18种单味中药提取物抗惊厥作用的药效学比较研究

赵晋炜,程景民

18种单味中药提取物抗惊厥作用的药效学比较研究

赵晋炜1,程景民2

目的比较18种单味中药提取物抗惊厥作用的效能、效价、量效和时效关系。方法采用最大电休克惊厥(MES)模型,分析灌胃(ig)小鼠18种单味中药提取物的抗惊厥率、量效和时效关系,比较各药抗惊厥效能。按Bliss法计算抗MES的ED50和ED95,比较其效价强度。结果18种单味中药提取物均有不同程度抗MES作用。除白胡椒起效时间为45 min外,其余17种中药醇提物起效时间均为30 min,均较妥泰(TPM)(1 h)起效快。而达峰时间以全蝎最慢(1.5 h),蜈蚣、酸枣仁45 min达峰,其余醇提物均为60 min,但均较TPM(2 h)快。天南星作用维持时间最长(8 h),其次为茯苓、半夏和全蝎,均为7 h。柴胡、石菖蒲、蜈蚣作用持续时间最短,仅为2 h,其余各药作用可维持3 h～5 h,但均较TPM(12 h)短。结论18种受试中药醇提物中全蝎、半夏和知母抗MES作用最强,其次为茯苓和天南星,而蜈蚣和蝉衣的抗惊厥效能最低。

中药提取物;抗惊厥作用;最大电休克惊厥;小鼠

癫痫是一种反复发作的神经系统疾病,WHO统计,目前全球癫痫患者约有5 000万人,且每年有将近40万的新发病例[1-3]。中医药防治癫痫,如何发挥中药治疗癫痫的专长和优点值得研究[4,5]。为此本实验选取13种常用抗癫痫植物中草药和5种动物中药进行分离提取后作为研究对象,采用经典的最大电休克惊厥(MES)模型,以抗癫痫西药为阳性对照,对18种单味中药的抗惊厥效能、效价、量效和时效进行了比较研究。

1 材料与方法

1.1 动物 健康普通级昆明种小鼠,体重18 g～22 g,雌雄皆用,合格证号为:314第070101号,由山西医科大学实验动物中心提供,符合国家健康一级动物标准。实验动物以标准饲料喂养。

1.2 药品及试剂 全蝎(Scorpion,SP)、蜈蚣(Centi pede,CP)、僵蚕(Stiff Silkorm,SS)、地龙(Lum bricus, LB)、蝉衣(Cicada Slough,CS)、草果(Fructus Tsaoko,FT)、茯苓(Poria,PO)、知母(Rhizom a Anem a rrhenae,RA)、酸枣仁(Sem en Ziziphi Sp inosne, SZS)、远志(Radix Po lyga lae,RP)、川芎(Rhizoma Chuanxiong,RC)、白胡椒(White Peppe r,WP),柴胡(Rad ix Bup leu ri,RB)、石菖蒲(Rhizom a aco ri tata rinow ii,RAT)、天南星(Rhizoma Pinelliae,RPI)、钩藤(Uncaria,UN)、半夏(Pinellia Tuber,PT)、瑞香狼毒(Ste lle ra Cham ae jasm e,SC),以上18种中药均购于山西省药材公司,经山西医科大学药学系植化教研组有关人员鉴定后,采用乙醇回流法提取妥泰(Topamax,TPM),瑞士Cilag公司生产,批号02CS063,均用生理盐水配制。

1.3 最大电休克惊厥实验 MES模型采用Sw inyard[6]法稍加改良。取健康昆明种小鼠1 960只,雌雄各半,分为20组,每组随机分为4个～6个剂量组,每个剂量组20只,均采用灌胃给药法,正常对照组灌胃等容积的生理盐水。各剂量组的给药剂量见表1、表2。量效、时效关系的测定,各剂量组小鼠灌胃给药后,分别于15 min、30 min、1 h、2 h……12 h用上述同样参数刺激,记录抗MES数,计算抗惊率,分析各药作用高峰期的量效关系,用Bliss法计算各药的ED50、 ED95,比较各药的效价强度及效能。以各药最大剂量组不同时间点的抗MES结果作时效关系分析,比较各药的起效时间、达峰时间和作用持续时间。

