Fascin蛋白在乳腺导管上皮内肿瘤及浸润性导管癌中的表达意义

姜 英，常晓燕，陈 杰

(中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院 病理科，北京100730)

乳腺癌是目前妇女最常见的恶性肿瘤之一。全世界每年约有120万妇女患乳腺癌，约50万妇女死于乳腺癌，发病率以每年2%的速度递增。

Fascin 基因编码产物为相对分子质量55 ku、能与F-肌动蛋白结合的细胞骨架蛋白，于20世纪70年代从海胆卵母细胞的胞质中发现[1]，并于20世纪90年代从人类畸胎瘤中克隆，定位于染色体7p22[2]。以往研究发现fascin蛋白在多种上皮来源的肿瘤细胞中有高表达，而在乳腺导管上皮内肿瘤(ductal intraepithelial neoplasia，DIN)中的表达尚无报道，本研究拟探讨fascin蛋白在DIN 及浸润性导管癌中的表达情况。

导管内增生性病变过去分为3 组:普通导管上皮增生(usual ductal hyperplasia，UDH)、导管上皮不典型增生和导管原位癌。在2002年召开的WHO 工作会议上，由WHO 工作组的一些成员提议使用DIN 来取代传统的分类方法。2003年WHO 乳腺肿瘤分类中的DIN 分级为:平坦上皮不典型增生(flat epithelial atypia，FEA，DIN1a)、导管上皮不典型增生(atypical ductal hyperplasia，ADH，DIN1b)、低度导管原位癌(ductal carcinoma in situ，DCIS)为DIN1c，中度导管原位癌为DIN2，高度导管原位癌为DIN3。

1 材料与方法

1.1 材料

30例正常乳腺组织(取自癌旁乳腺组织)、30例普通导管上皮增生(UDH)，30例平坦上皮不典型增生(FEA，DIN1a)、15例导管上皮不典型增生(ADH，DIN1b)、2例低度导管原位癌(DIN1c)、10例中度导管原位癌(DIN2)、18例高度导管原位癌(DIN3)、120例浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma，IDC)石蜡包埋组织来自北京协和医院1999 －2006年手术切除标本。

1.2 方法

4%中性甲醛固定，常规脱水、石蜡包埋，连续切片，厚度4 μm。所用抗体fascin-1 单克隆抗体(克隆号为55K-2)、ER、PR 及HER2(Dako 公司)。免疫组化染色用EnVision 法，使用Dako Cytomation 免疫组化自动染色机进行染色。

1.3 结果判定

胞质内出现棕黄色颗粒为阳性表达，fascin蛋白表达根据阳性肿瘤细胞的百分数分级:＜5 %为(－)5%～25%为(+)，26%～75%为(++)，＞75%为(+++)。以反应性增生的淋巴结为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照，血管内皮细胞作为内对照。

1.4 统计学分析

Fascin表达水平和临床病理因素的相关性用Microsoft Office Excel 2003 进行χ2检验分析。

2 结果

2.1 Fascin蛋白免疫组化检测测结果

在正常乳腺组织的导管上皮、UDH组、FEA(DIN1a)组、ADH(DIN1b)组、低度DCIS(DIN1c)组、中度DCIS(DIN2)组中，fascin蛋白无阳性表达(图1)，在高度DCIS(DIN3)组中阳性表达率为11.1%(2/18)，fascin蛋白表达均为散在(+)(图2，3)，在IDC组中阳性表达率为15%(18/120)(图4，5)，其中淋巴结转移≤3个组和淋巴结转移＞3个的IDC组中分别为11.6 % (11 /95)和28 %(7/25)。6例IDC 原发癌无fascin蛋白表达，而淋巴结中的转移癌fascin蛋白表达(+)，其中2例Bloom-Richardson 分级为Ⅲ级，4例为Ⅱ级，4例原发癌fascin蛋白表达(+)，而淋巴结中的转移癌fascin蛋白表达(++－+++)，这4例Bloom-Richardson 分级均为Ⅲ级，表明淋巴结中的转移癌较原发癌有更强的浸润性。在IDC 中癌组织周边的细胞较中心的细胞有更强的着色。炎性宿主反应中的树突细胞和纤维母细胞有强弱不等的fascin蛋白阳性表达。

