免疫细胞化学EMA、CEA、CD68、Vimentin组合在胸腹水细胞块病理诊断中的应用研究

陈建华，丁博，陈中，彭晓

(萍乡市湘东区人民医院病理科，江西 萍 乡337016)

胸腹水细胞病理检查是细胞病理学的重要组成部分，由于取组织活检困难，临床希望通过细胞学确诊的愿望十分强烈；但细胞学在确诊恶性肿瘤方面有其固有的局限性，即难以看到肿瘤的侵袭性的生物学行为；而侵袭性是恶性肿瘤区别于良性肿瘤的根本特点，也是诊断的关键所在；因此，细胞学常作为恶性肿瘤的初筛手段，确诊主要依靠组织学。在细胞形态方面，胸腹水的异型间皮细胞、异型组织细胞、退变细胞很容易与肿瘤细胞混淆，只凭细胞涂片进行鉴别十分困难。脱落细胞在胸腹水中培养后形态发生改变，也给诊断增加了难度。可以说，胸腹水细胞学是细胞病理的难点之一。我科通过多年的探索研究，综合运用细胞涂片、细胞块切片、免疫细胞化学、临床与影像资料进行胸腹水细胞病理诊断，提高了诊断准确性与确诊率。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集湘东区医院呼吸内科与消化内科2012年4月至2014年12月所有胸腹水病例共176例，萍矿湘雅医院13例，共189例；其中恶性标本31例，诊断不明病例1例，阴性标本157例。

1.2 设备与材料 血浆凝固法细胞块技术采用上海太阳生物技术有限公司TT试剂，H-E染色采用贝索试剂，免疫细胞化学采用福州迈新生物技术开发有限公司试剂，石蜡切片采用莱卡RM2235切片机。

1.3 方法 取3只试管各加入胸腹水10ml，普通低速离心机2000r/min离心5min，弃去上清液，取1只试管的沉渣涂片做瑞氏染色，1只试管沉渣涂片做H-E染色，1只试管沉渣采用血浆凝固法制成细胞块，然后制成石蜡块，切片做H-E染色，做免疫细胞化学 EMA、CEA、CD68、VIMENTIN 染色；细胞量较少的标本，可采用1只试管多次取样离心，沉渣累加的方法增加细胞量[1]。结合胸腹水物理性状(是否血性)，直接涂片瑞氏染色，直接涂片H-E染色，细胞块石蜡切片H-E染色，细胞块细胞化学EMA、CEA、CD68、VIMENTIN 染色，临床与影像资料，进行综合分析诊断。

2 结果

免疫细胞化学 EMA、CEA、CD68、VIMENTIN组合对鉴别胸腹水细胞来源有很大帮助，尤其是鉴别是否腺上皮来源帮助最大。所有30例腺癌标本的癌细胞有29例EMA阳性表达，1例弱阳性。有20例腺癌标本癌细胞CEA阳性表达，1例弱阳性，9例阴性。30例腺癌标本背景中的组织细胞、间皮细胞CD68、VIMENTIN阳性或弱阳性表达，CEA没有阳性表达，2例表达弱阳性，EMA9例表达散在阳性，但与腺癌细胞团的明显阳性表达有较大区别。157例阴性病例的背景细胞的免疫细胞化学表达情况也做了统计；具体见表1、表2、表3。所有30例腺癌标本均有细胞团和立体结构，细胞块H-E染色可见腺腔或腺泡结构，细胞有不同程度的异型性。

表1 30例腺癌标本腺癌细胞EMA、CEA、CD68、Vimentin表达情况

表2 30例腺癌标本背景细胞(组织细胞、间皮细胞等)EMA、CEA、CD68、Vimentin 表达情况

表3 157例阴性标本背景细胞(组织细胞、间皮细胞等)EMA、CEA、CD68、Vimentin表达情况

3 讨论

胸腹水恶性细胞80%以上为腺癌[2]，我院的统计为93.8%。腺癌细胞直接涂片的镜下形态与异形或退变的间皮细胞不易区分[3]，而异形与退变的间皮细胞在胸腹水标本中很常见，所以两者的鉴别非常重要。另外，异形的组织细胞也容易与腺癌细胞混淆，两者的鉴别也很重要。在传统直接涂片分析的基础上，寻找新的诊断技术很有必要。

免疫细胞化学指标主要用于细胞来源的鉴别，EMA、CEA主要表达于腺癌细胞，CD68主要表达于组织细胞，VIMENTIN主要表达于间皮细胞。

EMA对腺癌的鉴别诊断帮助很大，我们所见到的30例腺癌细胞中，29例呈现腺癌细胞团的阳性表达，与背景细胞形成明显对照，1例为弱阳性；CEA在腺癌细胞的阳性表达率为63.3%，有6.7%的病例弱阳性表达，在间皮细胞与组织细胞没有阳性表达，因此对腺癌确诊很有价值；CD68在组织细胞表达阳性，在腺癌细胞上没有阳性表达，3.3%的病例表达弱阳性；VIMENTIN在间皮细胞表达阳性，在腺癌细胞上没有阳性表达，6.7%的病例表达弱阳性。综合 EMA、CEA、CD68、VIMENTIN 四项指标与镜下构形基本可以将腺癌细胞与间皮细胞、组织细胞区分出来。

