四逆汤加味对高脂血症小鼠降血脂作用研究*

贾媛媛，培春生，常锐碧，孟庆婷，殷 红，代 蓉△

(1.云南中医学院，云南 昆明 650500；2.云南省迪庆州人民医院，云南 香格里拉 674400)

四逆汤加味对高脂血症小鼠降血脂作用研究*

贾媛媛1，培春生2，常锐碧1，孟庆婷1，殷 红1，代 蓉1△

(1.云南中医学院，云南 昆明 650500；2.云南省迪庆州人民医院，云南 香格里拉 674400)

目的 研究四逆汤加味对蛋黄乳致小鼠高脂血症总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的影响。方法 健康昆明种小鼠60只，随机分为5组：正常对照组、模型组、非诺贝特阳性组(0.2 g/kg)、四逆汤加味高剂量组、四逆汤加味低剂量组。除正常组、模型组灌胃给予相同体积蒸馏水外，其余组灌胃给予相应药物。腹腔注射蛋黄乳剂复制小鼠高脂血症模型，观察小鼠血清TC、Tg，HDL-C、LDL-C水平变化。结果 与模型组比较，四逆汤加味高剂量组能显著降低小鼠血清TC、Tg，并升高HDL-C水平。结论 四逆汤加味高剂量组对高脂血症模型小鼠具有一定的降血脂作用。

四逆汤加味；高脂血症；降血脂

高脂血症(HyperliPidemia，HL)即脂质代谢紊乱，是指TC、TG水平过高，LDL-C水平过高或HDL-C水平过低[1]。高脂血症是脑卒中、冠心病、心肌梗死等独立而重要的危险因素。脂类物质沉积于血管壁内膜，逐渐形成小的斑块，其直接损害是加速全身动脉粥样硬化。斑块表面逐渐纤维化并坏变脱落，形成粥样硬化溃疡，随着这一过程的发展，脂质不断沉积，多种炎性细胞逐渐浸润，慢慢演变为不稳定斑块[2]。以不稳定斑块的裂缝、糜烂或破裂为基础形成血栓，最终导致严重心脑血管损害如脑卒中、冠心病、心肌梗死等[3]。

中医将高血脂归属于“眩晕”、“胸痹”、“中风”、“痰浊”、“血疲”等症范畴[4]。高脂血症的发生与脾、肾、肝等脏腑功能失常关系密切。素体脾气不足，运化无力，湿浊内生，阻遏经络；肾气受损，气不化津，则清从浊化，或水不涵木，木不疏土，致脾胃虚弱，湿浊内生；肝气郁结，肝阳上亢，木旺克土，脾胃功能受损，运化失司，湿浊化痰、蕴热，使水谷精微不能正常输布而发病。云南迪庆州平均海拔3380 m，高寒缺氧，易致气虚、阳虚，气虚则行血无力，因虚致瘀[5]；高原多寒冷，易损脾肾阳气，阳气亏虚，运化无力，湿浊内生，加上居民嗜食肥甘、醇酒乳酪，易化湿为痰蕴热，痰瘀互结；因此，该地区高脂血症的发生多是在脏腑气血亏虚基础上，嗜食肥甘，天气寒冷等形成正虚邪实证，尤以脾肾亏虚，痰瘀互结型高脂血症为主[6]。该方针对高原地区高脂血症发生的特点，在四逆汤基础上加入道地药材化裁而来，方中附子、干姜、炙甘草、上肉桂、吴茱萸以温补肝肾；茯苓、白术以健脾祛湿益气；当归、生水蛭加道地药材滇三七、红景天、藏红花以活血化瘀，临床用于治疗高原地区脾肾亏虚，痰瘀互结型高脂血症取得了较好的效果。为进一步开发利用本方提供科学的实验数据，笔者针对该方的主治证，以蛋黄乳复制急性高脂血症模型为研究对象，拟探讨四逆汤加味对该模型血脂的影响。

1 实验材料

1.1 药物 方剂组成：附片15 g，干姜30 g，炙甘草10 g，上肉桂6 g，茯苓30 g，白术20 g，吴茱萸10 g，当归15 g，生水蛭10 g，滇三七10 g，红景天15 g，藏红花10 g，全方具有温补肝肾、健脾祛湿、活血化瘀之功效。

1.2 药物制备 方剂煎煮方法：先取附片置一煎煮容器内，加相当于附片量5～7倍的冷水浸泡1 h以上，文火煮沸30 min左右，煎至入口无麻感为度[7]；取其他中药饮片置另一煎煮容器内，加相当于药材量5～7倍的冷水浸泡1 h，刚煮沸时与煎好的附子汤合并，再煎至30 min，过滤。药渣加3～5倍量水继续煎煮，煮沸20 min，过滤。合并2次滤液，于水浴上浓缩备用。人临床用量：92 g/人/d，根据临床用量将该方剂量设置为等效量即为低剂量组。4倍等效量为高剂量组。置于4℃冰箱中冷藏保存备用，临用前按剂量现配至所需浓度。

非诺贝特胶囊：参考文献剂量[8]，经预试验，确定实验时给药剂量为200 mg/kg，给药体积按0.2 mL/10 g，用蒸馏水配制成浓度为10 mg/mL的溶液，在给药前摇匀。

蛋黄乳溶液的制备：取新鲜鸡蛋，除去蛋清，用消毒生理盐水搅拌混匀，配成75%的蛋黄乳液备用[9]。

1.3 动物 健康清洁级昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，合格证号：SCXK(川)2008-24，合格批号：004345。饲养于动物房(清洁级)，温度18～24℃，相对湿度60%～80%，全价颗粒饲料来源于云南中医学院药理教研室动物实验中心。

