HPLC 法测定妇炎舒胶囊中红景天苷的含量

申旭霁，杜杉，夏传涛，张寒，张彦，汪兴军

(1.西安医学院 药学院，陕西 西安 710021;2.陕西东科制药有限责任公司，陕西 西安 710043)

妇炎舒胶囊为忍冬藤、大血藤、甘草、大黄(酒制)、虎杖、川楝子(制)等十一味药材组成的中药复方胶囊剂，功在清热凉血，活血止痛。用于治疗因女性盆腔炎症所引起的带下量多、腹痛等症［1］。目前现行的质量标准中对绿原酸进行了含量控制，但处方中忍冬藤和大血藤中均含绿原酸。那么单纯控制绿原酸的含量不能有效实现控制大血藤用量的目标。大血藤为方中君药，主含酚类、黄酮、有机酸、蒽醌、木脂素、三萜皂苷等成分［2］，但2010 版《中华人民共和国药典》未对大血藤作含量限度的要求。而文献报道红景天苷在大血藤中含量稳定，虽不同产地含量略有差异，但测定方法简便，结果准确，重现性好［3-6］。因此，选择红景天苷作为含量测定指标建立高效液相色谱方法，拟在已对绿原酸进行含量控制的基础上，增加红景天苷的含量控制，进一步完善该产品的质控标准。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

红景天苷对照品，中国药品生物制品检定所，(批号:110818-201005);妇炎舒胶囊，陕西东科制药有限责任公司(批号:141101，141102，141103，141104，141105，141106);乙腈，色谱纯;水，纯化水;甲醇等其余试剂均为分析纯。

安捷伦1200 系列高效液相色谱仪。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件 Welchrom XDB-C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)色谱柱，0.1%甲酸水溶液-乙腈(83∶17)为流动相，检测波长为275 nm，流速为1 mL/min，柱温30 ℃，进样体积10 μL。

1.2.2 对照品溶液制备 精密称取0.2 mg 红景天苷对照品，加流动相定容至10 mL，即得。

1.2.3 供试品溶液制备 取20 粒妇炎舒胶囊内容物，研细，混匀，精密称取0.4 g，置于具塞锥形瓶内，精密加入甲醇20 mL，密封，称定质量，超声提取2 次(超声功率250 W，频率40 kHz)，每次30 min，放至室温，加甲醇补足减失质量，摇匀，滤过，精密移取续滤液10 mL，浓缩至约2 mL，经非极性大孔树脂柱(4 g，内径1.5 cm)分离，先水洗至无色，再用30%甲醇10 mL洗脱，最后用75%甲醇50 mL 洗脱，收集75%甲醇洗脱液，水浴蒸干，蒸发皿内残留物以流动相溶解，定量转移至10 mL 量瓶中定容，摇匀，即得。

2 结果与讨论

2.1 专属性实验

依本品处方量，按1.2.3 节方法制成不含红景天苷的阴性供试品溶液。分别精密吸取阴性供试品溶液、供试品溶液及对照品溶液各10 μL，依次注入液相色谱仪。按1.2.1 节色谱条件完成测定，记录谱图，结果见图1。

图1 妇炎舒胶囊HPLCFig.1 HPLC graphs of Fuyanshu capsules

由图1 可知，在阴性供试品溶液色谱图中，红景天苷对照品色谱峰相应位置上未出现色谱峰，说明阴性样品无干扰。

2.2 线性实验

精密称取红景天苷对照品适量，加流动相制成浓度为0.152 1 mg/mL 的对照品贮备液。精密吸取上述对照品贮备液5 mL，量瓶中定容至10 mL，摇匀，得浓度为76. 0 μg/mL 的溶液;再吸取该溶液5 mL，量瓶中定容至10 mL，摇匀，得浓度为38.0 μg/mL的溶液，逐级稀释制备成含量分别为19.0，9.5 μg/mL 的系列对照品溶液。精密吸取上述各浓度对照品溶液和对照品贮备液各10 μL，按浓度梯度由低到高依次注入液相色谱仪，按1.2.1节色谱条件完成测定，以测得的峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程:y =318.6x－1.223，相关系数r =0.999 9。结果显示，红景天苷浓度在9.5 ～152.1 μg/mL 之间与其对应峰面积呈良好线性关系。

