麝香保心丸对一次性力竭运动大鼠心肌损伤标记物和C反应蛋白的影响

陈金良，刘征，张晶，车鹏程，李海军，李芳，卢凡，程庆强

（1.中国人民解放军第281医院，河北 秦皇岛 066100；2.秦皇岛市第一医院，河北秦皇岛 066101；3.河北联合大学医学院，河北唐山 063000）

研究报告

麝香保心丸对一次性力竭运动大鼠心肌损伤标记物和C反应蛋白的影响

陈金良1*，刘征1，张晶2，车鹏程3，李海军1，李芳1，卢凡1，程庆强1

（1.中国人民解放军第281医院，河北 秦皇岛 066100；2.秦皇岛市第一医院，河北秦皇岛 066101；3.河北联合大学医学院，河北唐山 063000）

目的探讨麝香保心丸对一次性力竭运动大鼠心肌损伤标记物和C反应蛋白的影响。方法选择雄性Wistar大鼠52只，随机分成实验组和对照组，每组26只。两组大鼠每天自由进食饮水相同，实验组大鼠每天麝香保心丸2粒（每粒22.5 mg）分2次灌胃，共两周。两组均接受力竭游泳运动，制成力竭运动动物模型，分别测定和比较两组大鼠血清和心肌组织肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白T（TnT）、B型脑钠肽（BNP）和C反应蛋白（CRP）水平。结果大鼠平均力竭运动游泳时间实验组较对照组明显延长（P＜0.01）。实验组血清和心肌组织CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平均明显低于对照组（P＜0.05）。结论麝香保心丸可显著降低力竭运动大鼠血清和心肌中CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平，能够减轻力竭运动后心肌损伤。

大鼠；力竭运动；麝香保心丸；心肌损伤标记物；C反应蛋白

力竭运动训练可通过引起心肌代谢和心肌细胞通透性异常，导致心肌损伤坏死，从而对心肌产生不利影响［1］。因此，如何防治力竭运动对心肌造成的损伤，保护心肌功能和增强运动能力，成为新的研究热点。本研究通过观察中成药麝香保心丸对一次性力竭游泳运动大鼠心肌损伤标记物和炎症因子的影响，探讨其对心肌损伤的防治作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

选择11～12周龄清洁级雄性Wistar大鼠52只，体重（200±15）g，由河北医科大学实验动物中心提供［SCXK（冀）2003-1-003］，实验在河北联合大学实验动物中心完成［SYXK（冀）2010-0038］。同次实验的各组大鼠均为同窝大鼠，分笼饲养，自由进食饮水，饲养室环境温度（21±4）℃，相对湿度48%～56%，光照时间每天12 h。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组

随机分成对照组和实验组，每组26只。两组大鼠每天自由进食饮水相同，实验组大鼠给予麝香保心丸（上海和黄药业生产，批号140314；每粒22.5 mg）灌胃，每次1粒，每天2次，共两周。两组均接受一次性力竭运动游泳。

1.2.2 动物模型制备

两组大鼠分别在长100 cm、宽50 cm、高50 cm的玻璃游泳槽中游泳，水深40 cm，水温（31±1）℃。正式实验前1 d进行1次适应性游泳运动10 min。后将各组大鼠投入游泳槽中，自入水至游泳力竭的时间即游泳持续时间（短于2 h的大鼠除外）。游泳时尾部负重自身体重2%的负荷，力竭标准按Thomas报道的文献［2］：大鼠游泳动作明显失调，且不能再坚持，沉入水下10 s不能自主上浮。短时间内力竭的大鼠，捞出休息5 min，继续游泳，运动时间不少于2 h。

1.2.3 样本采集

两组动物力竭性游泳后即刻，分离穿刺右颈静脉采血4mL，以3000 r/min离心15min后取上清液ˉ70℃保存备检。然后将大鼠脱颈椎处死，迅速切取心脏，生理盐水洗去心腔内血液，剔除多余脂肪，剪下左心室肌20 mg剪碎，加2 mL生理盐水，放入玻璃匀浆管进行匀浆、离心，取上清液ˉ70℃保存备检。

1.2.4 血清和心肌组织实验指标检测方法

以下列方法检测两组大鼠血清和心肌组织的肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白T（troponin T，TnT）、脑钠肽（brain natriuretic peptide，BNP）和 C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）。CK、CK-MB用免疫抑制法检测，TnT应用酶联免疫法（Cusabio型酶联免疫测定仪），BNP由Triage快速定量监测仪测定，CRP应用电化学发光法（罗氏601测定仪）测定。试剂盒由南京建成生物工程公司提供。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 两组大鼠力竭游泳运动时间

