卡介菌多糖核酸增进鸡体免疫水平试验

摘要：200只AA肉鸡，平均分为4组：卡介菌多糖核酸高、中、低剂量组和生理盐水对照组。试验鸡分别于给药前1天、停药后第4天、停药后第7天以及第10天采血，进行细胞免疫（外周T淋巴细胞转化试验），以研究卡介菌多糖核酸对鸡体免疫功能的影响。结果表明，卡介菌多糖核酸可以提高鸡体的免疫功能，其中以中剂量组效果最好。

关键词：卡介菌多糖核酸；免疫调节；鸡

中图分类号： R979.5 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2015.12.031

适时利用疫苗进行预防接种是目前世界范围内防治畜禽主要疫病的重要手段，但有效的免疫效果受众多因子的影响，除了疫苗的质量、正确的使用等情况外，畜禽免疫接种时所处的环境和畜禽本身所处的状态等因素在畜禽获取良好的免疫力方面也是一项不容忽视的因素。因此，在不断提高疫苗质量、正确合理地施以免疫接种外，探索能促使畜禽提高对疫苗免疫应答的手段和方法，也是体现预防为主原则的一项新课题。卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）是从卡介菌中提取的菌体成分，能提高机体细胞免疫功能，调节体液免疫水平，具有抗感染、抗变态反应、抗肿瘤等作用。

1 材料和方法

1.1 主要试验材料

1.1.1 试验动物 1日龄AA肉鸡，由南京市迈皋桥鸡场提供。

1.1.2 卡介菌多糖核酸 由瑞普（天津）动物药业有限公司药物研究中心提供。

1.1.3 RPMI 1640培养基 GIBCO BRL公司产品。

1.1.4 SP2/0骨髓瘤细胞株 山东医科院提供。

1.2 试验设计

随机将200羽1日龄AA肉雏鸡分为BCG-PSN高（0.5毫升/羽）、中（0.25毫升/羽）、低（0.125毫升/羽）剂量组和生理盐水对照组，共4组，每组50羽。各试验组于7日龄时开始饮水给药，连用3天。各组均于10日龄首次免疫接种鸡新城疫 （ND）疫苗。

各试验组鸡施以相同的饲养管理，并分别于给药前1天、停药后第4天、停药后第7天以及第10天采血，进行细胞免疫（外周T淋巴细胞转化试验）。

1.3 试验方法

采用李祥瑞介绍的MTT法。鸡心脏无菌采血4毫升，肝素抗凝，用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，用RPMI 1640培养液调整细胞数至2.0 ×106个/毫升；将100微升上述外周血淋巴细胞接种于96孔平底细胞培养板，加入20微升 PHA，并设有不加PHA的对照，每个样品4个重复。同时设无细胞的RPMI 1640孔，用于调零。37 ℃，培养44小时后，加入20微升MTT，继续培养4小时，吸去孔内液体，每孔加入100 微升DMSO，振荡器上振荡10分钟，使结晶充分溶解。用酶联免疫检测仪检测OD570纳米值。以PHA刺激孔OD570纳米平均值减无PHA刺激孔OD570纳米平均值表示淋巴细胞的增殖。

2 试验结果

混饮不同剂量BCG-PSN的试验组和相应对照组肉雏鸡外周血中T淋巴细胞转化率见表1。

由表1可见，给药前1天，各组间差异不显著；停药后第4天，不同剂量BCG-PSN给药组与对照组相比，鸡外周血中T淋巴细胞活性均有明显提高，统计学分析表明差异显著（P<0.05）；停药后第7天，不同剂量BCG-PSN组鸡外周T淋巴细胞转化率均比对照组鸡的T淋巴细胞转化率高，差异极显著（P<0.01），中、低剂量组鸡的T淋巴细胞转化率又显著高于高剂量组鸡（P<0.05），中剂量组鸡和低剂量组鸡的T淋巴细胞转化率则没有明显差异。停药后第10天，BCG-PSN高、中、低剂量组鸡T淋巴细胞转化率又极显著地高于对照组鸡T淋巴细胞转化率（P<0.01），中剂量组鸡T淋巴细胞转化率又继续维持高水平，显著地高于低剂量组（P<0.01）。

给药前、后不同时期内，各BCG-PSN给药组鸡和对照组鸡外周T淋巴细胞转化的动态变化见图1。

由图1可见，对照组鸡外周T淋巴细胞转化率尽管随鸡日龄的增长略有增高，但3个BCG-PSN给药组T淋巴细胞转化率随给药后日龄的增长均表现出明显的增高，其中又以中剂量组明显高于高剂量组。

3 讨论

试验结果显示，BCG-PSN具有一定的生物活性，可以促进机体产生良好的免疫效果，增强机体的免疫功能。BCG-PSN给药组鸡T淋巴细胞转化率呈快速上升趋势，其中中剂量组尤为明显。本试验说明BCG-PSN能够提高鸡体免疫，能加速鸡体免疫功能的发育完善，从而增强雏鸡免疫应答能力，提高免疫效果，并且这种免疫增强作用与给药剂量密切相关，临床上建议采用中剂量的BCG-PSN溶液进行免疫。

参考文献

[1] 肖登元，曹衡.引起畜禽免疫失败的原因及防治对策[J].农业与技术，2005，25（6）：78-79.

[2] 阎林海，丁超，王洋，等.养鸡场（户）免疫接种应注意的问题[J].现代畜牧兽医，2006，（4）：39-40.

[3] 李国江，张喜堂.家禽免疫失败的原因分析[J].动物保健，2005，（1）：23-24.

[4] 胡北侠，黄艳艳，任素芳，等.兽医常用免疫佐剂的研究概况与发展趋势[J].中国畜牧兽医，2005，32（3）：38-40.

[5] 童岩，边传周，郑纯宁.新型免疫佐剂研究进展[J].河南农业科学，2005，（7）：103-104.

作者简介：吕英然，硕士，广东科贸职业学院，讲师，研究方向：兽医微生物与免疫。