华蟾素联合化疗治疗消化道肿瘤对CD4+CD25+T细胞的影响*

李春青 牛思强 贵永贤

(新乡市中心医院肿瘤科，河南新乡453003)

华蟾素联合化疗治疗消化道肿瘤对CD4+CD25+T细胞的影响*

李春青 牛思强 贵永贤

(新乡市中心医院肿瘤科，河南新乡453003)

目的探讨华蟾素联合化疗对晚期消化道肿瘤患者CD4+CD25+T细胞的影响。方法选择72例晚期消化道肿瘤患者，随机分为华蟾素联合化疗治疗组(简称为观察组)，单纯化疗治疗组(简称为对照组)，完成2个周期治疗，观察两组患者的临床疗效、生存质量，使用流式细胞仪检测两组病人的外周血CD4+CD25+T细胞水平变化。结果1.观察组有效率58.13%高于对照组34.48%，差异有统计学意义(P＜0.05)。2.观察两组患者的生存质量，观察组有效率为78.04%，高于对照组的63.47%，差异有统计学意义(P＜0.05);3.观察组患者治疗后，CD 4+CD 25+/CD4+、CD 4+CD 25+Foxp3/CD 4+为8.35±1.64、0.99±0.54，观察组则为12.01±1.89、1.55±0.55，差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论华蟾素具有增强体液免疫和细胞免疫的作用，联合化疗治疗晚期消化道肿瘤，不仅疗效佳，安全性高，提高患者生存质量，而且可有效抑制CD4+CD25+T细胞的数量，提高患者免疫力。

消化道肿瘤;华蟾素;化疗;CD4+CD25+T细胞

消化道肿瘤发病率较高，早期多无临床症状，容易被忽略，早期诊断十分困难，70%～80%患者就诊时已处于晚期，给肿瘤的治疗带来很大的障碍，导致大多数患者预后不佳。研究认为，肿瘤的发生、进展与机体的抗肿瘤免疫逃逸相关，有一类具有免疫调节功能的T细胞，即CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells，Tregs)在机体抗肿瘤免疫反应中起着重要的作用［1］，通过下调机体的免疫应答来降低宿主的抗肿瘤免疫反应，与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关。目前晚期肿瘤治疗多以化疗为主，虽然延长患者的生存时间，然而大多化疗药物选择性低，在杀伤肿瘤细胞的同时，有明显的毒副作用。因此在肿瘤的治疗过程中，人们重视减少肿瘤负荷的同时，注意恢复、重建机体的免疫功能。有研究显示，密切观察外周血CD4+CD25+细胞水平，对合理制定治疗方案，以及观察患者机体的免疫状态具有重要意义。现回顾分析新乡市中心医院肿瘤内科自2010年1月以来，应用华蟾素联合化疗方案应用于晚期消化道肿瘤治疗，并观察患者CD4+CD25+T细胞水平，现将结果汇报如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象选择自2010年1月－2012年12月在我院经过细胞学或者病理学确诊为消化道肿瘤患者，共72例，预计生存期多于3个月，Kps评分高于70分，并且排除近3个月使用免疫增强剂、接受放化疗。所有患者均为III、IV期晚期肿瘤患者，其中男性38例，女性34例;平均年龄(57.1±2.8)岁;肿瘤类型:食管癌24例，贲门胃癌17例，结肠癌15例，直肠癌9例，肝癌7例。

1.2 病例分组随机将所有患者分为2组，即:华蟾素联合化疗方案治疗组43例患者(简称为观察组)，单纯化疗方案治疗组29例(简称为对照组)。

1.3 治疗措施对照组:完善化疗前的各项检查，排除化疗禁忌症，给予患者Folfox6方案化疗，两周重复该方案，两个周期后，评价效果。观察组:在对照组“Folfox6化疗方案”的基础上联合华蟾素治疗，具体用法:5%葡萄糖500 ml+50 ml华蟾素，静脉滴注，1次/天，15天为1疗程，2个疗程后评价疗效。

