复方中药软膏对小鼠急性软组织损伤中炎性因子的影响

刘 勇，柏 合，徐世文

(1.东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030；2.牡丹江医学院实验动物中心，黑龙江牡丹江157011；3.牡丹江医学院黑龙江省组织损伤与修复重点实验室，黑龙江牡丹江157011)

复方中药软膏是根据我院的验方研制而成，主要由乳香、没药、当归、伸筋草等12味中药所组成，具有活血祛瘀、舒筋活络、消肿止痛等功效。临床治疗软组织损伤效果良好。为探讨其活血祛瘀、抗炎消肿的作用机理，从组织中炎性因子含量方面对其进行了实验研究。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验药品 复方中药软膏（由乳香、当归、红花、伸筋草等12味中药组成，生药含量为0.32g·g-1）由本院制备；按摩乳（济南全力制药有限公司，批号：Z37020377）；硫化钠；TNF-α、NOELISA检测试剂盒（博慧斯生物医药科技有限公司）。

1.1.2 实验动物 昆明种小鼠，体质量18～22g，雌雄各半，合格证件编号：SCXK（蒙）2002-0001号。

1.1.3 主要仪器研钵；离心机（SC-04型，安徽中科中佳科学仪器有限公司）；超净工作台（ZHjH-C1112B，南京依贝仪器设备有限公司）；酶标仪（BiTeK Synergy H4）；恒温箱（DHP-420型）。

1.2 实验方法

1.2.1动物造模及分组 随机选取72只小鼠，为避免环境因素造成的个体差异，先适应性饲喂7天。在造模前一天，用电动剃毛器和8%硫化钠溶液脱去小鼠左侧臂部及大腿部毛。造模时，选择大腿中部外侧软组织做好标记，将小鼠侧卧式固定于自制软组织打击器上，用50g砝码从15cm高度自由落下，连续击打2下，打击后肉眼即见打击部位肿胀、瘀血、皮肤完整无破损且无骨折[1]，说明造模成功。造模成功后随机分为6组，即空白对照组、模型组、阳性对照组（按摩乳组）、复方中药软膏高、中、低剂量组，每组12只。每组小鼠在软组织损伤处涂以相应药物，空白组及模型组不给药。每天涂药3次。

1.2.2 损伤模型局部组织中两种炎性因子的影响 严格按照试剂盒操作说明测定损伤局部组织中COX-2、HIS的含量。

1.2.4 统计学方法 应用SAS9.0处理所得实验数据。实验数据以x±s表示,P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著，均有统计学意义。

2 结果

2.1 各组小鼠损伤局部软组织中COX-2的含量 外用中药软膏高、中剂量组的TNF-α 含量显著低于模型组（P<0.01）。与阳性药物组比较则无统计学差异。外用中药软膏降低模鼠肌组织中COX-2含量呈一定的剂量依赖性，结果如表1所示。

表1 各组小鼠局部组织匀浆COX-2 含量比较（x±s ，n=10）

表2 各组小鼠局部组织匀浆HIS 含量比较（x±s ，n=10）

2.2 各组小鼠损伤局部软组织中HIS的含量 各组小鼠损伤局部软组织中HIS的含量与空白组比较，差异都是极显著的，并且在第三天的时候，含量达到高峰。外用中药软膏呈剂量依赖方式降低小鼠损伤组织内的HIS含量。虽然外用中药软膏高、中、低剂量组损伤局部的HIS含量高于阳性药物组，但是没有统计学意义（P>0.05)。结果如表2。

3 讨论

现代医学认为，软组织损伤时受损局部红肿热痛，是因为局部组织毛细血管扩张、细胞坏死等引起致痛物质和炎性因子释放。抗炎药物的毒副作用很大。因此人们越来越重视天然抗炎药物的开发。中药的活性成分如苷类、生物碱类等具有很好的镇痛抗炎、活血化淤的作用。所以现今开发新药主要是探索中药的抗炎机理[2]。本实验选取COX-2、HIS两种炎性介质，来探讨外用中药软膏可能的抗炎机制。

COX-2是机体催化花生四烯酸变成前列腺素过程的限速酶，是抗炎药物主要的作用靶点[3-4]。在各种动物炎症模型和炎症疾病的炎性渗出液中，均有COX-2mRNA和蛋白表达的增强，应用COX-2选择性抑制剂(如赛来昔布），能改善患者的关节炎。许多中药的有效成分发挥良好的抗炎效应，主要是通过直接抑制COX-2的活性。本实验结果显示，外用中药软膏能抑制COX-2的含量，减轻模鼠的炎症反应，并且与药物的剂量呈依赖关系。

HIS是一种活性介质[5]，广泛分布于机体，有三种受体，其中的H1受体能介导兴奋平滑肌和增高毛细血管通透性，称之为H1效应[6]，是炎症机制之一。本实验外用中药软膏可以降低模鼠组织内的HIS含量，这可能是外用中药软膏起到抗炎镇痛作用的机制。

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