2.3 精密度实验

精密吸取浓度为19.0 μg/mL 的红景天苷对照品溶液重复进样6 次，每次进样10 μL，测定峰面积，计算RSD=0.82%。

2.4 稳定性实验

依1.2.3 节方法配制供试品溶液，将供试品溶液分别贮存在室温与冰箱冷藏室(4 ℃)中，分别在第0，1，2，3，5，7 d 平行测定2 次红景天苷的含量，2次测定结果的平均值为该时间点红景天苷含量。含量分别为:室温条件下0.572，0.571，0.574，0.569，0. 573，0. 577 mg/g;低 温 条 件 下0. 572，0. 574，0.576，0.575，0.573，0.570 mg/g。结果显示红景天苷各时间点测定的含量值均未超过0 天含量值±5.0%，说明供试品溶液贮存7 d 内稳定。

2.5 重复性实验

取同一批号的妇炎舒胶囊样品6 份，按1.2.3节方法制备供试品溶液，进行测定，得红景天苷的含量分 别 为0. 574，0. 569，0. 572，0. 578，0. 563，0.569 mg/g，平均含量为0.571 mg/g，RSD=0.90%(n=6)。

2.6 加样回收率实验

精密称取已知含量为0.571 mg/g 的样品6 份，每份约0.4 g，分别精密加入浓度为0.112 1 mg/mL红景天苷对照品溶液1 mL，依1.2.3 节方法制备供试品溶液，测定样品含量，进行回收率计算，结果见表1。

由表1 可知，平均回收率为100.66%，RSD =1.84%(n=6)。

表1 红景天苷加样回收率实验结果(n=6)Table 1 Results of recovery test for salidroside

2.7 样品测定

取连续6 批妇炎舒胶囊(批号:141101，141102，141103，141104，141105，141106)样品适量，依1.2.3 节方法分别制备供试品溶液，按上述拟定的含量测定方法测定6 批样品中红景天苷的含量。含量分别为0. 230，0. 228，0. 233，0. 225，0. 227，0. 232 mg/粒。

3 结论

在运用文献中的流动相进行测定时，发现红景天苷样品峰与相邻杂质峰分离度＜1.5，不能实现有效分离。在对流动相中的有机相乙腈的比例进行调整后，红景天苷样品峰与相邻杂质峰的分离度可达15 以上，红景天苷样品峰与相邻杂质峰均可有效分离，且红景天苷保留时间适中，色谱峰对称性好，理论板数以红景天苷峰计算可达8 000 以上。

在利用超声波提取法获得妇炎舒胶囊中红景天苷时，由于胶囊处方组成相对复杂，对测定结果干扰因素较多，红景天苷与相邻杂质的分离度不理想，因此，将本品经非极性大孔树脂处理，经水洗和30%甲醇洗脱除去干扰杂质，收集75%甲醇的洗脱部分，浓缩后测定。结果显示本法可有效地减少供试品溶液中的杂质量，使红景天苷的测定免受干扰，方法可行。

采用本研究建立的方法，测定6 批妇炎舒胶囊，结果显示，本方法测定结果准确，重复性好，操作简便，可有效控制妇炎舒胶囊的质量。

［1］ 常润，胡浩，郭鑫，等. 妇炎舒胶囊对大鼠慢性盆腔炎治疗作用的研究［J］. 中药药理与临床，2012，28(4):86-88.

［2］ 马瑞丽，于小凤，徐秀泉，等. 大血藤的化学成分及药理作用研究进展［J］. 中国野生植物资源，2012，31(6):1-5.

［3］ 李珠莲，梁国建，徐光漪.红藤化学成分的研究［J］.中草药，1984，15(7):9-11.

［4］ 施伶俐，桂双英，周金凤.HPLC 法测定大血藤中红景天苷的含量［J］.安徽医药，2011，15(4):441-442.

［5］ 刘宇文，殷红妹，邹耀华.HPLC 同时测定大血藤中红景天苷和绿原酸的含量［J］. 中国现代应用药学，2012，29(10):947-949.

［6］ 李宛蓉，桂双英，王举涛，等. 不同产地大血藤药材指纹图谱研究及红景天苷和绿原酸的含量测定［J］. 安徽中医药大学学报，2014，33(6):82-86.