胆汁中CEA和CA199水平对诊断胆囊癌的临床意义①

杨彦民，赵洪阳，范立君

(佳木斯大学附属第二医院普外科，黑龙江 佳木斯 154007)

胆汁中CEA和CA199水平对诊断胆囊癌的临床意义①

杨彦民，赵洪阳，范立君

(佳木斯大学附属第二医院普外科，黑龙江 佳木斯 154007)

目的:在对胆囊癌的临床研究中，探讨在胆汁中CEA和CA199水平所提示的临床意义。方法:将胆囊癌组和观察组患者的胆汁和血清样本统一采用ELISA分别检测CA199和CEA，将检测结果数值用SPASS统计软件进行统计分析。结果：①胆囊癌组血清CEA水平明显高于对照组，差异具有统计学意义；胆囊癌组胆汁CEA水平较对照组差异也具有统计学意义；胆囊癌组胆汁CEA水平明显高于血清CEA水平，差异具有统计学意义(P<0.05)。②胆囊癌组血清CA199水平明显高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)；胆囊癌组胆汁CA199水平明显高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)；胆囊癌组胆汁CA199水平明显高于血清CA199水平，差异具有统计学意义(P<0.05)。③胆汁中CA199、CEA水平较血清水平差异显著，表达更敏感，随着胆囊癌分期越晚浓度越高，且以CA199显著。结论：①胆汁中CEA、CA199水平对于诊断胆囊癌价值优于血清。②胆囊癌患者胆汁CEA和CA199呈正相关趋势。③胆囊癌分期越晚，胆汁中CA199、CEA水平越高。

胆囊癌；胆囊良性病变；胆汁；CEA；CA199

胆囊癌是胆道最常见的恶性病变，近几年来发病率呈逐年上升趋势，其发病率人群以女性多见，其病因与胆结石有相关性，常发生于胆囊的底部和体部，其早期常无明显临床特点直至后期，常与胆囊切除送病理科做病理检查时发现但为时已晚[1]，不仅给家庭带来了巨大经济负担和给患者造成了沉重的心理压力，而且给治疗带来了不利影响，其确诊后切除率较低，且放化疗效果不理想，预后也较差[2]。由此可见，在胆囊癌的预后评估中，早期诊断和治疗显得最为重要。 胆囊癌的诊断指标主要有：①B超可显示胆囊壁增厚不均匀，回声不均，肿瘤的部位、性质、大小，也可对胆囊癌的进展进行动态追踪，诊断率高达90%，为影像学检查的首选；CT显示肿物突入腔内或胆囊被肿物占据，胆囊壁不均匀增厚，增强扫描改变明显，但它对早期胆囊癌的诊断不敏感[3]，仅作为B超的补充诊断。②临床表现：早期无特异性表现，如侵及浆膜或胆囊床时则可引起右上腹痛并向肩背部放射的定位症状。 肿瘤标记物如CA125、甲胎蛋白(AFP)、CEA、CA199等越来越频繁地用于诊断恶性肿瘤，其是由肿瘤自身合成并释放或机体对肿瘤外来物质产生免疫反应而产生，生理情况下不产生或表达量极少[4]。进行胆囊癌血清肿瘤标记物检测时CEA、CA199表达相对较多，但均无特异性且敏感性差[5]，对胆囊癌早期诊断价值不大，故寻找敏感、简便实用及很好地反应预后的临床诊断指标成为关于胆囊癌医学议题的一大热点。故本实验采用手术过程中细针抽取胆汁测定其CEA、CA199浓度以寻求更有价值的诊断方法。

1 材料与方法

1.1 研究对象和标本

选取2012-10～2013-12在佳木斯大学附属第一医院普外科和消化内科住院治疗，行B超、CT、彩色多普勒血流显像、三维超声显像、内镜超声等影响学检查，给予手术、腹腔镜等治疗，并于术中抽取胆汁进行肿瘤标记物检测，切取肿瘤样本送病理进行病理学检查，除外胆囊以外其他器官病变，确诊为胆囊癌的患者30例(包括I期7例、Ⅱ期14例、Ⅲ期9例)，胆囊结石30例，胆囊息肉30例。

