滇南血栓颗粒的抗血栓作用研究

李立纪 李睿 赵仁彬等

摘要：目的探讨滇南血栓颗粒对体外血小板聚集和大鼠下腔静脉血栓形成的影响。方法采用比浊法，以二磷酸腺苷（ADP）为诱导剂，测定滇南血栓颗粒的体血抗血小板聚集活性；采用结扎大鼠下腔静脉的方法，观察滇南血栓颗粒的体内抗血栓作用。结果滇南血栓颗粒可显著对抗ADP诱导的家兔体外血小板聚集，作用呈现浓度依赖性，其半数抑制率（50% inhibitory concentration，IC50）为29.84 mg.mL-1；滇南血栓颗粒可明显减轻大鼠下腔静脉血栓的重量。 结论滇南血栓颗粒在体外、体内均有明显的抗血小板聚集、抗血栓形成作用。

关键词：抗血栓；抗血小板聚集；滇南血栓颗粒

中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-2349（2015）05-0078-02

【Abstract】Objective： To study the effect of Diannan Thrombus Particles on platelet aggregation in vitro and rat inferior vena cava thrombosis. Methods： The turbidimetry was used to measure the activity of body blood thrombus particles by using adenosine diphosphate （ADP） as inducing agent， and the rat vena cava ligation method used to observe the anti-thrombotic effect of Diannan Thrombus Particles. Result： Diannan Thrombus Particles could significantly confront the ADP-induced platelet aggregation in rabbits， in a concentration-dependence and its half inhibition rate （50% inhibitory concentration， IC50） was 29.84 mg·mL-1. And it could significantly reduce the weight of the inferior vena cava thrombosis in rats. Conclusion： Diannan Thrombus Particles has a significant anti-platelet aggregation and antithrombotic effect in vitro and in vivo.

【Key words】anti-thrombosis， platelet aggregation， Diannan Thrombus Particles

随着人口老龄化进程的加速，血栓栓塞性疾病的发病率呈逐年上升的趋势。据世界卫生组织统计，全球每年约有1500万人死于血栓栓塞性疾病，我国每年该病发病人数有1000万，病死人数有100万，因此，提高血栓栓塞性疾病的防治水平，降低其发病率、致死率、致残率，减少由此而产生的一系列社会问题已成为当务之急。滇南血栓颗粒是云南省血液病学研究中心血液病中西医结合研究室的经验方，采用本省出产的滇三七、木姜子及地龙等药组成，其临床应用于难治性深静脉血栓不仅对急性期血栓溶栓效果好，而且对西医尿激酶、链尿激酶联合肝素、抗血小板药无效的顽固性、完全梗阻性深静脉血栓均有较好的疗效。但滇南血栓颗粒抗血栓的作用机制尚不清楚，本文从体外抗血小板聚集和体内抗血栓形成两方面对滇南血栓颗粒的抗血栓作用进行了研究。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1药物与试剂阿司匹林（ASP），山东新华制药有限股份公司，批号：09795；二磷酸腺苷（ADP）Sigma公司产品，批号：A2754；滇南血栓颗粒，云南省血液病学研究中心血液病中西医结合研究室提供（分为低、中、高三个剂量），生理盐水，水合氯醛（分析纯），天津市瑞金特化学品有限公司，批号：20090814；枸橼酸钠，天津市化学试剂三厂，批号：A20120416。

1.1.2实验动物日本大耳白兔，体重2～2.5 kg，雌雄兼用，由昆明医科大学动物科提供，动物合格证号：滇实动证第2010014号；SD大鼠，体重200～250 g，生产批号：Dossy-2011-01，由四川省医学科学研究院动物研究所提供，动物饲养条件：室温为（22±2）℃，相对湿度60～70%。

1.1.3主要仪器赛多利斯XS125A分析天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司；LBY-NJ2血小板聚集仪，北京普利生科贸集团产，800型离心沉淀器，上海手术器械十厂。

1.2方法

1.2.1滇南血栓颗粒对ADP诱导的家兔体外血小板聚集的影响36只家兔随机分为6组，即阴性对照组（等体积生理盐水）、滇南血栓颗粒5个浓度组。用10%水合氯醛腹腔注射麻醉家兔，自颈总动脉插管取血，3.8%枸橼酸钠抗凝，血液与抗凝剂容积比9︰1，取血后立即颠倒均匀，分别以1000 r/min离心6min得富血小板血浆（platelet-rich plasma，PRP），剩余血液继续以3000 r/min离心15 min得贫血小板血浆（platelet-poor plasma，PPP），采用比浊法[1]，以ADP为诱导剂，采用血小板聚集仪测定5min内血小板的最大聚集率。血小板聚集抑制率以下式计算：抑制率（%）=（对照组最大聚集率-给药组最大聚集率）/对照组最大聚集率×100%。

