血浆循环microRNA检测及其与冠心病关联性探讨

谭文亮 罗进 阳军 刘震 罗义

血浆循环microRNA检测及其与冠心病关联性探讨

谭文亮 罗进 阳军 刘震 罗义

目的 探究血浆循环微小RNA(microRNA)在冠心病患者外周血中的表达水平以及临床意义。方法 60例冠心病患者为观察组, 另选取同期行体检的60例健康人群作为对照组, 比较两组患者血浆中microRNA的表达水平, 并对其差异进行分析。结果 冠心病患者外周血中miRNA-130a、miRNA-126与miRNA-222的表达水平与正常健康人群相比, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论 通过测定冠心病患者外周血中miRNA-126与miRNA-222的表达水平能初步确诊患者的病情, 同时还能进一步测定冠状动脉的狭窄情况。

冠心病；血浆循环；微小RNA；关联

microRNA能抑制蛋白质的翻译过程, 或是直接将蛋白质降解, 并在转录后台中对蛋白质的表达进行调控。血浆中的microRNA由于稳定性较高, 比较容易测得, 同时血浆中的microRNA具有一定的组织特异性, 有望成为一种新型的生物学标志物, 对心血管疾病、肌肉损伤、肿瘤及炎症的诊断具有一定的辅助作用。现有研究发现［1］, microRNA尤其是内皮特异性microRNA对于血管内皮损伤修复调控以及血管新生调控具有重要的作用。本文为探究microRNA在冠心病患者中的表达及意义, 对120例冠心病患者进行了调查, 旨在为今后的microRNA研究提供有力的依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2014年1月～2014年8月收治的经冠状动脉造影检查确诊的冠心病患者60例为观察组, 另选取同期行体检的60例健康人群作为对照组。对照组男32例, 女28例；年龄24～52岁, 平均年龄(29.2±7.8)岁；经冠状动脉造影检查排除冠心病。观察组男35例, 女25例, 年龄23～54岁, 平均年龄(30.4±7.5)岁。排除先天性心脏病患者, 急性心包炎患者, 急性心肌炎患者, 结缔组织疾病患者,肺动脉栓塞患者, 自身免疫性疾病患者, 严重肝肾功能不全患者, 恶性肿瘤患者, 急性感染患者, 脑血管疾病患者。观察组患者行冠状动脉造影检查结果提示：前降支、回旋支、左主干、右冠状动脉及其分支的血管直径缩小＞50%。两组研究对象在性别、年龄等一般资料方面比较差异无统计学意义(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 microRNA检测方法 所有研究对象均于检测前禁食8 h, 并于清晨入院抽取6 ml外周血, 将其置入EDTA抗凝管内,并离心10 min, 将上清液取1 ml继续离心10 min, 并将500 μl上清液取出置入新的离心管内。按照Trizol LS试剂的操作说明对各个样本的RNA进行抽取, 并将其置于-80℃内进行集中保存, 行逆转录。使用TaqManmicroRNA Reverse Transcription kit(taqmanmicrorna反转录试剂盒)并按照操作说明在各个样本中提取20 ng总RNA进行逆转录。将TaqMan microRNAssays：miRNA-130a(000454)、miRNA-126(002228)、miRNA-222(002276)作为引物, 将RNU6B(001093)作为内参。在各个样本中提取2 μl转录物, 按照TaqMan universal Master MixⅡ, no UNG(国产TaqMan探针配套的荧光定量预

混液)操作说明使用ABI 7500 PCR仪器对TaqMan探针继续拧定量荧光聚合链反应以及PCR双重特异引物扩增技术检测miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-222的Ct值, 同时将RNU6B作为内参。

1.3 统计学方法 本次研究数据采用SPSS14.0统计学软件进行数据处理。计量资料用均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验；计数资料用率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

两组研究对象miRNA检测结果比较, 差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 两组对象miRNA检测结果比较( x-±s)

3 讨论

动脉粥样硬化属于慢性进行性的炎性疾病, 造成动脉粥样硬化的始动因素是血管内皮损伤, 所以目前临床对血管内皮损伤修复的关联基因进行了大量的研究。既往研究指出［2］,内皮特异性microRNA在整个血管新生的过程中起到重要的调控作用, 并分为促进血管新生以及抑制血管新生两种类型。大量研究结果指出miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-222在人体的内皮细胞内高度表达, 同时具有明显的特异性［2-4］。国外学者［5］发现miRNA-126在炎症因子的刺激下能抑制血管细胞粘附因子-1的表达, 同时能调节炎症因子的迁移, 促进毛细血管形成网络并使其存活。

有研究指出［6］miRNA-126在心肌再灌注或是缺血情况下诱导的心生血管中具有明显的促进作用。miRNA-130a能靶向作用在HOXA5与GAX上, 由此达到促进内皮细胞迁移与增殖的目的。miRNA-221或miRNA-222还能靶向作用于血管内皮细胞上的c-kit与eNOS, 以此达到改变血管通透性的目的, 同时还能抑制细胞迁移与增殖。降低人脐静脉内皮细胞上的miRNA-221或miRNA-222表达, 能有效降低细胞的增殖。

本次研究发现, 冠心病患者外周血中的miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-222表达水平与健康成年人表达水平有明显差异, 同时其表达水平与冠状动脉的狭窄程度具有一定的关系。所以通过检测冠心病患者外周血中的miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-222表达水平能间接的反映出患者冠状动脉的狭窄程度以及内皮损伤的严重性。让microRNA有望成为新型的心血管疾病诊断标准以及靶向治疗的生物学标志物。

［1］ 聂晓敏, 苏利霄, 周雅婧, 等.冠心病患者血浆微小RNA-221和微小RNA-222与侧支循环形成的相关性研究.中国医药, 2014, 9(6):778-782.

［2］ 张佳菊, 王莉娜, 冯毅, 等.微小RNA-1靶基因多态性与早发冠心病发生风险的关联研究.中华心血管病杂志, 2012, 40(5): 386-391.

［3］ 李凝诗, 杨丽霞, 郭瑞威, 等.冠心病患者外周血单个核细胞中microRNA-155及146a的表达水平.西南国防医药, 2014, 24(4):380-382.

［4］ 石晓凤, 韦小未, 朱建兵, 等.microRNA 与冠状动脉粥样硬化性心脏病的相关性研究.中华临床医师杂志(电子版), 2013, 11(24):11140-11143.

［5］ Marraccini P, Bianchi M, Bottoni A, et al.Prevalence of thyroid dysfunction and effect of contrast medium on thyroid metabolism in cardiac patients undergoing coronary angiography.Acta Radiologica, 2013, 54(1):42-47.

［6］ 周娜, 梁军, 腾飞, 等.糖代谢异常对冠心病相关血清微小RNA表达的影响.中华老年心脑血管病杂志, 2013, 15(1):14-17.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.10.033

2014-09-05］

510180 广州市第一人民医院心血管内科