表1 9种不同剂量的中药提取物和NS作用于小鼠的MES实验g/kg

表2 9种不同剂量的中药提取物和TPM作用于小鼠的MES实验g/kg

2 结 果

2.1 抗MES量效关系 18种单味中药提取物均有不同程度的抗MES作用,且量效呈正相关性。其中全蝎、半夏和知母抗MES发作的作用最强,抗惊率均达80%,其次为茯苓和天南星,抗惊率达70%。而蜈蚣和蝉衣的抗惊厥效能最低。效价强度由大到小依次为全蝎、狼毒、蝉衣、远志、川芎、天南星、菖蒲、茯苓、柴胡、枣仁、知母、胡椒、钩藤、僵蚕、蜈蚣、半夏、地龙、草果。详见表3。

2.2 抗MES时效关系比较 18种单味中药提取物的起效时间、达峰时间以及作用持续时间见表4。除白胡椒的起效时间为45 min外,其余17种中药醇提物的起效时间均为30 min,均较TPM(1 h)起效快。而达峰时间以全蝎最慢(1.5 h),蜈蚣、酸枣仁45 min达峰,其余醇提物均为60 min,但均较TPM(2 h)快。天南星的作用维持时间最长(8 h),其次为茯苓、半夏和全蝎,均为7 h。柴胡、石菖蒲、蜈蚣的作用持续时间最短,仅为2 h,其余各药的作用可维持3 h～5 h,但均较TPM(12 h)短。

表3 18种中药提取物和TPM对小鼠MES惊厥的影响

表4 小鼠MES实验的18种中药和TPM相对时间值

3 讨 论

中医理论认为癫痫的发生是由风、火、痰、瘀为患,导致心、肝、脾、肾、脏气失调,肝肾阴虚、阴虚则阳亢、阳亢则肝风内动、亢而热盛、热盛化火、火极生风、风火相助为患,另脾虚失运、清气不升、浊气下降则痰涎内结、痰迷心窍、心血不遂而瘀、瘀则经络不通、痰阻血瘀上扰清窍,终致癫痫发作。根据发病机制,常采用定痫熄风、平肝泻火、祛痰开窍、活血化瘀的治疗原则[7]。本课题结合中医理论,选取全蝎等5种动物中药和13种植物中药的醇提物进行现代药效学比较研究,为中医防治癫痫奠定理论基础。

全蝎为钳蝎科动物东亚钳蝎的干燥虫体,全蝎蝎毒和抗癫痫肽(AEP)是抗癫痫的主要有效部位,对咖啡因、美解眠、士的宁诱发的三种小鼠惊厥模型均有不同程度的对抗作用[8];全蝎醇提物可以明显对抗MES,抗MES作用最强,效价最大,作用持续7 h。

僵蚕为传统中药,系蚕蛾科昆虫Bom byxm oriL家蚕幼虫感染白僵菌Bcaureria bassiana(Bais)Vuill而僵死的干燥全虫,可以降低士的宁诱发惊厥的死亡数,所含大量的草酸铵是其抗惊厥作用的主要成分,临床研究也证实草酸铵对癫痫大发作有效[9]。僵蚕醇提物能剂量依赖性对抗MES。地龙(蚯蚓)为环节动物门钜蚓科两种动物的干燥躯体,其热浸液、醇浸液对戊四氮和咖啡因所致惊厥及电惊厥皆有拮抗作用,其抗惊厥成分可能与所含具有中枢抑制作用的琥珀酸有关[10]。本实验显示,地龙醇提物能抗MES。总体看来其效果虽不及全蝎和僵蚕,但也显示出了较好的抗痫效应和抗痫谱广的特点。

蝉蜕为蝉科昆虫黑蚱Cryptotympana pustulata Fabr.羽化后的蜕壳。其水提取液和醇提物能降低硝酸士的宁引起的动物惊厥死亡率,显示有一定的抗惊厥作用,但不能拮抗四氯化碳引起的惊厥[11]。本实验研究结果表明,蝉蜕醇提物有一定的抗MES作用。

蜈蚣为节肢动物门唇足纲整形目蜈蚣科动物,其水提物对士的宁惊厥、小鼠的电惊厥发作,明显抑制GBL诱发癫痫小发作大鼠的异常脑电发放,其抑制强度与常用抗小发作西药氯硝西泮的疗效相当,呈现良好的抗癫痫作用,而对超强电流和戊四唑所致的惊厥均无对抗作用[12]。本实验结果显示,蜈蚣醇提物有弱的抗MES惊厥效应,最大抗惊率为20%,虽能延长戊四唑惊厥的潜伏期;但与对照组相比无统计学意义。蜈蚣醇溶部分富含多种氨基酸、小分子肽和甾醇等活性物质[13],可能为其抗痫的物质基础,但目前尚无定论。

