HPLC—DAD同时测定黄芪生脉饮中4种成分含量

陆铖 周盛会 李炜 郑修丽 高庆剑 汤浩

摘要：目的 采用高效液相色谱法建立同时测定黄芪生脉饮中五味子乙素、五味子酯甲、党参炔苷和鲁斯可皂苷元含量的方法。方法 色谱柱：Agilent Eclipse C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温：30 ℃；流动相：乙腈-0.1%冰醋酸水溶液，梯度洗脱；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm。结果 五味子乙素、五味子酯甲、党参炔苷和鲁斯可皂苷元的标准曲线线性关系良好，线性范围分别为0.862 5～21.562 5 μg（r2=0.999 1）、0.737 5～18.437 5 μg（r2=0.999 4）、0.095 2～2.380 0 μg（r2=0.999 6）、0.810 0～20.250 0 μg（r2=0.999 0），平均回收率分别为98.06%、99.61%、97.98%、99.30%，RSD分别为1.64%、2.72%、1.45%、1.25%。结论 该法准确可靠、快速、专属性强、结果稳定、重复性好。

关键词：黄芪生脉饮；五味子乙素；五味子酯甲；党参炔苷；鲁斯可皂苷元；高效液相色谱法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.07.027

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）07-0096-04

Simultaneous Determination of Four Components in Huangqi Shengmai Decoction by HPLC-DAD LU Cheng1，2， ZHOU Sheng-hui1，2， LI Wei2， ZHENG Xiu-li2， GAO Qing-jian1，2， TANG Hao2 （1.School of Pharmacy， Ningxia Medical University， Yinchuan 750000， China；2.Gansu Provincial Hospital， Lanzhou 730000， China）

Abstract：Objective To establish a method for simultaneous determination of contents of schisandrin B， schisantherin A， lobetyolin and ruscogenin in Huangqi Shengmai Decoction with HPLC method. Methods The chromatographic column was an Agilent Eclipse C18 column （4.6 mm × 250 mm， 5 μm） that was maintained at a constant temperature of 30 ℃. The mobile phase was 0.1% acetic acid solution-acetonitrile， with gradient elution. The flow rate was 1.0 mL/min. The detection was at wavelength of 280 nm. Results The standard curves of schisandrin B， schisantherin A， lobetyolin and ruscogenin had good linearity in the ranges of 0.862 5-21.562 5 μg （r2=0.999 1）， 0.737 5-18.437 5μg （r2=0.999 4）， 0.095 2-2.380 0 μg （r2=0.999 6）， and 0.810 0- 20.250 0 μg （r2=0.999 0）， respectively. The average recoveries of the four components were 98.06% （RSD=1.64%）， 99.61% （RSD=2.72%）， 97.98% （RSD=1.45%）， and 99.30% （RSD=1.25%）， respectively. Conclusion This method is accurate， rapid and specific， achieving the stable results with high reproducibility.

Key words：Huangqi Shengmai Decoction；schisandrin B；schisantherin A；lobetyolin；ruscogenin；HPLC

黃芪生脉饮由黄芪、党参、麦冬、五味子、南五味子5味药组成，是由古方生脉散演变而来。生脉散处方源自张元素《医学启源》，具有益气滋阴、养心补肺功效[1]。目前已有大量关于黄芪生脉饮临床应用的文献报道[2-3]。2010年版《中华人民共和国药典》（一部）[4]记载，黄芪甲苷、五味子乙素、五味子酯甲、党参炔苷、鲁斯可皂苷元分别是黄芪、五味子、南五味

通讯作者：汤浩，E-mail：gsyy_th@sina.cn

子、党参和麦冬的主要有效成分。

目前，关于黄芪生脉饮中有效成分的测定多集中于黄芪甲苷[5-6]，尚未见对黄芪生脉饮中其余有效成分同时进行定量分析的文献报道。《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂（第十六册）》仅有对黄芪生脉饮相对密度的测定，而无对该制剂有效成分的定量测定项[7]。因此，本试验采用高效液相色谱法（HPLC）同时测定黄芪生脉饮中五味子乙素、五味子酯甲、党参炔苷和鲁斯可皂苷元的含量，为该制剂质量标准的完善及医院中成药制剂引进的质量测评提供参考。