1.4 观察指标标准有效率评价:根据世界卫生组织实体瘤的疗效评价标准，根据肿瘤体积的缩小程度分为完全缓解(CR)，部分缓解(PR)，稳定(SD)，病情进展(PD)，有效率=(CR+PR)/病例数× 100%。生存质量评价:评价按照KPS评分。具体为:治疗后评分增加＞20分，为显效;评分增加＞10分，为有效;评分下降10分，不能完成化疗疗程，为无效。流式细胞仪分析:应用荧光直接标记法及流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+T细胞，取不同荧光标记的单克隆抗体，PE标记的CD4抗体，FITC标记的CD25抗体，Cychorme标记的CD69和CD45RA抗体，各20微升，各样本加入100微升肝素抗凝的外周血，混匀后，在室温下避光孵育15～30分钟，加入红细胞裂解液2毫升，混匀后避光放置5～10分钟至液体透亮，PSB重悬后洗涤2次，用流式细胞仪检测，使用Cellquest软件分析数据。

1.5 统计学处理所有数据均采用SPSS16.0统计学软件分析，以P≤0.05为有统计学差异，使用卡方检验比较两个总体率或构成比之间有无差别，计量资料使用t检验。

2 结果

2.1 两组患者临床疗效比较对比两组患者的治疗有效率，观察组有效率48.28%，对照组有效率31.03%，观察组优于对照组，见表1。

表1 两组患者临床疗效比较(例)

2.2 两组患者生存质量比较对比两组患者的生存质量，观察组患者有效率为78.04%，对照组则为64.47%，见表2。

表2 两组患者生存质量对比［例(%)］

2.3 两组患者的外周CD4+CD25+T细胞比较治疗后，观察组CD4+CD25+/CD4+、CD 4+CD25+Foxp3/CD 4+为8.35±1.64、0.99±0.54，对照组则为12.01±1.89、1.55±0.55。

表3 两组患者的外周CD4+CD25+T细胞比较(±s)

表3 两组患者的外周CD4+CD25+T细胞比较(±s)

注:表中CD4+CD25+/CD 4+指CD4+CD25+所占CD4+T细胞的百分比，CD4+FOXP3+/CD 4+指CD4+FOXP3+所占CD4+T细胞的百分比。

组别nCD 4+CD 25+/CD4+CD4+CD25+Foxp3/CD4+＜0.05＜0.05 438.35±1.640.99±0.54对照组2912.01±1.891.55±0.55 t值3.312.94 P值观察组

3 讨论

人体内有多种免疫成分负责识别和清除癌细胞，然而癌细胞仍逃避免疫攻击，在体内不断生长，以至于出现无法控制的复发和转移，说明癌细胞有可能通过多重方式逃避淋巴细胞的免疫效应，重要的机制之一就是CD4+CD25+T(Tregs细胞)细胞的“免疫逃逸”效应［2］，该细胞能抑制性调节CD4+或CD8+T细胞的活化与繁殖，生理状态下，可以维持免疫系统的内环境稳定、免疫耐受、逃避免疫应答的平衡，在免疫应答中发挥重要的负调节作用。肿瘤患者的外周血和肿瘤局部的CD4+CD25+T细胞比例增加，说明Tregs细胞调节的免疫耐受和肿瘤发生密切相关，并直接参与了肿瘤的进展。原因可能是，当肿瘤发生时，外周血中CD4+CD25+Tergs细胞［3］诱导性增高，导致肿瘤免疫逃逸。其生物学效应的机制尚未完全明确，可能为:①不依赖抑制性细胞因子的产生，通过与靶细胞(包括初始T细胞和记忆性T细胞)的直接接触，依靠穿孔素和CD18T细胞，杀死树突状细胞和CD4+T、CD8+T及部分单核细胞［4］，发挥抗肿瘤抑制作用;②在免疫应答中，Tergs细胞通过其组成性表达的CTLA-4和膜型TGF-β的作用，下调靶细胞IL-2Rα链的表达，抑制靶细胞增殖;③Tregs表面的CTLA-4与树突状细胞、巨噬细胞上的配体B-7结合后，抑制该细胞的增殖，同时下调抗原提呈细胞APC表达共刺激因子CD80和CD86，干扰共刺激信号的产生发挥负调节作用。研究发现［5］，Treg还与癌症病人预后有关;彭启全［6］分析了117例肝癌患者外周血的CD4+CD25+T细胞水平，发现该细胞水平与肝癌患者的预后有关，比例高的患者5年生存率低于比例低者(P＜0.05)，由此认为，高水平的Treg可能使微小的癌灶更容易逃避存活，进而影响患者的远期生存率。

