HPLC法测定参鹿的侯丸中淫羊藿苷的含量*

杨 东

(泰安市中医医院，山东泰安271000)

HPLC法测定参鹿的侯丸中淫羊藿苷的含量*

杨 东

(泰安市中医医院，山东泰安271000)

目的建立参鹿的侯丸中淫羊藿苷的含量测定方法。方法采用HPLC，Agilent(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为乙腈:水(0～10分钟，25～30:75～70;10～20分钟，30:70)，检测波长为270nm，流速1.0 ml· min－1，柱温25℃。结果淫羊藿苷对照品进样量在0.112～1.12mg呈良好线性关系，回归方程为Y=1637.4x+ 40.6，相关系数为r=0.9991。平均回收率为98.6%，RSD为2.09%(n=9)。结论该方法简便，重现性好，可作为参鹿的侯丸的质量控制方法。

参鹿的侯丸;淫羊藿苷;含量测定;高效液相色谱法

参鹿的侯丸为我院院内制剂，批准文号为鲁药制字Z09080148。该品种临床已应用多年，疗效显著。处方由淫羊藿、人参、鹿角胶、菟丝子等18味中药饮片组成，功效为补肾益脾，活血通经。用于排卵功能障碍兼肾虚或兼脾虚气血不足而运行无力者。方中淫羊藿具有补肾阳，强筋骨，祛风湿，为君药。以前该制剂品种质量标准中只含当归、川芎的定性鉴别项目，无饮片含量测定项目，为控制该产品质量，确保其临床疗效，我们依据药典方法［1］，采用高效液相色谱(HPLC)法测定淫羊藿苷的含量。

1 材料

1.1 仪器Agilent1200高效液相色谱仪(美国安捷伦)，ChemStation色谱工作站，VWD检测器; CP114分析天平(奥豪斯仪器(上海)有限公司)。

1.2 样品与试剂甲醇、乙腈为色谱纯;其余试剂为分析纯;娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)。淫羊藿苷对照品(批号:110737-200415，中国药品生物制品检定所);参鹿的侯丸及阴性样品(本院制剂室自制，批号分别为131212，131213，131214)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适应性试验色谱柱Agilent TC-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相乙腈:水(0～10分钟，25～30:75～70;10～20分钟，30: 70);检测波长270 nm;流速1.0 ml/min;进样量10 μl。在上述色谱条件下进样，以淫羊藿苷峰计算，理论板数为35391，淫羊藿苷峰与最相邻峰分离度为R=5.11，对称因子为1.01，符合药典要求。阴性色谱图中，在与淫羊藿苷峰保留时间相同位置上未见干扰峰，表明其他组分不干扰淫羊藿苷的含量测定。色谱图见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备取淫羊藿苷对照品适量，精密称定为14.0 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得淫羊藿苷对照品储备液;精密量取上述储备液1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(含量为0.056 mg· ml－1)。

图1 参鹿的侯丸高效液相色谱图

2.2.2 供试品溶液制备取本品装量差异项下内容物适量，取其中粉约2.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20 ml，密塞，称定质量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)1小时，放冷，再称定质量，用稀乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备按处方比例称取去淫羊藿的其余药味，依本品制备工艺制备阴性样品，参照2.2.2项下制备阴性供试品溶液。

2.3 线性关系考察吸取对照品溶液2、5、10、15、20 μl，分别注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积(A)对进样质量(M，μg)进行线性回归，得方程Y =1637.4X+40.6，相关系数r=0.9991，结果表明淫羊藿苷溶液在0.112～1.12 μg线性关系良好。

2.4 精密度实验吸取对照品溶液10 μl，连续进样6次，分别测定其峰面积，平均峰面积为981.7，RSD为0.59%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性实验取供试品溶液，分别于0、1、2、4、6小时，精密量取10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱峰面积，RSD=1.6%。结果表明，供试品溶液在6小时内基本稳定。

2.6 重现性实验在不同实验室条件下，取同一批样品，采用不同仪器(SPD-20AT岛津与Agilent 1200色谱仪)、不同操作人(两人)，按照拟定的色谱条件测定样品，测定其峰面积值，淫羊藿苷的平均含量为0.420 mg·g－1，RSD=2.64%(n=3)，表明方法重现性好。

2.7 加样回收实验取已知含量的供试品(批号: 131212)约1.0 g，精密称定，共取6份，分别精密加入一定量的淫羊藿苷对照品溶液，按供试品溶液制备方法和色谱条件进行测定，计算回收率。结果表明，此方法测定本品中淫羊藿苷的含量，加样回收率良好。见表1。

表1 参鹿的侯丸中淫羊藿苷加样回收试验

2.8 样品测定取本品(3批)，按2.2.2方法制备供试品溶液，分别精密吸取样品溶液10 μl注入液相色谱仪，测定淫羊藿苷含量。结果见表2。

表2 样品含量测定

3 讨论

参考《中国药典》2010年版一部及文献，淫羊藿苷在稀乙醇中溶解性较好，药典中中药材淫羊藿是以稀乙醇为提取溶剂，采用超声法进行提取。本实验参考其实验条件进行提取参数考察，考察结果表明使用稀乙醇溶解，既可实现在色谱分离时所产生的溶剂峰不干扰淫羊藿苷的准确定量，又做到其溶解度满足实际样品分析的要求。

《中国药典》2010年版一部淫羊藿药材项下含量测定样品超声处理1小时，经研究，本品超声处理1小时与0.5小时提取率几乎无变化，即超声0.5小时即可将本品中淫羊藿苷提取充分，因此采用超声处理0.5小时。

方法研究过程中采用不同人、不同仪器、不同试验场所、不同温度等条件验证本方法，结果不同条件下RSD均小于3%，因此本方法合理，可以将其作为本制剂的含量控制方法。

［1］国家药典委员会编.中国药典.一部［S］.2010:908－909.

Determination of content of Icariin in Shenludihou Pill by HPLC

YANG Dong
(Taian City Hospital of Traditional Chinese Medicine，Taian 271000，China)

Objective:To establish a quantitative method for determination of icariin in Shenludihou Pill.Methods:A HPLC method was used to determine the content of icariin with acetonitrile-water(0～10min，25～30:75～70;10～20min，30:70);as the mobile phase and detection wavelength was 270nm，The flow rate was 1.0 ml·min－1and the column temperature was 25℃.Results:The linearity of icariin were good in range of 0.112～1.12(g，and the regression equation was Y=1637.4x+40.6(r=0.9991).The average recovery was 98.6%and the RSD value of repeatability was 2.09%(n =9).Conclusion:This method is simple and reproducible，which can be used for quality control of Shenludihou Pill.

Shenludihou Pill;icariin;content determination;HPLC

R943

A

1004-7115(2015)07-0790-02

10.3969/j.issn.1004-7115.2015.07.026

2015-01-14)

杨东(1971－)，男，山东泰安人，主管药师，本科，主要从事制剂研制工作。