 mg/kg，最低检测浓度（LOQ）为0.05 mg/kg，结果符合农药残留试验准则要求。北五味子样品中均未检出代森锰锌。

关键词：甲基化；代森锰锌；北五味子[Schisandra chinensis（Turcz.）Bail.]

中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）12-3000-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.12.051

Determination of Mancozed in Schisandra chinensis（Turcz.）Bail. by

Methylation-derived UPLC

ZHANG Yue， ZHANG Zheng-hai， LI Ai-min，WANG Yu-fang， CHENG Xiao-dan， ZHAO Wei-wei

（Institute of Special Animal and Plant Science， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Changchun 130112， China）

Abstract： A methylation-derived UPLC for detecting mancozeb residue in Schisandra chinensis（Turcz.）Bail. was studied in this paper. The analysis was performed on the column of BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm） with the mobile phase of acetonitrile-water（18∶82，V/V）， the wavelenth detected was 272 nm. The results showed that the average recovery reached 97.0% with RSD of 1.36%. The LOD and LOQ were 0.02 and 0.05 mg/kg，respectively. This satisfied results were fit for the testing standard of pesticide residue.No mancozeb residues was detected in the samples.

Key words： methylation； mancozeb； Schisandra chinensis（Turcz.）Bail.

代森锰锌（Mancozed）属乙撑二硫代氨基甲酸酯（盐）类杀菌剂（EBDCs），是锌离子与代森锰的配位络合物，分子式（C4H6MnN2S4）xZny（x∶y=1∶0.091，MW≈270），溶解性差，不溶于水和常见有机溶剂，具有广谱低毒低残留高效力特性，对北五味子[Schisandra chinensis（Turcz.）Bail.]黑斑病具有良好的防治效果[1]。EBDCs本身无食品安全风险，但是在生产、贮存和使用过程中降解产生的主要代谢产物乙撑硫脲（ETU）却具有致癌、致畸、致突变作用，危害人体健康。北五味子为传统中药，出口韩国、日本及东南亚地区，检测代森锰锌的残留量对提高我国北五味子产值具有重要意义。

目前代森锰锌测定主要包括分光光度法、毛细管电泳法、顶空气相色谱法和甲基化衍生液相色谱法等[2]。其中分光光度法和毛细管电泳法灵敏度低，仅能检测高浓度样品；顶空气相色谱法通常被列为各国标准分析方法，但该法分析的是EBDCs类杀菌剂产生的二硫化碳总量，缺乏专一性；甲基化衍生原理最早被Gustafsson和Thompson应用于福美双的含量分析，马婧玮和潘灿平等人在其基础上建立起代森锰锌的分析方法，其原理为在碱性条件下，用乙二胺四乙酸二钠（EDTA）将代森锰锌转化为代森钠，代森钠能与碘甲烷发生甲基化反应，得到甲基化产物，最后由HPLC检测甲基化产物。该法尽管消耗溶剂多、耗时长、前处理复杂，但其精确度高[3，4]，反应式如图1。

1 材料与方法

1.1 材料

北五味子取自中国农业科学院特产研究所左家试验基地（N44°04′，S126°05′），以6年生结果树作为试验植株，在6月中旬（黑斑病的发病前期）喷施不同浓度（400，600和800 mg/L）的代森锰锌，以1，2，3标示，每处理10株，设3个平行，并设置保护行，于9月上旬统一采收，自然条件下晾干，粉碎。

1.2 仪器与试剂

RE-200A旋转蒸发器（上海亚荣）；FA2004B电子天平（上海精科）；ACQUITY超高效液相色谱仪，配备二极管阵列检测器（美国Waters）；64R低温高速离心机（美国Beckman）。

纯度88%代森锰锌标准品（北京上立方联合化工技术研究院）；70%代森锰锌粉剂（江苏省利民化工有限责任公司）；乙腈（分析纯）；碘甲烷；乙二胺四乙酸二钠；L-半胱氨酸盐酸盐；四丁基硫酸氢铵等。

1.3 方法

1.3.1 溶液配制 溶液A为50 g L-半胱氨酸盐酸盐与93.46 g乙二胺四乙酸二钠以及18 g氢氧化钠配制成pH 9.5的1 L混合溶液；溶液B为在225 mL氯仿和75 mL正己烷的混合溶液中加入1 mL碘甲烷，配制成含0.05 mol/L碘甲烷的混合溶液；溶液C为20 mL 1，2-丙二醇和80 mL二氯甲烷的混合溶液。