川芎为伞形科植物川芎的干燥根茎,其活性成分有以川芎嗪为代表的生物碱类,以阿魏酸为代表的有机酸类,以藁本内酯为代表的苯酞类。川芎嗪能明显抑制青霉素和戊四唑(PTZ)诱发大鼠癫痫放电[14]。川芎醇提物以明显对抗MES。

茯苓Poria cocos Wo lf为多孔菌科真菌的干燥菌核;主要成分菌核含β-茯苓聚糖(约占干重93%)、茯苓酸、麦角固醇、胆碱、组氨酸、卵磷脂及钾盐等。茯苓醇提物能对抗MES惊厥,其最大抗惊率为70%,作用持续7 h。草果为姜科豆蔻属植物。主要成分为草果精油。知母为百合科植物知母的根茎,主要成分是知母皂苷。草果知母汤对戊四唑慢性诱导癫痫发作致大鼠海马区神经元超微结构损伤有良好的抗损伤作用[15]。本实验对草果和知母的醇提物分别进行研究,发现知母能明显对抗MES惊厥,最大抗惊率达80%。白胡椒是胡椒属胡椒科常绿藤本植物胡椒的干燥成熟果实。含有挥发油、胡椒碱、粗脂肪、粗蛋白等。胡椒碱对MES、MET和小鼠脑室注射(icv)KA形成的颞叶性癫痫模型对抗作用较强,但对士的宁引起的强直性惊厥、3-巯基丙酸、荷包牡丹碱和兴奋性氨基酸引起的阵挛性惊厥均无明显的对抗作用[16]。白胡椒醇提物能抗MES惊厥,最大抗惊率为50%。

远志为远志科植物远志的干燥根。其主要成分是远志皂甙、远志醇,糖类、生物碱等。对五甲烯四氮唑所致惊厥有很强的对抗作用[17]。本研究结果显示,远志醇提物有一定的抗MES惊厥效应,最大抗惊率为50%。

酸枣仁为鼠李科枣属植物酸枣的干燥成熟种仁;含生物碱,皂苷和黄酮等;酸枣仁皂苷可显著降低戊四氮引起的惊厥率[18]。酸枣仁醇提物有一定的抗MES惊厥效应,最大抗惊率为50%。

柴胡煎剂能拮抗咖啡因、毛果芸香碱导致的小鼠惊厥,提高大鼠电刺激皮层运动区惊厥阈值;柴胡注射液不仅能拮抗且对大鼠皮层放电及中枢神经系统的突触传递过程有明显的抑制效应[19]。本实验结果表明,柴胡醇提物可对抗MES惊厥。

石菖蒲水提液能延长回苏灵、戊四唑所致小鼠惊厥潜伏期,降低回苏灵致惊小鼠死亡率;石菖蒲醇提物能明显对抗大鼠、小鼠的最大电休克发作和小鼠戊四唑及士的宁惊厥反应[20]。

天南星浸出物对士的宁引起的小鼠惊厥有明显抑制作用,且可明显降低惊厥小鼠的死亡率,但对最大电休克模型无效[21]。本结果提示,天南星抗MES惊厥率最大可达70%,且抗MES作用呈量效正相关性。

钩藤主要成分钩藤碱,有阻滞外Ca2+内流和内Ca2+释放[22],可显著性抗MES,最大抗惊率达60%,且量效呈正相关性。药后30 min起效,1 h达作用高峰,抗惊厥作用时间可持续6 h。

瑞香狼毒有逐水祛痰破积之功效。其丙酮提取物对最大电休克惊厥、戊四唑惊厥、听源性惊厥及海藻酸惊厥模型都有较强的对抗作用,其抗癫痫机制与增强GABA抑制系统和限制G lu、Asp兴奋扩散有关[23]。本实验结果显示,狼毒能对抗小鼠MES惊厥。

半夏主要成分半夏生物碱。用半夏粉治疗癫痫12例,痊愈5例,显效5例,无效2例[24]。到目前为止,尚未见半夏抗惊厥作用的动物实验研究资料。本实验结果显示,半夏有较强的抗MES惊厥作用,最大抗惊率可达80%,且量效呈正相关性,作用持续7 h。18种受试中药醇提物中全蝎、半夏和知母抗MES作用最强,其次为茯苓和天南星,而蜈蚣和蝉衣的抗惊厥效能最低。

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R743 R289

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2015.05.012

1672-1349(2015)05-0593-04

2014-06-30)

(本文编辑 王雅洁)

1山西医科大学公共卫生学院,山西医科大学附属肿瘤医院(太原030001);2山西医科大学公共卫生学院

程景民,E-m ail:13753166035@163.com