对照组：胆囊良性病变包括胆囊结石和胆囊息肉。 实验组：胆囊癌。

1.2 主要试剂、仪器及来源

人CEA(癌胚抗原)及CA199酶联免疫分析试剂(Sigma公司)；恒温水浴箱(佳木斯大学遗传学教研室)；低速离心机(佳木斯大学遗传学教研室)。

1.3 样本采取

1.3.1 血液样本采取：患者均与术前空腹采血留血备用，立即置于-20℃冰箱进行冷冻。

1.3.2 胆汁样本采取：与术中细针抽取胆汁留样，同样立即置于-20℃冰箱进行冷冻。一部分胆汁进行胆汁脱落细胞学检查辅助诊断，一部分进行酶联免疫吸附试验。

1.4 ELISA实验步骤

将样本从冰箱中取出，复温；离心，取上清液；标准品的制备；工作液的制备；将ELISA试剂盒中预先包埋有单克隆抗体96孔微量滴定板置于室温下，用移液器将样本加入其中；将微量滴定板置于摇床上；用自动洗板机洗液进行处理；避光，孵化；每个微量孔中加入100μL的终止液终止反应，每个孔设置两个复孔；将96孔微量滴定板置于Anthos2010/HT酶标仪中测量吸光度；浓度换算。

1.5 结果分析

可用肉眼进行大体观察：反应孔更深的颜色，阳性程度更强。无色为阴性或颜色较暗。每个标准样本、实验组、对照组的OD值(有色物质量)等于两负孔OD(有色物质量)值平均值减去两空白孔OD值的平均值。根据已知配置好的标准品的OD值进行标准曲线的绘制，根据所绘制的标准曲线算得所测样本OD值相对应的CEA、CA199蛋白浓度。

1.6 统计学方法

2 结果

2.1 各组间CA199和CEA的浓度比较

比较胆囊癌组与对照组，胆囊癌组胆汁CA199及CEA浓度均高于对照组，差异有显著统计学意义。各组间胆汁CEA、CA199含量均高于血清中含量，差异有统计学差异。胆囊癌组胆汁和血清中CEA、CA199浓度均高于对照组，差异有极显著统计学差异。两两比较结果：胆囊息肉与胆囊结石组比较胆汁及血清中CEA、CA199均无统计学差异。各组间胆汁CEA、CA199水平均高于血清组，差异有显著统计学差异。

表1 实验组及对照组测量指标

注：t1、P1为胆汁CA199与血清CA199比较，t2、P2为胆汁CEA与血清CEA之比，P3为各组间的比较。

2.2 胆囊癌各期的CA199、CEA水平比较

胆囊癌Ⅰ期，Ⅱ期，Ⅲ期患者胆汁中CA199 、CEA及血清CA199、CEA比较，胆汁中CA199、CEA水平对于胆囊癌的诊断由于血清，随着胆囊癌分期越晚胆汁中CA199、CEA浓度越高，以CA199显著。

表2 胆囊癌各期的CA19-9和CEA水平

注：与胆囊癌I期比较，*P<0.05。

2.3 CA199与CEA的相关性分析

胆囊癌组胆汁CEA和CA199呈正相关(r=7.382，P<0.01)，血清CEA和CA199未见相关性。对照组(胆囊结石、胆囊息肉)胆汁和血清的CEA和CA199均未见相关性。

3 讨论

研究发现70%～90%的胆囊癌患者伴有胆囊结石[6],但胆囊结石引起胆囊癌的发生率却很低[7]。目前尚没有针对胆囊癌的特异性血清学指标，所以肿瘤的标志物检测仍有待进一步研究开发。本实验旨在研究胆囊癌患者体内CA199与CEA水平，进一步探讨二者与胆囊癌的关系，寻求诊断胆囊癌价值相对较高的指标。