两组大鼠均完成力竭游泳运动，对照组大鼠平均力竭游泳运动时间为（4.16±1.04）h，实验组为（5.26±1.12）h，两组在运动时间方面差异有显著性（P＜0.05）。游泳运动前喂养麝香保心丸的大鼠耐受游泳运动时间相对延长，运动耐力增强。

2.2 两组大鼠血清中CK、CK-M B、TnT、BNP和CRP水平

表1显示，实验组力竭运动心肌损伤各项指标和CRP水平均低于对照组（P均＜0.05），说明麝香保心丸能够有效地减轻力竭运动对大鼠心肌造成的损伤。

表1 对照组和实验组力竭运动后血清CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平（±s，n=26）Tab.1 The changes of serum CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after exhaustive exercise in the rats

表1 对照组和实验组力竭运动后血清CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平（±s，n=26）Tab.1 The changes of serum CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after exhaustive exercise in the rats

注：*P＜0.05，与对照组比较。Note.*P＜0.05，compared with the control group.

2.3 两组大鼠心肌中CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平

表2显示，实验组大鼠在力竭运动后心肌组织中CK等各项指标和CRP的活性均明显低于对照组（P＜0.05，P＜0.05）。由于力竭运动可造成心肌损伤，心肌细胞内这些酶大量释放，致使心肌中酶的活性升高，而应用麝香保心丸后可使心肌细胞内心肌酶和CRP释放减少，进一步说明其可减轻力竭运动对大鼠心肌造成的损伤，对心肌可以起到保护作用。

表2 对照组和实验组力竭运动后心肌组织CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平（±s，n=26）Tab.2 The changes ofmyocardial CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after exhaustive exercise in the rats

表2 对照组和实验组力竭运动后心肌组织CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平（±s，n=26）Tab.2 The changes ofmyocardial CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after exhaustive exercise in the rats

注：*P＜0.05，与对照组比较。Note.*P＜0.05，compared with the control group.

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3 讨论

已有研究［3ˉ5］证明，力竭运动或强负荷军事训练后可导致机体血清CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平增高。动物实验也表明［6，7］，大鼠力竭游泳运动后血CK及CK-MB增高，心肌细胞凋亡增多，血CK及CK-MB与心肌细胞凋亡呈平行的动态变化，可以反映早期心肌细胞凋亡情况。临床上也已应用CK、CK-MB、肌钙蛋白（T和I）H和BNP做为判定心肌损伤的特异性指标，近年来发现CRP与心肌损伤有关［4，5］。因此可以将血CK、CK-MB、TnT、BNP做为心肌损伤标记物和CRP做为间接反应或帮助观察药物防治心肌损伤的效果指标。

本实验结果显示，应用麝香保心丸的大鼠一次性力竭游泳运动后血清和心肌组织中CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP等浓度明显低于对照组的大鼠。就力竭运动引起血清和心肌CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP活性增高的机制而言，可能系力竭运动导致心肌细胞内代谢产物的积累和渗透压增高，激素分泌加强；长时间运动使心肌缺氧，致使心肌细胞能量代谢障碍，导致亚细胞结构对高能磷酸化合物的竞争，使心肌细胞膜的结构变化造成心肌细胞膜通透性损伤性改变，最终出现心肌细胞内酶释放入血液增多［6ˉ8］。许思毛等［9］应用电镜观察了大负荷跑台运动对大鼠心肌细胞膜Na+-K+泵、Ca2+泵与肌质网Ca2+泵活性的影响及其与心肌超微结构变化的关系。结果显示，运动后24 h肌质网Ca2+泵活性显著减低，线粒体和肌原纤维结构明显损伤，肌细胞及肌质网肿胀，说明高强度运动可导致心肌微结构损伤。Smith研究［10］发现，力竭运动后即刻和24 h，心肌由于缺血缺氧致使与心肌损伤的相关炎性因子分泌增多，与本实验中大鼠力竭运动后CRP显著升高意义相似。

