黄连功效药对配伍中盐酸小檗碱质量分数测定

沈 芸，徐蓓蕾，2，杨新宇

(1.哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心，哈尔滨150076;2.哈尔滨商业大学药学院，哈尔滨150076)

药对又称为对药，是复方组成最小的单位，也是中医临床用药中相对固定的两味药的配伍形式[1－3].药对通过各种不同形式的配伍，有的起到相须、相使的作用使疗效增强，有的起到相辅的作用而间接增强某一功效，有的起到相畏相杀的作用而相互制约，或者有的可以通过发挥选择性的引经作用而增强治疗效果[4].黄连和不同的药物配伍功能主治各不相同，常见的黄连药对有“黄连－黄柏”[5]、“黄连 － 黄芩”[6]、“黄连 － 吴茱萸”[7]、“黄连－大黄”[8]等.通过对黄连不同功效药对中有效成分的质量浓度测定，探讨黄连功效与成分间的关系，可以为传统中药配伍规律的研究奠定基础.

1 实验材料

1.1 仪器

戴安Thermo u3000高效液相色谱仪;BS110S电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)

1.2 药品及试剂

黄连(购自亳州中药饮片厂);栀子、大黄、黄柏、龙胆草、吴茱萸、黄芩、芦荟(均购自哈尔滨宝丰药店);盐酸小檗碱(四川维克奇对照品公司);乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯).

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Agilent C18(150 ×5 mm，5 μm);流动相为乙腈 －KH2PO4溶液(0.02 mol/L)(35∶65);流速1 mL/min;检测波长345 nm;柱温为室温;进样量 10 μL.

2.2 对照品溶液制备

分析天平精密称取盐酸小檗碱标准品0.005 2 g至烧杯中，甲醇溶液溶解，10 mL容量瓶定容，即得对照品贮备液，待用.

2.3 供试品溶液的制备

取黄连生品分成等量的8份，每份3 g.标记各组黄连药对，1号黄连+黄芩，2号黄连+黄柏，3号黄连+吴茱萸，4号黄连+龙胆草，5号黄连+大黄，6号黄连+栀子，7号黄连+芦荟粉，8号黄连+黄芩.根据配伍比例称量与之配伍的中药饮片的质量:黄芩 6 g，黄柏5 g，吴茱萸 2 g，龙胆草 2 g，大黄5 g，栀子3 g，芦荟粉3 g，黄芩6 g，分别置于烧瓶中加10倍量的水，煎煮，待水沸腾后记录时间，继续加热30 min后，用纱布趁热过滤备用，取滤渣放于烧瓶中再加10倍量的水，按照上法煎煮过滤，将两次过滤的滤液合并，浓缩生药质量浓度为1 mg/mL，待用.

2.4 标准曲线的绘制

用移液管分别量取对照品贮备液0.02、0.04、0.10、0.2、1、2、5 mL 至 10 mL 容量瓶中，甲醇定容，得到质量浓度为 0.001、0.002、0.005、0.01、0.05、0.1、0.25 mg/mL 的盐酸小檗碱对照品溶液.进样10 μL/次，记录峰面积值，以峰面积为纵坐标，对照品溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程为:Y=37.643X+0.9874，r=0.999 3，表明在0.001～0.25 mg/mL范围内，盐酸小檗碱质量浓度与峰面积呈良好的线性关系.

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液 10 μL，在“2.1”项色谱条件下重复进样5次，记录峰面积，盐酸小檗碱峰面积RSD为1.03%，结果表明仪器精密度良好.

2.6 重复性试验

取1号组样品5份，按照供试品溶液制备方法制备，“2.1”色谱条件进样分析，结果盐酸小檗碱平均质量分数为0.276%，RSD为0.62%，表明该方法重复性良好.

2.7 稳定性试验

取 1 号供试品溶液，分别于 0、2、4、6、8、10、12 h进行测定，记录峰面积，盐酸小檗碱RSD为0.58%，表明供试品溶液12 h内稳定.

