利用最小抑菌浓度确定黄连液及麝香治疗糖尿病足的最佳药物浓度

潘敏文小燕曾池清梁晓谊

（1肇庆市第二人民医院临床药学科，广东 肇庆 526000；2广东省肿瘤防治中心中药房，广州 510000；3肇庆市端州区华佗医院检验科，肇庆 526000）

利用最小抑菌浓度确定黄连液及麝香治疗糖尿病足的最佳药物浓度

潘敏1文小燕1曾池清2梁晓谊3

（1肇庆市第二人民医院临床药学科，广东 肇庆 526000；2广东省肿瘤防治中心中药房，广州 510000；3肇庆市端州区华佗医院检验科，肇庆 526000）

目的：确定黄连液及麝香治疗糖尿病足的最佳药物浓度。方法：将实验菌种（产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌）接种到不同浓度的中药培养基上，35℃培养24 h，报告菌落数，计算出不同浓度的中药液对细菌的抑制效果，以验证黄连液和麝香对已知菌的抑菌效果。结果：单用黄连液的浓度128 mg/mL时抑菌效果最佳；黄连液联合麝香时，黄连液32 mg/mL、麝香30 mg/mL的抑菌效果最佳。结论：最佳浓度的黄连液和麝香联合应用，能有效抑制针对糖尿病足所产生的多重耐药细菌，临床效果显著。

最佳药物浓度；抑菌浓度；黄连液；麝香；糖尿病足

糖尿病足是糖尿病（dabetes mellitus，DM）常见的慢性并发症之一。据报道，全球有1.5亿糖尿病患者，有15%的糖尿病患者在其生活的某一阶段会发生足溃疡或坏疽［1］。糖尿病足是中晚期糖尿病患者致残、致死的重要原因。与普通人群相比，糖尿病患者下肢截肢的机会要高出15～ 40倍，在老年人中的危险性更高［2］。在我国糖尿病人群中15%～ 18%的患者有足部并发症，截肢率高达20%～ 30%［3］。现代医学对于糖尿病足主要是基础治疗和局部治疗两方面［3］，治疗上仍存在诸多的限制，疗效也不甚理想。中医药治疗糖尿病足不良反应小，安全性高，改善临床症状的作用明显，可降低截肢率，其治疗手段多种多样，可以弥补现代医学不足之处。在临床上应用黄连液外敷治疗糖尿病足，效果良好，在原有的基础上研究发现黄连液联合麝香外敷治疗糖尿病足效果显著。麝香具有促溃疡面加快愈合的作用，在治疗过程中发现黄连液联合麝香对糖尿病足的多种耐药细菌有强大的杀菌和抑菌作用，本试验通过药敏试验筛选确定黄连液联合麝香治疗糖尿病足的最佳药物浓度，在临床上收到了显著的疗效，且安全性良好，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 试验与设计

采用随机、平衡对照试验设计。

1.2 药品与制备

黄柏、黄连、黄芩、栀子、麝香（广东和翔中药饮片厂提供）。取黄柏、黄连、黄芩、栀子，煎煮浓缩后制备成黄连液，把黄连液浓缩成流浸膏剂，即每1 mL药液相当于1 g原生药材；麝香分别用乙醇溶解成10，20，30 mg/mL 3个浓度。

1.3 耐药菌株筛选

收集2012-2013年期间住院治疗的糖尿病足患者，取足部溃疡、腐烂标本经细菌培养、鉴定为细菌性感染的病原菌138株，其中104例（产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌48株和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）56株）作疗效观察组，34例作对照组。各菌株固体琼脂穿刺培养，石腊封存。

1.4 试验方案

1.4.1 将黄连液进行浓度递减稀释，稀释后的药物浓度分别为 1 280，640，320，160，80，40，20，10，5，2.5 mg/mL，分装成 4组试管，每组 20管，A组是黄连液，并在B、C、D组试管中分别加入相当于 10，20，30 g麝香溶解物，充分混匀。然后以1∶9的比例将已倍比稀释的不同浓度药液加入M-H琼脂中，充分混匀后倾入无菌平皿中，此时A组含药琼脂的含药浓度为128，64，32，16，8，4，2，1，0.5，0.25 mg/mL，B组为 128/1，64/1，32/1，16/1，8/1，4/1，2/1，1/1，0.5/1，0.25/1 mg/mL，C组为128/2，64/2，32/2，16/2，8/2，4/2，2/2，1/2，0.5/2，0.25/2 mg/mL，D组为 128/3，64/3，32/3，16/3，8/3，4/3，2/3，1/3，0.5/3，0.25/3 mg/mL。