1.2.2滇南血栓颗粒对大鼠下腔静脉血栓的影响参考文献方法[2]，取清洁级雄性SD大鼠，随机分为5组，即模型组（生理盐水），阳性对照组（阿司匹林），滇南血栓颗粒低、中、高剂量组，每组7～8只，大鼠按分组分别灌胃（ig）相应受试药物，每天1次，连续7 d，末次给药后1 h，3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，沿腹白线切开进腹，分离下腔静脉，以左肾静脉分叉处为标志，在其下方用粗丝线结扎下腔静脉，缝合腹壁，结扎后4 h，处死大鼠，打开腹腔，在结扎线下方2 cm处用动脉夹夹闭下腔静脉管腔，将结扎段血管剪下，剖开管腔，轻轻取出血栓，放于滤纸上，吸干血液，用微量电子天平称取血栓湿重。血栓形成抑制率（%）≒（对照组血栓重量一给药组血栓重量）/对照组血栓重量 ×100%

1.3统计方法数据用（均数±标准差）表示，运用SPSS统计软件包中单因素方差分析法处理数据，方差齐者采用LSD法检验，方差不齐者采用Tamhanes法检验。

2结果

2.1滇南血栓颗粒对ADP诱导的家兔体外血小板聚集的影响结果显示，滇南血栓颗粒对ADP诱导的家兔体外血小板聚集有显著抑制作用，且呈浓度依赖性，IC50为29.84 mg·mL-1，详见表1。

2.2滇南血栓颗粒对大鼠下腔静脉血栓的影响结果显示，滇南血栓颗粒高、中、低三个剂量组均可显著抑制大鼠下腔静脉血栓的形成，并呈现剂量依赖性特点，详见表2：

3讨论

深静脉血栓形成是临床常病，多继发于各种原因导致的长期卧床、血管内瘤栓、血栓形成及机体血液成分改变导致的各种疾病[3]。其产生原因较为复杂，与多种诱发因素导致的血液在静脉腔内不正常的凝结，阻塞静脉腔，导致静脉回流阻碍[4]有关，深静脉血栓好发于下肢，形成后易造成肢体残疾，严重者可危及患者生命。临床对深静脉血栓治疗近期目的主要是减轻症状，预防血栓蔓延和预防肺栓塞，远期治疗目的主要是预防静脉血栓复发[5]。中医药在深静脉血栓的治疗中有其独特的疗效，中医普遍认为[6]，深静脉血栓的形成是机体感受外界风寒、湿或多种因素导致气、血两伤或脏腑功能低下，正气化生不足，气血不荣，风寒、湿邪乘虚而入，正邪相争，经络闭塞而致，因此其治疗法则多以温脉活血、利湿消肿为主。滇南血栓颗粒汲取云南中医界历史上重视阳气，扶阳以消阴翳，善用大剂量附子温阳的优良传统，采用温阳逐瘀的原则，药味组成上选用了滇三七、木姜子和地龙等药，在临床用于治疗难治性深静脉血栓取得较好的疗效，本论文的研究对滇南血栓颗粒的体内、体外抗血小板聚集作用进行考察，结果显示，滇南血栓颗粒有明显的抗家兔体外血小板聚集作用和抗大鼠下腔静脉血栓的作用，其深入的作用机制尚待下一步系统性的研究。

参考文献：

[1]Born GVR.Aggregation of blood platelets by diphosphate and its reversal[J].Nature，1962，194；297.

[2]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1993：510.

[3]李家增.血栓形成机制[J].临床内科杂志.2004，21（12）：793-795.

[4]张雪军，张爱军，王岭东，等.深静脉血栓131例治疗的临床分析，湖南中医药大学学报，2012，32（6）：37-38.

[5]许建芬，邓小岚，沈小芳，等.老年科预防深静脉血栓评估表的设计及应用，中华护理杂志，2012，47（11）：997-998.

[6]李晓曦.急性静脉血栓栓塞症抗凝治疗的合理应用，中国实用外科杂志，2010，12（12）：1014-1016.

（收稿日期：2015-03-05）