2.8 加样回收率试验

取1号组样品6份，每份0.5 g，分别加入适量盐酸小檗碱对照品，按照供试品溶液制备方法制备，“2.1”色谱条件进样分析，计算加样回收率.结果测得平均回收率为99.74%，RSD为0.65%，表明本方法回收率良好.见表1.图1.

图1 各组供试品溶液色谱图

表1 加样回收率试验结果

2.9 样品测定

2.9.1 各组供试品溶液色谱图

取1～8号组供试品溶液各 10 μL，在“2.1”色谱条件下进样分析，各组色谱图见图1.

2.9.2 各组供试品中小檗碱质量分数

根据图1黄连不同功效药对中盐酸小檗碱的色谱图，根据峰面积计算黄连配伍后各药对中盐酸小檗碱的质量分数，数据结果见图2.由结果可知黄连各个药对中盐酸小檗碱的的质量分数大致在0.273% ～0.606%范围之间，其中“黄连 +吴茱萸”、“黄连+龙胆草”两组质量分数最高，质量分数最低的为“黄连+黄柏”组.

图2 各组供试品小檗碱质量分数柱状图

3 结语

黄连是传统中药，主要功效是清热燥湿，清火解毒[9]，常与不同药物配伍组成药对.张振巍[10]等人研究了黄芩、黄连配伍前后的主要化学成分质量分数变化，对黄连、黄芩药对提取物中的11个有效指标成分进行了质量评价，结果显示黄连、黄芩药对中盐酸小檗碱的质量分数在两组中都处于较低水平，说明黄连和黄芩在配伍过程中化学成分可能变化，并且在供试品制备过程中，黄连黄芩共水煎煮时产生沉淀，使有效成分的质量分数降低，沉淀物主要成分可能为黄连+黄芩药对药材中的有效成分盐酸小檗碱.本实验按照传统中药配伍规律将黄连与不同中药材进行配伍，形成黄连药对，比较分析各组药对配伍后盐酸小檗碱质量分数变化，可推测药材在煎煮过程中某些化学成分发生改变.当黄连与吴茱萸配伍后，黄连中的盐酸小檗碱的质量分数增加，可能是黄连生物碱与吴茱萸生物碱配伍后具有加和性，有利于盐酸小檗碱的溶出，使得黄连药对中盐酸小檗碱的质量分数有所增加，龙胆草中也含生物碱，所以黄连和龙胆草药对中盐酸小檗碱的质量分数也较高.黄连和大黄在特定配伍比例范围内有利于药对中盐酸小檗碱的保留，然而大黄与黄连在合并两次滤液过程时，黄连中的盐酸小檗碱和大黄中的某些成分生成了悬浮的沉淀，猜测沉淀为部分盐酸小檗碱，这样就导致了黄连和大黄配伍药对中盐酸小檗碱质量分数的降低.黄连和栀子配伍在煎煮过程中，栀子的主要化学成分栀子苷对酸，对热不稳定，使得黄连中盐酸小檗碱的质量分数降低.本实验明确了黄连的配伍规律，同时也确定了黄连的功效与药对中盐酸小檗碱的质量浓度具有相关性，为传统中药的配伍规律奠定了基础.

[1]杨鸿珠，龚雨萍.中药药对的研究进展与思考[J].中国中西医结合杂志，2010，02(2):218－220.

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[5]杨鸿珠，龚雨萍.中药药对的研究进展与思考[J].中国中西医结合杂志，2010，2(2):218－220.

[6]张晓雷，周明眉，贾 伟，等.黄连、黄芩及其配伍药对的现代研究概况[J].吉林中医药，2010，2:163－166.

[7]刘法锦，孙冬梅，鲁佳慧，等.薄层色谱扫描法测定黄连吴茱萸药对中黄连生物碱的质量浓度[J].中成药，2010，1(1):75－79.

[8]霍志鹏，王 玉，张兰兰，等.黄连配大黄对小檗碱溶出的影响[J].药学与临床研究，2012，6(1):89－91.

[9]张贵君.中药鉴定学[M].北京:科学出版社，2009.84－87.

[10]张振巍，张娜娜，李月梅.等.黄连配伍前后的主要化学成分质量浓度变化[J].中国实验方剂学杂志，2012，24(4):58－62.