蛇胆的多种鉴别方法

周亚欣

蛇胆自古以来就是一味名贵药材，广泛应用于临床。蛇胆性凉，味苦微甘，有行气祛痰，祛风去湿之功效，用于治疗咳嗽多痰、目赤肿痛、皮肤热毒、口眼生疮、肺热咳嗽、胃热疼痛、肝热目赤、急性风湿性关节炎和痔疮等。市场上含蛇胆的中药制剂较多，常见的有蛇胆川贝散、蛇胆陈皮末、蛇胆追风丸、蛇胆川贝枇杷膏等。由于蛇胆具有独特的药用价值，加上市场需求量大，自然资源递减，市场上蛇胆的伪品时有发现，已报道的掺假物有鸡、鸭、鱼、猪、牛等动物胆汁和淀粉糊、青菜汁、明胶液、色素以及熟地黄提取液等，以及油胆（用机油刺激蛇鼻腔或蛇体，使胆汁增多而质差）或蜜胆或将蛇胆多次浸泡，再把蛇胆与酒液分别出售使胆汁稀薄质差。因此，应正确地鉴别各种蛇胆，从源头上控制药品质量和保障用药安全。

一、蛇胆的性状鉴别

蛇胆的性状鉴别是根据胆囊的外形特征、色泽、大小、质地、胆蒂位置、胆管（形状、长度及韧性）、胆汁稠度、气味等进行比较的鉴别方法。蒋碧英《真伪蛇胆鉴别》描述了正品蛇胆的性状鉴别要点;张穗《十四种蛇胆及其常见伪劣品的外观性状鉴别》对14种蛇胆及其常见伪劣品进行了外观性状鉴别。这种传统手段简单方便，可直观地将蛇胆与一般伪品区别开来，在早期药材收购、加工部门的现场鉴定中较常使用;但由于蛇胆的形态学特征往往因加工方法和条件不同而变化，鉴别效果因人不同（经验、主观影响等），因蛇而异（蛇的种类、大小、生理状态等），因观察环境（季节、光线等）而变化，误差较大，现阶段仅作为真伪鉴别的参考指标。

二、蛇胆的显微鉴别

根据蛇胆的组织残片、细胞或内含物等特征进行显微鉴别是蛇胆原药材鉴别的方法之一。杨育民等《蛇胆和一些小动物胆的鉴别》依据蛇胆内含物的形状、大小及颜色等显微特征鉴别了蛇胆及其伪充品鉴别;陆惠文《常见蛇胆的组织学特点及显微鉴别》根据蛇胆与伪品等各自的组织学特点将待检胆囊标本制成石蜡切片，经HE染色和显微观察，鉴别了蛇胆（眼镜蛇、金环蛇、灰鼠蛇等）与伪品蛇胆（鸡胆、青鱼胆等）。该法虽鉴别效果较好且简便，但仅适用于仍保留有显微特征的原料药材和成药。由于胆的内含物随着蛇的生理状态不同而有差异，组织学特征也因切片的取材位置不同而不同，因此增加了鉴别的难度。此外，目前大多数含蛇胆成药不保留蛇胆的显微特征，故此法不宜推广。

三、蛇胆的理化鉴别

蛇胆的主要成分有胆汁酸、胆色素、胆固醇、黏蛋白、无机盐等，通常胆汁酸被认为是其药理作用的主要功效物质。蛇胆胆汁酸主要为牛磺胆酸、牛磺酸鹅去氧胆酸、牛磺去氧胆酸、石胆酸、游离胆酸等，目前多以这些成分为指标对蛇胆汁进行质量控制。