1.4 试剂 非诺贝特胶囊：法国利博福尼制药公司，批号：21265；新鲜鸡蛋黄；氯化钠注射液：昆明南疆制药有限公司，批号：A09090191；总胆固醇(TC)酶法测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司)，批号：141701；甘油三酯(TG)酶法测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司)，批号：146701；低密度脂蛋白测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司)，批号：140561；高密度脂蛋白测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司)，批号：140551。

1.5 实验仪器 Infinite M200 PRO 酶标仪：瑞士Tecan公司；分析天平(型号：AL104METTLER TOLEDO，Switzerland，0.0001 g)；高速低温离心机(CF16 RXⅡseries，HITACHI公司)；电动玻璃匀浆机(DY89-Ⅱ型，宁波新芝生物科技股份有限公司)；数字恒温水浴锅(HH-S28S，金坛市大地自动化一起厂)。

2 实验方法

2.1 分组 取60只昆明种小鼠，雌雄各半，体重在18～22 g范围内。随机分为5组，每组12只，分别为正常对照组、高脂模型组、阳性对照组、四逆汤加味高剂量组、低剂量组。

2.2 造模及给药方法[10～11]四逆汤加味高、低剂量组及阳性对照组按0.2 mL/10 g体重灌胃(i.g)给药，正常对照组和模型组给予等体积蒸馏水。1次/d，连续用药7d，于第7d用药后禁食，但不禁水。末次用药2 h后，除对照组腹腔注射等体积生理盐水外，其余各组均腹腔注射75%蛋黄乳液0.5 mL/只，复制实验性高脂血症。注射16 h后，摘取眼球取血，离心10 min分离血清(4500 r/min)，按酶联法检测各组小鼠血清TC、TG含量。

2.3 检测方法 按照总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白试剂盒说明书操作，测定血清TC、Tg，LDL-C和HDL-C的含量。

3 实验结果

不同剂量四逆汤加味对蛋黄乳致高脂血症小鼠血脂水平的影响，分别测定各组实验小鼠血清中的TC、Tg，HDL-C、LDL-C，实验与分析结果见表1。

表1 四逆汤加味高剂量、低剂量对小鼠血脂的影响±s)

注：与空白组比较，△△△P<0.001，△△P<0.01；与模型组比较，***P<0.001，**P<0.01，*P<0.05；四逆汤加味高、低剂量组简写为四高组、四低组。

实验结果显示，高脂模型组小鼠血清的TC、Tg，LDL-C的水平与空白组比较显著升高(P<0.001)，HDL-C 水平与空白组比较显著降低(P<0.01)，表明小鼠高脂模型建立成功。

由表1可见：与模型组相比，四逆汤加味高剂量组，对TC、TG的降低及对HDL-C的升高有显著统计学意义(P<0.01)；四逆汤加味低剂量组对TC、TG的降低有一定的趋势，但与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05)；四逆汤加味高、低剂量组对LDL-C的降低无统计学意义(P>0.05)。说明四逆汤加味高剂量组在降TC、TG及升高HDL-C水平方面具有一定的作用。

4 讨论

本方针对脾肾亏虚、痰瘀互结型高脂血症主要从固本和泻浊两个方面治疗[12]。以补虚泻实为治则，结合高原地区饮食气候等特点因地制宜，通过调整脏腑阴阳气血平衡，减少浊脂产生，并清除痰浊、瘀血，以达到调节血脂的作用[13]。实验结果表明：四逆汤加味高剂量组灌胃7 d后，能显著降低实验小鼠血清TC、Tg，并升高HDL-C水平。TC、TG 是血管粥样斑块构成的物质，异常增高的TC、TG和改变凝血系统和纤溶系统的各种因子促进血栓形成，并加快AS的发展；LDL是致AS的首要脂蛋白，LDL可进入血管内壁而促使TC沉积。研究表明：冠心病(CAD)的危险性、死亡率随TC的升高而增加，特别是与LDL-C水平呈明显正相关[14]。HDL-C作为胆固醇的接受体，可将胆固醇从周围组织中转运到肝脏进行再循环或以胆酸的形式排泄，这一过程称为胆固醇逆转运(RCT)[15]，RCT可以促进外周组织移除胆固醇，防止动脉粥样硬化发生，被认为是抗动脉粥样硬化因子。因此，降低TC、Tg，并升高HDL-C水平，可减少脂质在血管壁的沉积，降低血浆和血管壁中的胆固醇水平，防止动脉粥样硬化的发生。临床研究表明：贝特类药物或烟酸是目前主要用于升高HDL-C水平的药物，但这些药物的安全性及升高HDL-C的水平十分有限[16]。四逆汤加味能显著降低模型小鼠血清TC、Tg，并升高HDL-C水平，为临床应用温补肝肾、健脾益气、活血化瘀法调节高海拔地区高血脂患者提供新的治疗思路。四逆汤加味高剂量组对高脂血症模型小鼠有一定的调节血脂作用。

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(1)迪庆州科技计划基金项目；(2)云南白药、云南中医学院中医药教育创新基金项目(NO：YB2014J02)；(3)云南省教育厅科学研究基金项目(NO：2014Z120)

殷红(1986-)，女，河南省周口市，研究生，研究方向：中医治法与中药药效关系的研究

△通信作者：代蓉，E-mail：1647029626@qq.com

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