1.4.2 药敏试验 将4组含不同浓度抗菌药物的琼脂平板和一个不含药物作空白对照用的琼脂平板的底部分别用笔画出放射状小格并编号。吸取制备好的菌液1～ 2l点种于含药琼脂平板表面相应的小格内，每点菌落数约1×104cfu直径5～ 8 mm的菌斑。置35℃ 18～ 24 h，观察结果。一个平板接种12个菌株，可同时测定12个菌株的最小抑菌浓度（MIC）。

1.5 统计学方法

用SPSS 13.0统计软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差表示，组间比较用单因素方差分析，P＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 最佳药物浓度确定

根据试验确定了黄连液联合麝香治疗糖尿病足时黄连液的最佳浓度为：原配方中药的总生药量是60 g（黄连，黄柏，黄芩，栀子各15 g），煎取药液250 mL，中药药液按照1 g/mL生药量［5］计算浓度是24 mg/mL，按照实验结果应把生药量增加至 80 g（黄连，黄柏，黄芩，栀子各20 g），煎取药液250 mL，才可达到32 mg/mL的要求，麝香的浓度为30 mg/mL。4个实验组对产ESBLs的大肠埃希菌和MRSA的MIC见表1～4。结果判定以实验菌株在最低浓度即被抑制表示对该组方敏感。实验结果显示：A、B、C、D组均能对产ESBLs的大肠埃希菌和MRSA产生抑菌效果，A、B、C组间无显著差异 （A、B组间比较，P=0.976 3；A、C组间比较，P=0.928 6；B、C组间比较，P=0.952 3）。D组在最低浓度时抑菌作用明显高于A、B、C组，差异有统计学意义（A、D组间比较，P=0.000 0；B、D组间比较，P=0.000 0；C、D组间比较，P= 0.000 0），表明黄连液联合麝香治疗糖尿病足疗效确切，且麝香的浓度直接影响产 ESBLs的大肠埃希菌和MRSA的抑菌效果。

2.2 初步临床效果

实验治疗组方法：清洗创面后，用熬制的黄连液（黄连、黄柏、黄芩、栀子）浸泡20 min，使溃疡面充分浸泡在水中，保持水温在35～ 40℃；浸泡完毕用无菌纱布拭干；在创面上均匀涂布用乙醇混合的麝香粉剂 （广东和翔中药饮片厂提供，0.2 g/支）。盖无菌纱布，用胶布固定，每1～ 3天换药1次。

实验对照组方法：清创祛除坏死组织。先用双

表1 A组对两种细菌MIC （mg/mL）

表2 B组对两种细菌MIC （mg/mL）

表3 C组对两种细菌MIC （mg/mL）

表4 D组对两种细菌MIC （mg/mL）

氧水清洗创面，然后用生理氯化钠溶液冲洗。再将庆大霉素注射液20万U，山莨菪碱注射液20 mg，普通胰岛素10 U 3药混合，用上述混合液浸透无菌纱布湿敷于创面，15 min后换用生理氯化钠溶液+利凡诺混合制成0.3%的溶液湿敷；20 min后换无菌纱布覆盖固定。每天换药1～ 2次。

Determination of Optimal Drug Concentration of Coptis Chinensis Liquid and Musk in the Treatment of Diabetic Foot Using Minimum Inhibitory Concentration

Pan Min1，Wen Xiaoyan1，Zeng Chiqing2，Liang Xiaoyi3（1 Clinical Pharmacy of The Second People’s Hospital of Zhaoqing City，Guangdong Zhaoqing 526000，China；2 Pharmacy of Cancer Center of Guangdong Province，Guangzhou 510000；3 Clinical Laboratory of Huatuo Hospital of Duanzhou District of Zhaoqing City， Zhaoqing 526000）

Objective:To determine the optimal drug concentration of coptis chinensis liquid and musk in the treatment of diabetic foot.Methods:The experimental strains（Escherichia coli and Methicillin-resistant Staphylococcus aureus （MRSA）which can produce the extended-spectrum β-lactamases （ESBLs））were inoculated into the culture medium of traditional Chinese medicine at different concentrations，at 35℃ for 24 hours， reporting the number of colony forming unit and calculating the bacteriostatic effect of different concentrations of traditional Chinese medicine to verify the bacteriostatic effect of coptis chinensis liquid and musk to the known bacteria.Results: The best bacteriostatic effect was obtained when simply using the coptis chinensis liquid at the concentration of 128 mg/mL.The best bacteriostatic effect was found when combined use of coptis chinensis liquid at the concentration of 32 mg/mL and musk at the weight of 30 mg/mL.Conclusion:The optimal concentration of the combined use of coptis chinensis liquid and musk can effectively inhibit the multiple drug-resistant bacteria produced by diabetic foot，and a remarkable clinical effect was showed.

Optimal Drug Concentration；Inhibitory Concentration；Coptis Chinensis Liquid；Musk；Diabetic Foot

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.11.004

潘敏，女，副主任药师。研究方向：临床药学、药剂学。通讯作者E-mail：amypm_2006@126.com