研究测定了大量正常人的血清CA199水平，其浓度与年龄和性别无关[8]。CA199存在于不仅肿瘤患者，而且存在于正常人中，但肿瘤性疾病中，尤其在消化道肿瘤患者其水平显著升高，但在不同脏器的含量不同。在同一脏器的肿瘤中CA199水平与疾病的病理类型有关[9]。目前尚无一种肿瘤标志物是绝对特异的，如CA199不仅在肿瘤性疾病中升高，甚至某些消化系统良性病变时，如胃肠炎症时，其水平也有不同程度升高，不同个体之间升高程度不尽相同，这就给肿瘤的诊断带来了干扰。故目前常联合检查多种指标来提高肿瘤的诊出率。

Bast于1989创立检测方法以来，CEA就被广泛应用与消化系统恶性肿瘤的检测。CEA是消化系统恶性疾病的重要指标之一，尤其在胃癌中CEA阳性率可达40%[10]。一般情况下，血清CEA水平与肿瘤的分期呈正相关，而且与癌瘤大小、组织类型及转移程度有关，但与肿瘤的部位无关[11]。Hirohashi等[12]研究发现，癌胚抗原与胆囊癌和胆管癌预后呈显著负相关。

本实验研究发现，胆囊癌中CA199和CEA水平显著高于对照组(胆囊结石、胆囊息肉)，通过对检测胆汁和血清中二者水平得知，其含量在胆汁中显著，究其原因，与二者均可由肿瘤细胞合成、分泌，在肝脏代谢，故胆汁中水平高于血清。所以检测胆汁中CA199、CEA水平可以提高胆囊癌的诊断率。虽然检测胆汁肿瘤标记物可提高胆囊癌的诊断率，但操作起来比较复杂，而且其中干扰因素较多，比如肝脏的的降解，需对胆汁进行特殊处理，故该法未作为临床常规检测，但其优越的价值仍有必要进一步研究。本实验的研究对象中，多于手术过程中收集胆汁样本。

目前诊断消化系统恶性肿瘤的诊断常用影像学检测为主，大量文献表面，在恶性肿瘤早期，当影像学检测无阳性结果时，血清中存在的肿瘤标记物已有不同程度升高[13]。所以测定早期肿瘤标志物的水平，对疾病的早期诊断、治疗以及预后，具有很高的价值，但大多消化性肿瘤缺乏特异性血清学指标。本实验发现，胆囊癌患者胆汁、血清CA199、CEA均高于良性病变组，其中以CA199升高明显，其浓度为(45.91±17.21)U/mL，提示胆囊癌细胞也参与分泌CEA和CA199，且分泌量远高于胆囊良性病变组，其中以CA199的分泌量为高，相关分析发现，CA199与CEA呈显著正相关。对入选的胆囊癌患者按病理分期，分为I、II、III期，进一步分析各期之间差异发现，随着胆囊癌分期越晚，胆汁CA199和CEA水平呈升高趋势，以CA199明显(P<0.05)。由于消化道的组织类型相似性，一种因子通常可被多种器官和组织分泌，故单独检测某指标对疾病的诊断常缺乏特异性。

测定胆汁CA199和CEA水平不仅有助于疾病的早期诊断，而且有助于分析病理分期，联合检测二者，不仅有助于提高疾病的诊断率，而且有助于胆囊癌分期的评估。但对于临床工作中遇见CEA或者CA199等升高的个体，还应考虑到其二者不仅仅存在于肿瘤组织中，当存在炎症、肝功能损害、肾功能不全时，均可引起二者水平升高。相信随着基础医学的发展，人们对包括CEA和CA199等在内的多种肿瘤标记物的认识不断提高，将在肿瘤治疗中发挥更大的作用。

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杨彦民(1968～)男，黑龙江克东人，硕士，主任医师。

赵洪阳(1972～)男，吉林白城人，在读硕士研究生，副主任医师。E-mail：sdytflj07@163.com。

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1008-0104(2015)01-0106-03

2014-05-21)