不同时间去除卵丘细胞对短时受精结果的影响

李国臻，郑波，郭钰英，杨志伟，陶林林

(邢台不孕不育专科医院，河北邢台054000)

不同时间去除卵丘细胞对短时受精结果的影响

李国臻，郑波，郭钰英，杨志伟，陶林林

(邢台不孕不育专科医院，河北邢台054000)

目的 探讨短时受精技术进行体外受精(IVF)时，不同时间去除卵丘细胞对短时受精结果的影响。方法 选择行IVF助孕的原发不孕且取卵后本周期移植的患者226例，随机分为A组119例和 B组107例，A组移植精卵结合4～6 h后去除卵丘细胞发育来的胚胎，B组移植精卵结合4～6 h后保留卵丘细胞发育来的胚胎。比较两组的胚胎种植率和妊娠率。结果 A、B组胚胎种植率分别为36.51%和52.09%，两组比较有统计学差异(P<0.05)；妊娠率分别为52.94%和66.35%，两组比较无统计学差异(P>0.05)。结论 短时受精过程中，在保证患者受精的情况下，将剩余的卵母细胞保留卵丘细胞可以提高胚胎的种植率。

体外受精；去除卵丘细胞时间；种植率

使用短时受精技术进行体外受精(IVF)时，卵子脱颗粒时间何时为最佳存在争议。早脱颗粒可能会增加多精受精率，影响胚胎基因表达与甲基化修饰，影响胚胎质量；晚脱颗粒可能导致少数患者受精失败，失去补救单精子卵胞浆显微注射(ICSI)的最佳时机[1]。本研究观察了IVF去除卵丘细胞和保留卵丘细胞发育来的胚胎的种植率和妊娠率，为短时受精及短时受精早补救ICSI周期移植胚胎的选择提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2010年6月～2013年11月在我院行IVF短时受精第三天移植的原发性不孕患者226例，年龄25～35岁，获卵数大于10枚。病因为女方原发不孕并男方精液正常或轻度少弱精子症。将患者随机分为A组119例和B组107例，A组年龄(28.26±4.34)岁，基础卵泡刺激素(FSH)(5.23±1.65)IU/L；B组年龄(27.85±4.85)岁，基础FSH(4.95±2.07)IU/L。两组年龄、基础FSH具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 受精方法及分组 患者超促排卵，肌注人绒毛膜促性腺激素(hCG)6 000～10 000 U后36～37 h经阴道B超取卵，取卵后常规给予黄体酮(P)肌肉注射80～100 mg/d。取卵后3～4 h进行微滴法授精。每微滴为30～50 μL含5%血清白蛋白的G-IVF，加入10 000～20 000条精子(精液处理均为密度梯度法)，加卵1～2枚。精卵共孵育4～6 h后用巴氏德吸管随机取出5～10枚卵母细胞，轻轻吹打去除卵丘细胞，置于新鲜培养液微滴中(含5% HSA的G-IVF)中观察第二极体出现情况(无卵丘细胞)；若>50%的卵母细胞出现第二极体判定受精成功。将剩余的卵母细胞保留卵丘细胞自微滴移出，放入另一新鲜的培养液中继续培养(含5% HSA的G-IVF)。受精后18～20 h(D1天)全部去除卵丘细胞，观察受精情况，并进行原核评分。根据移植胚胎来源分组：A组为移植受精后4～6 h去除卵丘细胞发育来胚胎的患者，B组为移植受精后4～6 h保留卵丘细胞(18～20 h去除卵丘细胞)发育来胚胎的患者。

1.2.2 胚胎培养 受精卵继续培养至72 h观察发育情况，并进行胚胎分级。以胚胎细胞数≥6枚，卵裂球大小较为均匀，碎片≤10%为可用胚胎。于取卵后72 h移植。移植胚胎数目1～3枚，胚胎移植后给予黄体酮支持黄体。移植后14 d测血hCG，移植28～35 d行B超检查，发现孕囊即为临床妊娠，种植率为B超下可见孕囊数/移植胚胎数×100%。

1.2.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件，组间均数比较采用配对t检验，率的比较采用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

两组平均获卵数、平均移植数、移植日内膜、妊娠率比较均无统计学差异(P均>0.05)，两组种植率比较有统计学差异(P<0.05)。

表1 两组发育胚胎移植后的结局比较

注：与B组比较，*P<0.05。

3 讨论

Chen等[2]提出，在常规IVF短时受精后6 h通过剥除卵丘细胞观察第二极体是否排出可预测受精与否。此后，许多研究表明早补救ICSI能有效预防受精失败，提高妊娠率，获得良好的临床结局[3～6]。也有学者报道，早期脱颗粒多精受精的比例偏高。其原因可能是：在受精早期，过早脱卵丘细胞的机械操作很可能对卵母细胞造成损伤，特别是透明带的损伤[4]，可能影响皮质反应和透明带反应，如果造成透明带上的微小缺口，也会增加多精入卵的机会；卵丘颗粒细胞上的特有成分可降低多精受精率，受精早期去除卵丘细胞会使其微环境发生改变，也可能造成增加多精受精的机会。我们在实际工作中发现，短时受精过程中4～6 h全部去除卵丘细胞多精受精的比例偏高，所以采取部分剥除法(5～10枚)去除卵丘细胞，若大于50%就不再去除卵丘细胞，避免了多精受精的概率，也可以达到早判断受精结果的目的，与文献[7]报道一致。关于颗粒细胞对后续胚胎的发育潜能的影响，以及短时受精早去除卵丘细胞对胚胎基因表达与甲基化修饰的影响、对胚胎发育潜能和种植率的影响，目前尚无定论。李蕾等[8，9]研究认为，颗粒细胞可以分泌一些对早期胚胎发育有利的物质，如生长因子、糖蛋白等，其可作为共培养细胞促进胚胎的发育。而且颗粒细胞也可以通过代谢去除胚胎体外微环境中的不利于胚胎发育的物质，如重金属二价离子等。Raman等[10]研究认为，卵丘细胞与卵母细胞之间存在的包括缝隙连接在内的细胞间复杂的连接机制，对卵泡的发育及胚胎的质量都至关重要。有研究对常规IVF(精卵共孵育16～18 h)与短时受精的情况进行比较，发现短时受精不能提高胚胎利用率和临床妊娠率[11]，另外一些研究的结论则相反[10，12]。本研究只比较了短时受精后去除卵丘细胞与保留卵丘细胞所发育来胚胎的移植后结局。结果显示，移植选择短时受精后全部为4～6 h去除卵丘细胞发育来的胚胎与受精后18～20 h去除卵丘细胞发育来的胚胎的种植率比差异有统计学意义。提示卵母细胞周围的颗粒细胞不仅与受精有重要关系，而且对胚胎之后的发育潜能也具有重要意义，为移植时的胚胎选择(胚胎评分同等级别的情况下首选保留卵丘细胞的胚胎移植)提供了一个参考。由于例数所限，本文数据显示虽然保留卵丘细胞组的妊娠率高于无卵丘细胞组，但无统计学差异，需扩大样本量进一步研究。

综上所述，在短时受精去除卵丘细胞判断受精情况时，在能保证正确判断受精的前提下要尽可能减少数目。在新鲜移植过程中优先选择没有去除卵丘细胞发育来的胚胎，有助于改善辅助生殖的结局，安全性更高。

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郭钰英

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.01.031

R711.6

B

1002-266X(2015)01-0074-02

2014-01-08)