1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪，包括G1312A二元梯度泵、G1313A自动进样系统、G1315B二极管阵列检测器（DAD）及Agilent LC 3D Rev A.10.02色谱工作站；AB204-N电子分析天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；SK3300LHC超声清洗仪，上海科导有限公司； D-37520型台式高速低温离心机，德国Heraeus公司。

对照品五味子乙素（批号110765-201311）、五味子酯甲（批号111529-200604）、党参炔苷（批号111732-201206）、鲁斯可皂苷元（批号111909- 201204），中国食品药品检定研究院；黄芪生脉饮（浙江新光药业有限公司，批号130802、130815、130824、130904、141024），购自兰州市众友大药房；甲醇（色谱纯，批号20140306），天津市大茂化学试剂厂；乙腈（色谱纯，批号20140510），天津市大茂化学试剂厂；冰醋酸（分析纯，批号20030419），天津市泰兴试剂厂；乙醚（分析纯，批号110105），天津市富宇精细化工有限公司；乙酸乙酯（分析纯，批号910104），天津市化学试剂二厂；水为三蒸水，实验室自制。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取五味子乙素、五味子酯甲、党参炔苷、鲁斯可皂苷元对照品适量，置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1 mL含五味子乙素862.50 μg、五味子酯甲737.50 μg、党参炔苷95.20 μg、鲁斯可皂苷元810.00 μg的混合对照品溶液，即得。

2.2 供试品溶液的制备

精密量取黄芪生脉饮样品0.5 mL，加乙醚2 mL、乙酸乙酯2 mL，13 000 r/min离心10 min，取上清液，置于5 mL容量瓶中，加热蒸干，加甲醇定容至刻度，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.3 阴性对照溶液的制备

按供试品的处方和制法，分别制成不含五味子、南五味子、党参、麦冬的阴性样品，按“2.2”项下方法制备，即得。

2.4 色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse C18柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm）；流动相：乙腈-0.1%冰醋酸水溶液，梯度洗脱条件见表1；柱温：30 ℃；流速：1 mL/min；检测波长：280 nm；进样量：10 μL。对照品及样品色谱图见图1。

表1 流动相梯度洗脱程序

时间 乙腈（%） 0.1%冰醋酸水溶液（%）

0 min 5 95

5 min 7 93

10 min 10 90

20 min 25 75

50 min 60 40

A

B

C

注：A.供试品；B.混合对照品；C.阴性对照；

1.党参炔苷；2.鲁斯可皂苷元；3.五味子乙素；4.五味子酯甲

图1 黄芪生脉饮中4种成分HPLC图

2.5 线性关系考察

分别精密吸取混合对照品溶液1、5、10、15、20、25 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，对照品溶液进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，得回归方程，见表2。结果表明，五味子乙素在0.862 5～21.562 5 μg、五味子酯甲在0.737 5～18.437 5 μg、党参炔苷在0.092 5～2.380 0 μg、鲁斯可皂苷元0.810 0～20.250 0 μg范围内呈良好的线性关系。

表2 黄芪生脉饮4种成分线性关系考察结果

成分 回归方程 r2 线性范围（μg）

五味子乙素 Y=1578.80X-4086.2 0.999 1 0.862 5～21.562 5

五味子酯甲 Y=1152.70X-3415.8 0.999 4 0.737 5～18.437 5

党参炔苷 Y=488.59X-82.370 0.999 6 0.095 2～2.380 0

鲁斯可皂苷元 Y=1172.70X-4007.9 0.999 0 0.810 0～20.250 0

2.6 精密度試验

精密吸取混合对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，在“2.4”项色谱条件下连续进样5次，测定峰面积积分值。结果五味子乙素RSD=1.23%、五味子酯甲RSD=1.29%、党参炔苷RSD=1.87%、鲁斯可皂苷元RSD=1.20%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取同一样品（批号130815），按“2.2”项下方法制得供试品溶液，分别于0、4、8、12、24 h测定。结果显示，供试品溶液中五味子乙素、五味子酯甲、党参炔苷、鲁斯可皂苷元的峰面积RSD分别为1.35%、1.78%、1.46%、1.13%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

取同一样品（批号130815）5份，按“2.2”项下方法制得供试品溶液，在“2.4”项色谱条件下进行测定。结果样品中五味子乙素、五味子酯甲、党参炔苷、鲁斯可皂苷元（n=5）的RSD分别为1.09%、1.78%、1.63%、1.14%。

