垫江丹皮质量影响因素分析

章文伟，谭秋生，任星宇，申明亮，李 玲，罗 敏，邓才富，罗 舜

(重庆市药物种植研究所，重庆 408435)



垫江丹皮质量影响因素分析

章文伟，谭秋生，任星宇，申明亮，李 玲，罗 敏，邓才富*，罗 舜

(重庆市药物种植研究所，重庆 408435)

目的：分析垫江丹皮乙醇浸出物、丹皮酚和芍药苷含量的影响因素，为垫江丹皮的质量控制提供参考依据。方法：采用2010版《中国药典》一部“牡丹皮”标准项下规定方法测定稀乙醇浸出物含量，采用HPLC方法测定丹皮酚、芍药苷含量。结果：所有垫江丹皮样品均符合《中国药典》2010版对丹皮的质量标准要求。栽培品种、生长土壤类型、采收时间均会影响垫江丹皮的内在质量。结论：白花单瓣品种的乙醇浸出物、芍药苷含量在三种品种中最高，且其丹皮酚含量也较高。矿子黄泥中出产的丹皮乙醇浸出物和芍药苷含量均最高，但其丹皮酚含量却最低。9月初采收的丹皮乙醇浸出物、丹皮酚、芍药苷含量均较高。传统生产于9月上旬采挖丹皮暗合了科学道理。

垫江；丹皮；质量；影响因素

牡丹(PaenoniasuffruticosaAndr.)别名丹皮，为毛莨科落叶小灌木，以根皮供药用[1]。牡丹能清血热、散瘀，治痛经、衄血、潮热、热病发斑、发疹、吐血、痈肿。现代医学证明其有抗菌、催眠、镇静、降压等功效，属于常用中药，《本草纲目》《中华药典》对其均有记载[2]。重庆垫江牡丹栽培历史悠久，垫江是原川丹皮的两大产地(灌县、垫江)之一。垫江所产牡丹皮具有根粗、肉厚、粉质足、香味浓的特点，深受医药界和消费者的好评，垫江丹皮由于其质优和独有特点而习称为垫丹皮。垫丹皮广泛分布于明月山内槽地带海拔450～850m之间的石骨子土、矿子黄泥土和大土泥中，以垫江境内的太平、澄溪、新民、桂溪、沙坪和长寿境内的海棠、云台等乡镇分布较为集中[3]。

近年来围绕垫丹皮开展了丹皮酚含量变化、指纹图谱等有关研究[4-8]，但到目前为止，缺乏对垫丹皮质量影响因素的综合研究。本文探讨了垫丹皮栽培品种、生长土壤类型、采收时间对牡丹乙醇浸出物、丹皮酚、芍药苷含量的影响，以期对垫丹皮的质量影响因素进行较为综合的分析。

1 仪器、试剂与材料

岛津LC-20AT高效液相色谱仪(含LCsoLution色谱处理软件、CTO-20A柱温箱、SIL-20A自动进样器、SPD-M20A二极管阵列检测器、CBM-20ALite系统控制器)；sartorius CPA225D型电子天平、METTLER AL104型电子天平、MoLecuLar标准智能型纯水机、KQ3200DE型数控超声波清洗器。DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱、HHS11-4型电子恒温水浴锅。

乙醇(95%分析纯)：重庆川东化工(集团)有限公司，批号20120201；甲醇(色谱纯) ：成都科龙化工，批号20130115；水为临用现制的超纯水；丹皮酚、芍药苷对照品均购自中国食品药品检定研究院(批号分别为110708-200506、110736-201136)。

牡丹试验材料取自重庆垫江县明月山丹皮GAP基地，该基地远离公路和工厂，灌溉水来自雨水。所有试验材料经本所邓才富副研究员鉴定为PaeoniasuffruticosaAndr.的根皮。采挖牡丹根部后，除去细根和泥沙，剥取根皮，除去木心，晒干，粉碎后待测。

2 方法与结果

2.1 乙醇浸出物含量测定

取丹皮样品2～4g，精密称定，置于100～250mL锥形瓶中，精密加水50～100mL，密塞。按《中国药典》2010版一部附录ⅩA项下热浸法测定，用乙醇作溶剂。以干燥品计算丹皮样品中醇溶性浸出物的含量(%)。