那么如何清除CD4+CD25+T细胞，控制该细胞的功能和数量是治疗的热点，文献证明［7］通过各种途径清除该细胞或者逆转Tregs细胞的抑制作用，可增强对肿瘤细胞的清除。Kuntson［8］在研究转基因鼠中发现，用白细胞介素-2免疫毒素去除Treg细胞后，可导致持续的抗肿瘤免疫反应。然而，癌细胞通过多种机制逃避T细胞的免疫监视，多数免疫治疗手段未取得良好的治疗效果。研究发现［9］化疗药物可以通过抑制癌细胞微环境的血管生长，减低Tregs的表达水平，控制肿瘤的进展。Nagayama［10］报到，动物肿瘤模型中，使用低剂量化疗药物使Tregs细胞的数目和功能明显减退，即使晚期、化疗耐受的肿瘤病人，反复低剂量给予化疗，肿瘤血管生成明显减少，减轻T细胞的抑制。张燕等［11］研究了CD4+CD25+T细胞对细胞毒T细胞(CTL)杀伤效果的影响，发现将这种细胞清除后，可以提高CTL细胞杀伤效果，为肿瘤的免疫治疗提供新方式，但如果完全清除该细胞，则可能导致自身免疫疾病［12］，如何适当的调控该细胞水平，需进一步研究。总之，Tregs调控肿瘤抑制与生长，利用化疗药物清除Tregs细胞的数目，肿瘤患者能明显受益。

然而，化疗药物在清除Tregs细胞的同时，对正常细胞也有抑制甚至是毒副作用，免疫功能受到不同程度的抑制，可能导致肿瘤的复发和转移，还降低患者的生活质量。怎样在确保化疗效果的同时，最大程度的减轻毒副作用，提高病人的生存质量和治疗的依从性，是急需解决的问题，在这方面，传统中医药华蟾素具有清热解毒、消肿止痛、活血化瘀、软坚散结等功效，可以增强患者的免疫力，增强放化疗敏感性，减少不良反应，提高患者生存质量，延长生存期等。其作用机制可能与华蟾素可抑制肿瘤细胞DNA和RNA的复制有关。本研究结果也说明:华蟾素联合化疗治疗晚期消化道肿瘤有效率高，用药后不良反应少，而且可以有效的降低CD4+CD25+T细胞数量，增强机体对癌细胞的免疫杀伤力，是安全、有效的抗肿瘤方法。

CD4+CD25+细胞作为一种重要的T细胞亚群，该细胞能抑制免疫应答、促进肿瘤的免疫逃逸，而且在肿瘤患者的外周血中存在大量表达，可以将该细胞作为靶点，采取治疗措施清除这些细胞，会提高细胞毒性T细胞的免疫功能，诱导肿瘤免疫反应，为肿瘤的临床免疫治疗提供一条新的途径。

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The influence of cinobufacini combined with chemotherapy to CD4+CD25+cancer T cell subsets on advanced gastrointestinal cancer

LI Chun-qing NIU Si-qiang GUI Yong-xian
(Dept.of Oncology，Xinxiang Central Hospital，Xinxiang 453003，China)

Objective:To investigate the influence of cinobufacini combined with chemotherapy to CD4+CD25+T cell on advanced gastrointestinal cancer.Methods:Seventy-two cases of advanced gastrointestinal cancer patients were selected，randomly divided them into cinobufacini added with chemotherapy treatment group(short for the observation group)，and simple chemotherapy treatment group(short for the control group)，the two group patients＇clinical therapeutic effects and quality of life in patients were observed after treatment，flowing cytometry was used to analyze CD4+CD25+T cell in peripheral blood.Results:1.After treatment，effective percentage in the observation group was 58.13%，which was higher than the control group＇s 34.48%，the difference had statistical significance(P＜0.05).2.The quality of life in the observation group was 78.04%，which was better than control group＇s 63.47%，and the difference had significant difference (P＜0.05);3.The percentage of CD4+CD25+T lymphocytes and CD4+CD25+Foxp3 in CD4+T lymphocytes in the observation group were 8.35±1.64、0.99±0.54 respectively，and compared with the control group 12.01±1.89、1.55± 0.55，there was statistical significance between each other(P＜0.05).Conclusion:Cinobufacini，an excellent immunopoteniator，can play important role in enhancing humoral and cellular immunity and the combination with folfox6 project to advanced gastrointestinal cancer not only has good curative effect，high security，but also can inhibit the number of CD4+CD25+T cells，which can improve the patient＇s immune function

gastrointestinal cancer;cinobufacini;chemotherapy;CD4+CD25+T cell

R735

A

1004-7115(2015)07-0747-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2015.07.008

2015-02-08)

李春青(1970—)，本科，副主任医师，主要从事肿瘤内科工作。