2.9 加样回收率试验

精密量取2 mL已知含量的五味子乙素、五味子酯甲、党参炔苷、鲁斯可皂苷元样品（批号130815）6份，分别精密加入1 mL不同浓度五味子乙素（215.6、431.3、862.5 μg/mL）、五味子酯甲（184.4、368.8、737.5 μg/mL）、党参炔苷（23.8、47.5、95.2 μg/mL）、鲁斯可皂苷元（101.3、202.5、405.5 μg/mL）对照品溶液，按“2.2”项下方法制备，依法测定，结果见表3。

表3 黄芪生脉饮中4种成分加样回收率试验

成分 原有量

（μg） 加入量

（μg） 测得量

（μg） 回收率

（%） 平均回

收率（%） RSD

（%）

五味子乙素 505.0 215.6 718.9 99.76

505.0 215.6 719.9 99.90

505.0 431.3 898.3 95.94 98.06 1.64

505.0 431.3 904.5 96.61

505.0 862.5 1342.4 98.16

505.0 862.5 1339.7 97.96

五味子酯甲 425.6 184.4 593.7 97.33

425.6 184.4 591.5 96.97

425.6 368.8 787.1 99.09 99.61 2.72

425.6 368.8 781.4 98.37

425.6 737.5 1191.7 102.46

425.6 737.5 1203.9 103.43

党参炔苷 143.7 23.8 165.9 99.04

143.7 23.8 164.0 97.91

143.7 47.5 189.9 99.31 97.98 1.45

143.7 47.5 189.3 98.97

143.7 95.2 231.5 96.90

143.7 95.2 228.7 95.73

鲁斯可皂苷元 811.8 101.3 912.5 99.93

811.8 101.3 911.2 99.79

811.8 202.5 982.4 96.85 99.30 1.25

811.8 202.5 1011.9 99.76

811.8 405.0 1207.6 99.24

811.8 405.0 1219.7 100.24

2.10 样品含量测定

取5批黄芪生脉饮，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别进样，测得峰面积积分值，计算黄芪生脉饮中五味子乙素、五味子醇甲、党参炔苷、鲁斯可皂苷元的质量浓度，结果见表4。

表4 样品含量测定结果（n=5）

批号 五味子乙素 五味子酯甲 党参炔苷 鲁斯可皂苷元

含量（μg/mL） RSD（%） 含量（μg/mL） RSD（%） 含量（μg/mL） RSD（%） 含量（μg/mL） RSD（%）

130802 256.7 1.10 218.6 1.81 71.8 1.86 405.9 1.15

130815 253.4 1.04 211.7 1.52 71.3 1.29 408.7 1.09

130824 249.3 1.43 209.1 1.19 69.9 1.42 406.2 1.29

130904 250.9 1.27 214.7 1.07 71.1 2.03 403.0 1.83

141024 252.2 1.09 212.8 1.11 73.1 1.23 411.7 1.01

3 讨论

本试验采用HPLC同时测定黄芪生脉饮中五味子乙素、五味子酯甲、党参炔苷、鲁斯可皂苷元，方法简便可靠、灵敏性高、专属性强，可为完善该制剂的质量标准提供参考。

本试验分别考察了乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%冰醋酸水溶液、甲醇-0.1%冰醋酸水溶液作为流动相体系，以各待测物基线分离、分离度>1.5为优；同时对乙腈、乙醚、乙酸乙酯、乙腈-乙醚、乙腈-乙酸乙酯、乙醚-乙酸乙酯的样本富集溶剂体系进行优化，测定不同方案下所选指标待测物含量，以所选指标成分测定含量最高为优。最终确定流动相系统为乙腈- 0.1%冰醋酸水溶液，供试品制备溶剂系统为乙醚-乙酸乙酯（1∶1）。

鲁斯可皂苷元为麦冬主要有效成分，但关于鲁斯可皂苷元的含量测定方法多集中于毛细管电泳法[8-9]，采用HPLC对其进行含量测定的报道相对缺乏。本试验所建立的色谱方法可为麦冬中主要成分鲁斯可皂苷元的HPLC含量测定提供简单、有效的检测手段。

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（收稿日期：2015-01-30）

（修回日期：2015-03-07；编辑：陈静）