吸烟对牙周炎治疗前后龈沟液中弹性蛋白酶水平变化的影响探讨

徐拥军

吸烟对牙周炎治疗前后龈沟液中弹性蛋白酶水平变化的影响探讨

徐拥军

目的 探究吸烟对牙周炎治疗前后龈沟液中弹性蛋白酶水平变化的影响。方法 随机选取慢性牙周炎患者41例，探诊出血146个，CAL≥2mm，PD≥4mm的牙周炎位点，将其分为非吸烟组（n=19）和吸烟组（n=22）。观察治疗前后2组牙周临床指标，包括GI、CAL、PLI和BOP，以及龈沟液EA-s和EA-p等的变化情况。结果 治疗前，在GI、EA-s水平上，吸烟组为（1.23±0.29）、（0.43±0.35）显著低于非吸烟组（1.59±0.36）、（1.03±0.93）（P＜0.05），而治疗后，2组水平均有所下降，吸烟组为（0.68±0.31）、（0.27±0.05），非吸烟组为（0.86±0.52）、（0.05±0.03），组间比较，BOP、GI和PLI等指标差异无统计学意义，而非吸烟组在EA-p、EA-s指标上均显著低于吸烟组（P＜0.05）。治疗前后2组患者CAL、PD差异均具有统计学意义，均无显著改善（P＜0.05）。结论 对于吸烟的牙周炎患者来说，龈沟液中的EA-s水平低，与非吸烟组相比，EA-p水平与吸烟组相比差异不大。治疗后，在EA-s、EA-p指标上，非吸烟组水平更低，分析认为与牙周炎的治疗效果差存在一定的关系。

吸烟；牙周炎；龈沟液；弹性蛋白酶；水平变化

龈沟液中的弹性蛋白酶（EA）属于细胞外基质蛋白酶，这种蛋白酶多来源于中性多形核白细胞（polymorphonuclear leukocyte,PMN）[1]。这种蛋白酶对牙周结缔组织和骨组织的破坏较大，对牙周病变产生很大的影响，在判断牙周情况以及未来是否附着丧失有重要的作用。龈沟液中的一部分被释放，包括

2种物质，一种是elastase in supernatant（EA-s），另一种是elastaseinthepellet（EA-p）[2]。在病情发展中，吸烟是一种危险因素。本研究选取41例牙周病患者，探究吸烟对牙周炎治疗前后龈沟液中弹性蛋白酶水平变化的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选取2012年10月～2013年10月在九江市第一人民医院牙周科就诊的慢性牙周炎22例，均为男性，吸烟量≥10支/d,吸烟史≥10年,年龄32～65岁,平均年龄（49.5±20.3）岁。随机选取疑似不吸烟慢性牙周炎患者19例，皆男性，年龄31～62岁,平均年龄（51.8±9.2）岁。纳入标准为：探诊出血；PD≥4mm,临床附着丧失（clinical attachmentloss）≥2mm；X线示牙槽骨存在各种吸收活动期磨牙，每颗牙选取1～2个位点,总146个位点。其中，吸烟组的位点79个,非吸烟组的位点67个。本研究纳入的41例患者6个月内均未接受牙周病局部治疗,30d内未用抗生素、NSAID或其他影响白细胞药物,且患者无任何系统性疾病。

1.2 龈沟液标本采集 初诊检查时，客观记录PLI，将预先称重的Whatman 3#滤纸条插入牙周袋内，遇轻阻力后停止，30s后取出，密封于Eppendorf管[3]中。完成后再次称重，贮存于-70℃环境中。取样后，检查记录牙周袋深度PD、GI、BOP和临床附着丧失（CAL）。牙周基础治疗30d后，检查采集的龈沟液标本。

1.3 检测EA-s与EA-p水平

1.3.1 绘制标准曲线 采集6例患者25份龈沟液样本，贮存于-70℃环境中。在测定样本时，加温，加入5mol/L，不含有pH 7.4的Tris-HCL缓冲液，在4℃环境中，用10000r/min[4]离心提取上清液，之后用缓冲液系列进行稀释。稀释完成后，取15μL稀释混合液加入96孔板标准孔中，绘制标准曲线。

