广南铁皮石斛化学成分提取方法研究

马小双 李程程

摘要采用水浴回流、索氏、超声3种不同方式及甲醇、乙醇、氯仿等不同溶剂对广南铁皮石斛化学成分进行提取，应用薄层色谱确定提取效果。结果表明，铁皮石斛是以氯仿为溶剂、超声 2 h提取效果最好，并确定环己烷-丙酮（6∶4）系统为分离①索氏甲醇提取、②索氏乙醇提取、③索氏氯仿提取、④水浴回流甲醇提取4 h、⑤水浴回流乙醇提取4 h、⑥水浴回流氯仿提取4 h、⑦超声甲醇提取2 h、⑧超声乙醇提取2 h、⑨超声氯仿提取2 h这些样品液的化学成分的最佳展开剂。

关键词广南铁皮石斛；化学成分；提取方法；薄层色谱

中图分类号S567文献标识码

A文章编号0517-6611（2015）29-031-01

石斛为常用贵重药材，我国共有76种石斛属植物，其中30多种作药用，它具有滋阴清热、益胃生津、润肺止咳等功效，目前石斛药材主要采自于安徽、上海、四川、贵州、云南。石斛在云南一带广泛种植，仅文山州收载记录了18种石斛属植物，而广南铁皮石斛是云南文山特有石斛品种，栽种范围广泛。广南县是文山州开展铁皮石斛人工种植最早的地区，已有20多年的种植历史。

广南铁皮石斛作为一种药食同源的中草药，对广南铁皮石斛化学成分的提取进行研究具有一定的实际意义。

笔者在此对人工种植广南铁皮石斛采用不同的提取方式和不同的提取试剂对其化学成分进行提取，并利用薄层色谱对提取效果进行确定。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验仪器。

高效薄层层析硅胶G板（烟台化工研究院）、超声波振荡器（文山三七研究院超声仪器）、索氏提取仪、恒温水浴锅、电热套、粉碎机、烘箱、电炉。

1.1.2试验试剂。甲醇、甲醇、乙醇、氯仿、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、乙醚、硫酸（分析纯）。

1.1.3试验材料。供试材料为新鲜采摘人工种植广南铁皮石斛组， 文山药材市场购买。

1.2方法

1.2.1材料制备。样品于50 ℃烘箱内干燥后，经粉碎机粉碎成粉放于密封袋中备用。

1.2.2供试样品液的制备。

分别采用索氏提取法、水浴回流提取法、超声提取法3种提取方法制备样品液。供试样品液共有9种，分别标号为①索氏甲醇提取、②索氏乙醇提取、③索氏氯仿提取、④水浴回流甲醇提取4 h、⑤水浴回流乙醇提取4 h、⑥水浴回流氯仿提取4 h、⑦超声甲醇提取2 h、⑧超声乙醇提取2 h、⑨超声氯仿提取2 h。

1.2.2.1索氏提取法。分别精密称取1 g铁皮石斛粉末3份，用纱布包裹置于索氏提取器中。分别取100%甲醇、100%乙醇、100%氯仿各50 ml于烧瓶中，在150 ℃的条件下回流提取至无色，过滤。提取液置于水浴上浓缩蒸干。分别取少量甲醇（色谱纯）溶解，并分别转移至10 ml容量瓶中定容，摇匀。

1.2.2.2水浴回流提取法。分别精密称取1 g铁皮石斛粉末3份，用纱布包裹置于圆底烧瓶中，分别取100%甲醇、100%乙醇、100%氯仿各50 ml于烧瓶中，在85 ℃的条件下水浴回流提取4 h，过滤，浓缩蒸干。分别取少量甲醇（色谱纯）溶解，并分别转移至10 ml容量瓶中定容，摇匀。

1.2.2.3超声提取法。分别精密称取1 g铁皮石斛粉末3份，用纱布包裹置于具塞锥形瓶中，分别取100%甲醇、100%乙醇、100%氯仿各50 ml于塞锥形瓶中，常温静置2 h，超声提取2 h，过滤。提取液转移至烧瓶中置于水浴上浓缩蒸干。分别取少量甲醇（色谱纯）溶解，并分别转移至10 ml容量瓶中定容，摇匀。

1.2.3薄层色谱鉴别。

1.2.3.1点样。

选用高效薄层层析硅胶G板，取“1.2.2”项下制备的各种样品液，手动点样，点样量为毛细管点3次，晾干备用。

1.2.3.2展开及显色。配制10%浓硫酸乙醇溶液为显色剂。分别配制己烷-丙酮-乙酸乙酯 （2∶1∶1）、环己烷-乙醚（1∶1）、环己烷-乙酸乙酯（6∶4）、环己烷-丙酮（6∶4）、氯仿-甲醇（10∶0.8）、氯仿-乙酸乙酯（1∶1）、环己烷-丙酮（7∶3）、氯仿-甲醇（10∶0.5）、氯仿-乙醇-乙酸乙酯（10∶10∶

0.5）、环己烷-丙酮-乙酸乙酯（2∶2∶1）、氯仿-乙酸乙酯-丙酮（10∶0.5∶0.5）、环己烷-氯仿-乙酸乙酯（2∶3∶3）12种溶剂作为展开系统对供试样品液进行薄层检测。 将点好樣的薄层板分别放入12种展开剂系统中进行样品化学成分分离，当溶剂至距薄层板上端边缘3 cm时取出，平铺晾干；然后将薄层板浸于显色剂中10 s左右取出，晾干；再将晾干的薄层板置于电炉上烘烤至显色。

2结果与分析

2.1不同提取溶剂对铁皮石斛化学成分提取效果的影响采用不同提取溶剂对铁皮石斛化学成分进行提取，结果发现乙醇的提取效果最差，甲醇提取效果较乙醇稍好，而氯仿的提取效率较高，因此以氯仿为提取溶剂较为合适，能较大程度提取出较多的化学成分。

2.2不同提取方式与提取时间对铁皮石斛化学成分提取效果的影响分析不同提取方式、不同提取时间的铁皮石斛化

学成分发现，水浴回流提取的效果不太理想，而超声提取和

索氏提取的效率较高，提取时间以超声提取2 h的效果较好，且提取时间较短。因此，以超声提取2 h的效果较好。

2.3薄层色谱鉴别结果分析

将12种展开剂展开的薄层色谱板进行对比分析，结果发现环己烷-丙酮（6∶4）系统将①～⑨号样品液的化学成分分离效果较好（图1）。从图1可以看出，④号样品和⑨号样品的斑点与其他几号样品的斑点相比较明显。由此可见，在①～⑨号样品液提取方法中，水浴回流甲醇提取4 h（④）与超声氯仿提取2 h（⑨）对铁皮石斛化学成分提取效果较好。

3结论

该研究首次探究了人工种植广南铁皮石斛不同提取方式、提取时间及提取溶剂对铁皮石斛化学成分的影响， 结果表明， 以氯仿为溶剂、超声提取 2 h的效果最好， 可将铁皮石斛的化学成分尽可能提取出来，该研究结果与前人采用的提取方式不一致[3-5]， 这可能与药材品种和产地不同有关。另外该研究也对薄层色谱分离石斛化学成分的展开剂系统进行考察，最终确定环己烷-丙酮（6∶4）系统为分离①索氏甲醇提取、②索氏乙醇提取、③索氏氯仿提取、④水浴回流甲醇提取4 h、⑤水浴回流乙醇提取4 h、⑥水浴回流氯仿提取4 h、⑦超声甲醇提取2 h、⑧超声乙醇提取2 h、⑨超声氯仿提取2 h这些样品液的化学成分的最佳展开剂。

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