遵义市118例手足口病的核酸检测统计学分析

庭永君 陈德林 世 琨 杨 宇

遵义市118例手足口病的核酸检测统计学分析

庭永君 陈德林 世 琨 杨 宇

目的 研究2011年遵义市爆发的手足口病核酸检测与分型的关系，了解此次手足口病核酸检测的临床意义。方法 采用信号引物转移定性聚合酶链反应测定患者鼻咽分泌物、大便和痰标本中的萨科奇病毒A16型（coxsackievirus，CA16）、肠道病毒71型（enterovirus71，EV71）和肠道病毒通用型(universal enterovirus，EV+）三种核酸RNA的载量，用全自动罗氏480PCR分析仪进行核酸阴阳性分析。结果 手足口病核酸RNA定性检出阳性率为58.2%，这次流行以EV+为主占45.1%，其次EV71占31.1%，CA16占16.4%，各组间差异有统计学意义（P＜0.05)。而且混合感染比例占31.1%，各组间差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 这次遵义市手足口病流行感染主要是以EV+为主，以及EV+与EV71或CA16混合感染的手足口病，其次是单纯的EV+，EV71和CA16单一病毒感染的手足口病。

手足口病；肠道病毒通用型 EV+；柯萨奇病毒A16；肠道病毒71型 EV71

手足口病是由肠道病毒引起的传染病，多发于5岁以下儿童，主要表现有口痛、厌食、低热[1-2]。手、足、口部可出现小疱疹或溃疡。大部分患儿在一周左右自然愈合，少部分患儿会出现心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜炎等并发症，病情严重者会导致死亡。由于地域性的差异，流行病的特点也有所不同[3]。因此，手足口病爆发时探究其病原体类型，分析其在该地的流行病学特点对后续的研究和防治具有十分重要的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择贵州省遵义市第一人民医院儿科2011年9月～2013年5月收治的118例手足口病患者作为实验组，其中男83例，女35例，年龄6个月～8岁，平均年龄为（7.31±1.25）岁；以无菌专用棉拭子采集患者鼻咽分泌物密封，加入3～5mL无菌生理盐水，旋紧管盖并密封送检。对照组选取同期本院门诊健康儿童鼻咽分泌物标本78份，其中男38例，女40例，年龄6个月～9岁，平均年龄（7.12±2.13）岁；加入3～5mL无菌生理盐水，旋紧管盖并密封送检。实验组与对照组患者在性别、年龄方面差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 试剂 本次研究所用试剂包括：EV+RNA、EV71 RNA和CA16 RNA，所用试剂从中山大学达安基因股份有限公司生产的核酸柱中提取，均为批检合格产品，于-2℃环境下储存[4-5]。

1.3 仪器 Lightcycler☒480(罗氏480)、eppendorf系列移液器、台式高速离心机（型号centrifuge 5424）、金属恒温器（型号thermomixer compact）、生物安全柜（BIOSafe12）。

1.4 方法

1.4.1 按照实时荧光定量PCR操作规程和Lightcycler® 480(罗氏480)仪器操作规程进行检测，利用每一个扩增检测到达指数扩增期起始所需要的扩增循环数来进行定性检测[6]。根据标准曲线和阴阳性质控条件进行定性结果判定分析，确定检测结果有效。以CA16（EV71、EV+）基因组编码区的高度保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光控探针，通过一步法RT-PCR扩增对CA16RNA（EV71RNA、EV+RNA）进行定性检测。

1.4.2 质量控制 阴性质控品的增长曲线不是“S”型曲线或无CT值；阳性质控品的增长曲线呈“S”型曲线且CT值≤30。结果判断：（1）对于CA16：若无典型“S”型扩增曲线或CT值≥34.8，则判断为CA16阴性；反之则判断为CA16阳性。（2）对于EV71：与 CA16一致。

1.5 统计学方法 采用SPSS14.0软件进行统计分析，正态计量资料采用“±s”表示，组间比较采用t检验。计数资料用例数（n）表示，组间率（%）的比较采用χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 本次研究发现，实验组的118例患者都来自临床最终确诊为手足口病，除1例死亡外，117例治愈出院。见表1。

表1 手足口病核酸检测三种病毒EV+EV71 CA16阴性、阳性关系表[n(%)]

2.2 此次遵义市手足口病爆发流行以混合感染为主，肠道病毒通用型和肠道病毒71型同时阳性26例，占22.0%；肠道病毒通用型和肠道柯萨奇病毒A16同时阳性12例，占10.2%；肠道病毒通用型，肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16同时阳性2例，占1.7%。对照组78例全部为阴性。见表2。

表2 手足口病核酸检测三种病毒混合感染及单种病毒感染关系表[n(%)]

3 讨论

手足口病是由肠道病毒引起的传染病，肠道病毒感染可导致手足口病、疱疹性咽峡炎、病毒性脑炎、无菌性脑膜炎、心肌炎等，严重者可导致死亡[4-5]。此次对遵义市爆发性流行的手足口病由于病情重，而且没有采取疱疹液和大便进行检测，进行RT-PCR检测总的阳性率为60.1%，阳性率明显高于唐彦等的报道[6]。

此次遵义市爆发性流行的手足口病来势力凶猛，而且病情较重，以混合病原体感染为主，占33.7%，并非单一病原体所致。

我国手足口病大多呈现CA16和EV71交替流行趋势[7]，但每次流行往往并非单一病原体感染，而此次遵义市手足口病流行单种病原体感染比例也较高占26.3%，以肠道病毒通用型EV+为主，其次肠道病毒71型，最后是肠道柯萨奇病毒A16，与陈慧等的报道[8]有区别。

综上所述，遵义市此次手足口病有别于其它地方报道的手足口病流行，以混合感染为主，而且以肠道病毒通用型为主的病原体感染，此次爆发流行的手足口病以秋冬季节为高峰，加上疾病主要分布在市区为主，感染主要以婴幼儿为主，在近年来医疗技术有了较大进步，因此得到了有效控制。

[1] 孙军玲，张静.手足口病流行病学研究进展[J].中华流行病学杂志，2009，30(9):973-975.

[2] 李晖，方苓，莫艳玲，等.2008年广东儿童手足口病流行病学及病原学相关临床特征分析[J].中华传染病杂志，2009，27(12):753-755.

[3] 韩建康，张宏，姚文庭，等.113例实验室确诊手足口病流行病学特征和临床特点分析[J].中华实验和临床病毒学杂志，2009，23(6):464-466.

[4] 吴淑莲，白琚.手足口病并发中枢神经系统感染危险因素的回顾性分析[J].广东医学，2011，32(22):2976-2978.

[5] Kirtaniya BC，Sachdev V，Singla A，et al.Marsupialization: a conservative approach for treating dentigerous cyst in children in the mixed dentition[J].J Indian Soc Pedod Prev Dent，2010，28(3):203-208.

[6] 唐彦，候俊，徐军，等.实时荧光PCR检测手足口病病原体方法的建立及初步应［J］.中华实验和临床病毒学杂志，2011，5（8）：617-618.

[7] 王利花，李军.手足口病的流行病学及病原学研究进展[J].中国卫生事业管理，2010，6:419-421.

[8] 陈慧，马江涛，马学昱，等.宁夏手足口病患者病原学监测分析［J］.宁夏医学杂志，2009，31（6）：515.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.6.108

贵州 563002 贵州省遵义市第一人民医院检验科 （庭永君陈德林 世琨 杨宇）