2.2 Fascin蛋白表达和临床病理因素的相关性(表1)

图1 UDH组、FEA组、ADH 组HE 及fascin 免疫组织化学检测结果Fig1 The results of HE and immunohistochemistry of fascin in three groups

图2 高级别导管原位癌(DIN3)Fig2 High grade DCIS(DIN3)(×300)

图3 高级别导管原位癌(DIN3)fascin 局灶(+)Fig3 The results of immunohistochemistry of fascin in high grade DCIS(DIN3)fascin focally(+)(×300)

图4 浸润性导管癌Fig4 Invasive ductal carcinoma(×300)

图5 浸润性导管癌fascin 弥漫强(+)Fig5 IDC fascin(+)strongly and diffusely(×300)

表1 Fascin蛋白表达和临床病理因素的相关性Table1 Fascin protein expression correlation with clinicopathological parameters

3 讨论

乳腺癌严重威胁女性健康。DIN 等癌前病变的早期发现有助于提高乳腺癌的治愈率。

fascin蛋白定位于细胞质张力纤维和细胞膜皱褶边缘的丝状伪足、微棘的核心肌动蛋白束中。人类fascin蛋白最初是从宫颈癌HeLa 细胞中纯化出来的，与细胞的运动、癌细胞的转移有密切关系[3]，提示fascin蛋白可能在细胞迁移、细胞黏附以及细胞间信息交流等过程中发挥作用[4]。研究发现fascin蛋白在一些正常上皮细胞中不表达或低表达，在一些上皮来源的肿瘤中常表达上调。

目前，关于fascin蛋白在肿瘤组织细胞中上调表达的机制尚不十分清楚[5]。有研究提示，fascin 基因的蛋白编码产物可能是c-erbB-2 在细胞骨架上的一种效应蛋白[6-7]。在癌细胞中fascin 促进子受CREB 和芳香烃受体(AhR)调控[8]。Rac 通过fascin 与蛋白激酶C 复合物调节细胞迁徙[9]。

在对一系列的肿瘤研究中发现fascin 阳性表达的肿瘤往往有较高的组织学分级或者较高的浸润性。Fascin 可能在肿瘤的浸润及调整细胞生长方面起作用[10]。fascin的表达下降还导致了C-erbB-2和β-catenin 在蛋白水平的下降，fascin蛋白的高表达可能属于早期改变。

以往已经有学者对fascin蛋白在乳腺癌中的表达进行了研究，发现在c-erbB-2 阳性的乳腺癌MDA-MB-435细胞系中fascin mRNA 及蛋白水平均增高[11]。

目前fascin蛋白在DIN 中的表达情况尚未见报道。在本研究中发现在高度DCIS组和IDC组中fascin蛋白表达呈增高趋势，表明高度DCIS(DIN3)组和IDC组中的部分病例瘤细胞浸润能力增加，并且其表达上调与一些临床病理因素如ER阴性、PR阴性、肿瘤分级和淋巴结转移有关。在IDC 中癌组织周边的细胞较中心的细胞有更强的浸润性。淋巴结中的转移癌较原发癌有更强的浸润性。在乳腺癌的发生过程中，fascin蛋白的表达看来是一迟发事件，通常在部分癌中表达，目前靶向治疗是癌症治疗的一个新方法，例如:herceptin 用于HER2 阳性的乳腺癌的治疗。因此以fascin蛋白为靶点也许能为部分乳腺癌的治疗提供新的思路，fascin的高表达也许能作为早期发现临床浸润性的预后指标，尚需对早期阶段的肿瘤进行大规模的研究。

本研究运用免疫组化方法分析了fascin蛋白在乳腺DIN 及乳腺浸润性导管癌中的差异表达，结果说明在乳腺癌的多步发生过程中，fascin蛋白表达可能是一个迟发事件，通常在癌中表达。

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