理化鉴别中常用的分析方法有化学分析法和薄层色谱法。蒋三员等《蛇胆质量鉴定的研究》通过比较蛇、鸡、鸭、鱼胆汁的比黏度、钾、钠含量等鉴别了蛇胆。黎源等《鸡胆汁与蛇胆汁中氨基酸和微量元素的对比分析》对比了蛇胆汁和鸡胆汁中的氨基酸及微量元素，发现蛇胆汁与鸡胆汁均含有18种氨基酸，鸡胆汁中除了牛磺酸含量略低于蛇胆汁外，其他氨基酸的种类和含量非常相似;蛇胆汁中微量元素Ca、Mg、Fe、Zn、Cu的含量均略高于鸡胆汁。黄晓文等《眼镜蛇胆伪品的鉴别》通过胆囊外观性状，胆汁的K2Cr2O7沉淀、糠醛-硫酸显色反应以及薄层色谱法（TLC），鉴别了眼镜蛇胆检品，认为该方法简单、专属性强，可作为真伪蛇胆的鉴别方法。植达诗《真伪蛇胆的简易鉴别》用糠醛—硫酸法鉴别了蛇胆及其伪品鸡胆、鸭胆、鱼胆等;钟荣华《蛇胆及其伪品的鉴别》用糠醛—硫酸法成功鉴别了蛇胆、鸡胆、鸭胆和黄鳝胆等，认为该法结果可靠，简便易行，但不能鉴别蛇类种属。薄层层析法由于具备色谱分离特性，因此更适合分析复杂样品。孙方人等《广东眼镜蛇蛇胆的鉴别和质量控制的研究》以牛磺胆酸为对照用薄层层析法分析了眼镜蛇蛇胆样品并见到8个显色斑点;游勇基等《蟒蛇胆的薄层色谱鉴别》及唐元军等《蟒蛇胆及其偽品的鉴别》分别用TLC法鉴别了蟒蛇胆;薛漓《一种新的蛇胆掺假品的鉴别》还用TLC法成功鉴别了蛇胆及特殊伪品——熟地黄提取液。此外，TLC法还被广泛用于蛇胆复方制剂的鉴别研究。万京桦等《蛇胆川贝枇杷膏中蛇胆汁鉴别方法的实验研究》构建了蛇胆川贝枇杷膏中蛇胆汁的TLC法鉴别方法;陈德球《蛇胆川贝液中蛇胆的鉴别研究》用蛇胆汁及牛磺胆酸钠作对照，采用TLC法鉴别蛇胆川贝液中的蛇胆;管玉民《蛇胆川贝液鉴别方法的改进》用TLC法鉴别了蛇胆川贝液处方中的蛇胆汁;王倩等《蛇胆追风丸的薄层色谱鉴别》用TLC法从蛇胆追风丸中成功检测出了蛇胆;蒋伟杰等《蛇胆菠萝蛋白酶肠溶薄膜衣片质量标准研究》用TLC法从蛇胆菠萝蛋白酶肠溶薄膜衣片中鉴别出了蛇胆。综上所述，牛磺胆酸等成分为对照用TLC法可有效鉴别出复方制剂中的蛇胆，但不能区别蛇胆的种属来源。

四、蛇胆的分子生物学鉴别

由于蛇胆保存和制剂加工过程中的处理方法往往破坏了蛇胆的完整性，因此依据性状、显微特征及理化性质进行鉴别有一定困难，分子生物学方法能克服上述问题，呈现更客观的结果。众所周知，物种的多样性是基因多态性的结果，而基因多态性可在分子水平上检测，它比在形态、组织和化学水平上检测更能代表其变异类型的遗传标记。如王义权等《游蛇科（Colubridae）10种蛇的随机扩增多态DNA研究》将分子标记技术运用到蛇类药材的鉴定研究中，对游蛇科10种蛇基因组DNA的多态性进行了分子遗传标记的研究;WANG Yi-quan，ZHOU Kai-ya，XU Luo-shan，《et al. Authentication of Bungarus parvus and its adulterants by DNA molecular method using diagnostic primer》（《.Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》）通过提取金钱白花蛇及其伪品药材和原动物样品的模板DNA，分析其Cytb基因片断鉴别了金钱白花蛇;沈曦等《几种腹蛇12SrRNA和Cytb基因片段序列的初步研究》通过比较12SrRNA和Cytb基因的部分序列鉴别了几种蝮属蛇类;刘向华等《中药材蛇胆的DNA分子标记鉴定研究》从药材蛇胆的胆衣和胆汁、原动物棕黑锦蛇的肌肉和胆汁中提取DNA，经PCR扩增12SrRNA基因片段，鉴别了蛇类药材。分子生物学鉴别方法虽能有效鉴别出蛇类药材的种属来源，目前在蛇类药材的鉴别中应用较广，但由于市售蛇胆样品的复杂性，蛇胆DNA的含量较低，故此法在蛇胆鉴别中的应用较少，具体应用方案还有待于进一步完善。

综上所述，蛇胆的鉴别虽历史悠久，但由于技术方法的制约，目前各种方法均存在一定的缺陷，2010版药典中亦缺乏较为全面的质量控制方法。随着研究手段的不断进步，运用先进的分子生物学手段，采用多种鉴别方法综合验证、多指标综合控制，从而制定更完善的质量标准是今后蛇胆质量控制的必然趋势。