在观察分析免疫细胞化学指标表达时，要将肿瘤细胞与背景细胞分开进行分析，不可将背景细胞的表达误认为肿瘤细胞的表达。背景细胞一般包括间皮细胞、组织细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞等。

腺上皮细胞的良恶性可以结合腺管与细胞的异型程度，脱落细胞团数量，腺性立体结构等进行鉴别。下列指标高度提示腺癌：具有细胞内黏液的异型细胞团，核仁明显的异型细胞团，EMA强阳性的异型细胞团，CEA阳性的异型细胞团。细胞块切片可见腺腔或腺泡结构也提示腺癌，但应与间皮增生、间皮瘤的假腺样结构区别。间皮细胞在胸水中常出现印戒细胞样形态，不要误诊为印戒细胞癌。

细胞团形态推论原有组织结构[4]，血性胸腹水，坏死背景[5]，临床表现，影像学资料均有助于肿瘤的良恶性鉴别。事实上，胸腹水中95%以上的腺上皮细胞为恶性，良性的腺瘤与乳头状增生不易形成胸腹水；在胸水中良性腺上皮更为罕见。在腹水、腹腔冲洗液中见到良性腺上皮的机会比胸水多一些。据熊闽春等报道,胸水染色体与腺苷脱氨酶检验对良恶性积液鉴别有一定诊断价值 。《阿克曼外科病理学》认为CEA、LEUM1、B72.3间皮阴性，腺癌阳性，可互为排除[7]；钙网膜蛋白Calretinin被认为是间皮细胞的特异性较好的标记物。但根据我科的实践，钙网膜蛋白与LEUM1在鉴别间皮与腺癌上并不好用。武忠弼、杨光华主编的《中华外科病理学》对间皮标记物的认识与《阿克曼外科病理学》有很大程度的相同[8]。标记物Napsin-A是很好的肺腺癌及其他恶性肿瘤的标记物[9-13]，我们进一步的工作准备应用。

间皮细胞的良恶性鉴别有时非常困难，恶性间皮瘤的确诊大多需要结合临床资料、影像资料、组织病检综合诊断。胸腹水中见大量桑椹样球状细胞团高度提示恶性间皮瘤。王永才教授对胸腹水形态学所作的研究值得借鉴[14]。

陈杰教授主编的 《临床病理科诊断常规》认为，电镜在间皮瘤与转移癌的鉴别诊断中起着至关重要的作用，主要是间皮瘤细胞顶部表面的微绒毛较腺癌更细长[15]。

除最为常见的腺癌以外，胸腹水中的其它恶性肿瘤种类很多，包括小细胞癌、淋巴瘤、鳞癌、间皮瘤等，其细胞形态与免疫细胞化学表达各不相同，我们将在以后的工作中进行深入研究。

[1]陈建华.血浆凝固法胸腹水细胞块技术的临床应用[J].实验与检验医学,2012,30(4):412.

[2]熊立凡.临床检验基础[M].第3版.北京:人民卫生出版社,1989:325.

[3]刘复生,马正中.中国肿瘤病理学分类[M].北京：科学技术文献出版社,2001:628.

[4]傅新文.头颈部病变临床细胞学[M].南昌:江西科技出版社,2004:81.

陈建华从 例宫颈液基细胞检查分析涂片背景的诊断价值[J].实验与检验医学,2008,26(6):709.

[6]熊闽春.胸水染色体与腺苷脱氨酶联合细胞学检测对良恶性胸腔积液鉴别诊断价值的探讨 [J].实验与检验医学,2014,32(5):573-574.

[7]Rosai J.阿克曼外科病理学[M].第8版.沈阳：辽宁教育出版社，1999：341.

[8]武忠弼,杨光华.中华外科病理学[M].北京:人民卫生出版社,2002：2507-2512.

[9]Johnson H,Cohen C,Fatima N,et al.Thyroid transcription factor 1 and napsin a double stain:utilizing different vendor antibodies for diagnosing lung adenocarcinoma.[J].Acta Cytol,2012,56(6):596-602.

[10]Agackiran Y,Ozcan A,Akyurek N,et al.Desmoglein-3 and Napsin A double stain,a useful immunohistochemical marker for differentiation of lung squamous cell carcinoma and adenocarcinoma from other subtypes[J].Appl Immunohistiochem Mol Morphol,2012,20(4):350-355.

[11]Turner BM,Cagle PT,Sainz IM,et al.NapsinA,a new marker for lung adenocarcinoma,is complementary and more sensitive and specific than thyroid transcription factor 1 in the differential diagnosis of primary pulmonary carcinoma:evaluation of 1 674 cases by tissuemicroarray[J].Arch Pathol Lab Med,2012,136(2):163-171.

[12]Warth A,Muley T,Herpel E,et al.Large-scale comparative analyses of immunomarkers for diagnostic subtyping of non-small-cell lung cancer biopsies[J].Histopathology,2012,61(6):1017-1025.

[13]Liu L,Cohen C,Siddiqui MT,et al.Thyroid transcription factor 1 and napsin a double staining in lung adenocarcinoma in pleural fluid[J].Acta Cytol,2012,56(4):425-430.

[14]王永才.针吸脱落细胞诊断学图谱[M].北京:人民军医出版社,2003:557-594.

[15]陈杰.临床病理科诊断常规[M].北京：中国医药科技出版社,2013:104.