1.3.2 代森锰锌标准溶液的配制 称取代森锰锌标准品0.011 3 g于10 mL的容量瓶中，用溶液A溶解并定容，现用现配。

1.3.3 前处理 取1，2，3组北五味子样品，各称取10 g于250 mL三角瓶中，分别加入50 mL 溶液A，封口膜封口。于25℃、180 r/min条件下振荡10 min后转移至离心管中，3 800 r/min离心5 min，取上清液加入25 mL溶液A涡旋5 min， 同上离心5 min，合并上清液于250 mL三角瓶中；边搅拌边加入8 mol/L氢氧化钠， pH 8.0时加入2.5 mL 0.41 mol/L四丁基硫酸氢铵水溶液，然后加入溶液B，振摇10 min后静置10 min，收集有机层。有机层用少量无水硫酸钠干燥后转移至旋蒸瓶中，迅速加入2.5 mL溶液C，30 ℃减压浓缩，加入1 mL乙腈溶解后，过0.45 μm有机滤膜，待测。

1.3.4 液相色谱条件 色谱柱为BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），流动相为乙腈：水（18∶82，V/V），流速0.5 mL/min，柱温25 ℃，检测波长272 nm，进样量2 μL。

2 结果与分析

2.1 方法学分析

代森锰锌甲基化衍产物保留时间为4.80～4.82 min，色谱图见图2。

用溶液A稀释得到不同浓度的代森锰锌标准溶液，各吸取1 mL同上法分析，结果表明，代森锰锌在1～50 mg/L范围内线性关系良好。

去衍生化样品于同一色谱条件下，连续进样5次[5]，测定色谱峰面积。结果表明，峰面积的相对标准偏差值为0.64%，表明仪器精密度良好。

在同一色谱条件下，标准品溶液在相同步骤衍生化0、2、3、4 h后，测定其峰面积，计算得RSD值为1.29%，表明代森锰锌衍生化产物在4 h内稳定。

取相同代森锰锌标准品溶液5份，同上法分析，得RSD值为1.19%，表明重复性良好。

取5份北五味子样品各1 mL，分别加入代森锰锌标准品溶液8.85 μg，同上法分析，计算回收率结果见表1。

在样品中添加一定量的代森锰锌标准品溶液，处理后分析，最低检出限（LOD）3倍信噪比为0.02 mg/kg；最低定量浓度（LOQ）为0.05 mg/kg，低于国家推荐小粒水果MRL值（5 mg/kg）。

2.2 样品分析

取喷施了不同剂量的样品，经处理分析，色谱图见图3，测定结果见表2。由图3和表2可知，样品中未检出代森锰锌。

3 讨论

本试验利用代森锰锌甲基化衍生原理，采用超高效液相色谱检测了北五味子中代森锰锌残留量，其平均回收率为97.0%，在农药残留试验准则范围内[5]；最低检出限（LOD）为0.02 mg/kg；最低检测浓度（LOQ）为0.05 mg/kg，满足国家推荐小粒水果MRL值（5 mg/kg）的检测要求。

北五味子为传统药材，主要受到黑斑病和白粉病困扰，在生长期喷洒适量代森锰锌可以起到良好的防治效果，但其在农产品表面的残留存在潜在的食品安全风险，为此，本试验利用甲基化衍生-超高效液相色谱法检测了其在生长期喷洒不同3组浓度的代森锰锌的北五味子果实。结果表明，在间隔近3个月后代森锰锌在北五味子上无残留。

参考文献：

[1] 李爱民.五味子栽培与选种技术[M].北京：金盾出版社，2008.

[2] 王艳丽，陈武瑛，廖晓兰.代森锰锌残留分析研究进展[J].现代农业科技，2010（21）：195-196.

[3] 马婧玮，董姝君，游文宇，等.甲基化衍生-高效液相色谱法检测代森锰锌在花生中的残留[J].农药学学报，2007，9（3）：297-300.

[4] SN/T 0711-2011，出口茶叶中二硫代氨基甲酸酯（盐）类农药残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法[S].

[5] NY/T788-2004，农药残留试验准则[S].