本研究中，在力竭游泳运动前喂养麝香保心丸的大鼠，之后血液和心肌组织的酶学标记物和炎性因子CRP明显低于对照组（P均＜0.05），说明麝香保心丸可减低力竭运动大鼠的心肌酶和炎性因子活性。麝香保心丸由人工麝香、人参提取物、肉桂、苏和香、蟾酥、冰片、人工牛黄组成，药理作用是多方面的［11］：①麝香具有强心作用，能够对抗异丙肾上腺素兴奋心脏的作用，通过抑制心肌细胞的自律性使心率减慢，因而减少心肌氧耗；②人参提取物人参茎叶总皂甙对心肌有直接保护作用，并具有保护心肌毛细血管内皮细胞及减轻线粒体损伤的作用；③肉桂有扩张冠脉、降低血管阻力，其成分桂皮醛具有抗血小板药和抗凝血酶作用，因此可促进心肌微循环，保障心肌血供；④动物实验发现苏合香有增强心肌耐缺氧能力的作用，对狗实验性心肌梗塞有减慢心率、增加冠脉血流和降低心肌耗氧作用，对兔、大鼠血小板聚集有显著抑制作用；⑤蟾酥成分蟾毒配基类通过抑制心肌细胞膜上的Na+-K+-ATP酶，使心肌细胞内Na+增高，Ga2+通过Na+-Ca2+交换进入细胞内，从而使心肌收缩力增强；⑥另外两种成分牛黄具有强心和镇静作用；冰片可防止冠脉痉挛，能够减轻缺血所致的心肌损伤。中医认为此组方具有补气、芳香开窍、益气温阳和理气止痛功效，对应西医为扩张冠状动脉改善冠脉供血，增加心输出量；改善缺血心肌的代谢，减慢心率降低心肌耗氧；抑制心肌纤维化，减轻心肌和血管炎性反应［12］；在改善心功能同时，降低血浆BNP浓度。麝香保心丸还可通过抑制纤维蛋白原，有效抑制动脉壁炎症反应，使CRP及P-选择素水平降低，降低冠状动脉的炎症损害进而保护血管内皮功能［13，14］，减少心血管事件发生。许多基础和临床应用研究证明麝香保心丸是安全有效的［15］。

总之，本研究结果进一步表明，麝香保心丸可明显降低大鼠力竭运动时血清和心肌中CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP的水平，对力竭运动时具有防治心肌损伤和保护心脏功能作用。

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Influence of Shexiangbaoxinwan on m yocardial injury markers and C-reactive protein after a single bout of exhaustive exercise in rats

CHEN Jin-liang1，LIU Zheng1，ZHANG Jing2，CHE Peng-cheng3，LIHai-jun1，LIFang1，LU Fan1，CHENG Qing-qiang1
（1.Department of Cardiology，No.281 Hospital of PLA，Qinhuangdao 066100，China；2.Department of Cardiology，People’s Hospital of Qinhuangdao City，Qinhuangdao，Hebei066000；3.Hebei University School of Medicine，Tangshan City，Hebei063000）

ObjectiveTo observe the influence of a Chinese traditionalmedicine，Shexiangbaoxinwan，on myocardial injurymarkers and C-reactive protein in exhaustively exercised rats.M ethodsA total of 52 male 11-12 week old Wistar ratswere divided randomly into two groups：the experimental（n=26）and controlgroups（n=26）.The two groups of rats took food and water freely.The experimental group of rats was given Shexiangbaoxinwan（2 capsules per day）for twoweeks.Following a single boutofexhaustive swimming（≥2 hrs），the serum andmyocardial CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP in both groups were determined and compared.ResultsCompared with the control group，the exhaustive swimming time of the experimental group was significantly prolonged（P＜0.01）.The levels of serum andmyocardial CK，CKMB，TnT，BNP and CRP in the experimental group were significantly lower than those in the control group（P＜0.05 for all）.ConclusionsThe Chinese traditionalmedicine Shexiangbaoxinwan can significantly decrease the levels of rat serum and myocardial CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after a single boutof exhaustive swimming，and car alleviatemyocardial injury.

Chinese medicine，Shexiangbaoxinwan；Rat；Exhaustive swimming；Myocardium injury，markers；C-reactive protein

Q95-33

A

1005-4847（2015）05-0509-04

10.3969/j.issn.1005ˉ4847.2015.05.013

2015-04-13

河北省科学技术发展计划项目（编号：112761169）。

陈金良（1965ˉ），男，主任医师，医学博士。研究方向：冠心病治疗。E-mail：cjl281yy@163.com