1.3.2 准备样本液 样本取出后，在室温下解冻，并加入Tris-HCL缓冲液，通过离心来提取，在EA-s测定时使用上清液。而在龈沟液沉淀物Eppendorf管中，掺入0.1% Tween的Tris-HCL缓冲液[5],用于EA-p的测定。

1.3.3 测定EA活性 取15μL测定样本,掺入96孔板上设定的复孔和样本孔，将不含有Tween的Tris-HCL缓冲液加入对照孔，共15μL,并加入100μL的底物溶液，置于37℃的温箱中2h，在405nm波长下，采用TECAN-SUNRISE[6]测定吸光度，客观记录Abs/位点。治疗前后，1例患者在同一块96孔板上进行测定。

1.4 统计学方法 上述数据资料采用SPSS10.0统计学软件来处理，各项指标均以牙位点为单位，计量资料采用t检验。2组EA-p与EA-s水平的比较采用符号秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床指标 治疗前，2组患者的GI、CAL差异具有统计学意义（P＜0.05），但2组PD差异无统计学意义。而治疗后，2组的PLI、BOP和GI均显著改善（P＜0.05），表明患者口腔卫生改善，而CAL、PD无明显改善。2组患者PD、GI、PLI等相比，差异无统计学意义。见表1。

表1 治疗前后吸烟组与非吸烟组相关指标的对比（x±s）

2.2 EA-p与EA-s水平 治疗前，吸烟组EA-s、EA-p低于非吸烟组，EA-s数量和浓度方面2组差异有统计学意义（P＜0.05），但EA-p2组差异无统计学意义。治疗后，吸烟组EA-s以及非吸烟组的EA-p、EA-s均显著下降（P＜0.05）。组间相比，非吸烟组EA-s、EA-p均显著低于吸烟组（P＜0.05）。见表2。

表2 2组患者治疗前后EA-s与EA-p对比（x±s）

3 讨论

弹性蛋白酶能够对骨组织与牙周结缔组织造成破坏，加速牙周病病情的发展过程，在牙周病的判断中具有良好的价值。龈沟液中所含的弹性弹性蛋白酶主要源于中性多形核白细胞，吸烟严重影响牙周病的发生，但发病机制尚未明确，可能与吸烟后患者的防御反应发生变化相关。在未治疗的患者中，非吸烟患者的症状比吸烟患者明显，BOP、GI等指标水平较高。由于烟草中的尼古丁对牙龈微循环有较大影响，可导致牙龈血管血流量减少[7]。本研究认为，吸烟患者牙周组织的情况更差，可抑制成纤维细胞生长，与牙周炎的临床症状相关。

本研究结果显示，经30d治疗后，2组患者的EA-s与EA-p水平均有下降，非吸烟组EA水平下降更为明显；而治疗后，吸烟组的EA-s与EA-p水平均高于非吸烟组，分析认为，此与吸烟患者牙周炎治疗效果差有关。治疗后，EA水平升高表示牙周破坏复发可能性大。但应注意，吸烟对EA水平的影响一般可逆。另外一些研究认为，吸烟与非吸烟患者EA水平相差小，表明患者戒烟后，预后良好，与陈建洪等[8]的研究结果相差不大。

综上所述，吸烟对牙周炎患者龈沟液中的EA-s水平影响较大，但对EA-p的水平影响却较小。对比治疗前后的检测结果可发现，与吸烟患者相比，非吸烟患者治疗后的EA-p、EA-s水平更低。

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[3] 马夏龙，张伟.吸烟对牙周炎患者龈沟液中弹性蛋白酶水平的影响[J].口腔医学，2011,27（1）：18-19.

[4] 王宏岩,潘亚萍.慢性牙周炎患者IL-8和弹性蛋白酶水平的研究[J].口腔医学研究,2007,23(1):1-3.

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[8] 陈建洪,李亚静,梁焕友,等.吸烟和非吸烟慢性牙周炎患者基础治疗后龈沟液肝细胞生长因子水平的变化[J].中华口腔医学研究杂志(电子版),2010,42（1）:50-55.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.27.029

江西 332000 九江市第一人民医院 （徐拥军）