2.2 丹皮酚、芍药苷含量测定

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取丹皮酚对照品、芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含丹皮酚256.10μg、芍药苷49.84μg的混合溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液制备 取丹皮粉末0.25g，精密称定，置于250mL具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率150W，频率40kHz)30min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀后过滤，取续滤液用0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.2.3 色谱条件 Shim-pack VP-ODS色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相A为甲醇、B为水，梯度洗脱条件见表1，流速为1.0mL/min，柱温为40℃，检测波长丹皮酚为274nm、芍药苷为230nm，进样量为10μL，记录30min内色谱图。

表1 HPLC梯度洗脱条件 (%)

2.2.4 方法学考察 分别进行精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收试验，结果均符合HPLC分析方法的要求。

(1)精密度试验。精密吸取同一对照品溶液10μL，重复进样6次，采集各色谱图并积分，计算峰面积RSD(%)，结果表明丹皮酚峰面积RSD为0.18%、芍药苷峰面积RSD为0.65%，仪器精密度良好。

(2)稳定性试验。精密吸取同一供试品溶液10μL，分别于0、12、24、36、48h进样，采集各色谱图并积分，计算峰面积RSD(%)，结果表明丹皮酚峰面积RSD为0.23%、芍药苷峰面积RSD为1.26%，样品供试液在48h内稳定性良好。

(3)重复性试验。取同一丹皮样品粉末6份，每份0.25g，精密称定，按照“2.2.2”项下方法制备，各取10μL进样，采集各色谱图并积分，计算含量RSD(%)，结果表明丹皮酚含量RSD为2.91%、芍药苷含量RSD为2.64%，样品制备方法重现性良好。

(4)加样回收试验。取已知丹皮酚和芍药苷含量的同一丹皮样品粉末6份，各0.25g，精密称定，分别精密加入混合对照品溶液(丹皮酚0.503 6mg·mL-1、芍药苷0.387 7mg·mL-1) 5.0mL，加入70%甲醇45mL，按照“2.2.2”项下方法制备，各取10μL进样，采集色谱图并积分，计算丹皮酚、芍药苷含量及其回收率(%)。结果表明丹皮酚平均回收率为95.72%，RSD为1.05% ；芍药苷平均回收率为98.42%，RSD为1.37 % 。

2.3 垫江牡丹质量影响因素分析

2.3.1 不同垫丹皮栽培品种质量分析 垫丹皮主要有三个栽培品种，分别是红花单瓣、红花重瓣、白花单瓣。在秋季同时采收种植于同一地块的三个品种样品，处理完毕后分别测定乙醇浸出物含量、丹皮酚含量、芍药苷含量。实验结果见图1。

图1 不同品种丹皮质量指标

从图1可以看出，白花单瓣的乙醇浸出物含量、芍药苷含量在三种品种中最高，且其丹皮酚含量也较高。以乙醇浸出物含量、芍药苷含量、丹皮酚含量为指标进行综合评价，白花单瓣优于其他两个品种。红花重瓣中芍药苷含量、丹皮酚含量在三个品种中均最低。

2.3.2 不同生长土壤类型垫丹皮质量分析 以分别种植在石骨子土、大土泥、矿子黄泥中的红花重瓣丹皮为试验对象，考察不同生长土壤类型对丹皮内在质量的影响。同时采集样品后进行分析，试验结果见图2。

图2 不同生长土壤的丹皮质量指标

从图2可以看出，矿子黄泥中出产的丹皮乙醇浸出物含量和芍药苷含量均最高，但其丹皮酚含量却最低。石骨子土出产的丹皮乙醇浸出物和芍药苷含量在三个品种中最低。

2.3.3 不同采收期的垫丹皮质量分析 选定同一试验地和同一丹皮品种，于不同时间采收样品，进行浸出物和有效成分含量分析。实验结果见图3。

图3 不同采收时间的丹皮质量指标

为便于在同一个图表中观察采收时间对乙醇浸出物、丹皮酚、芍药苷含量的影响趋势，笔者将乙醇浸出物含量单位由百分含量改为每10g丹皮中乙醇浸出物的克数。从图3可以看出，随着采收时间的不同，乙醇浸出物含量和芍药苷含量变化趋势基本一致，呈现U形。而10月8日采收的样品丹皮酚含量最高。9月上旬采收的丹皮其乙醇浸出物、丹皮酚、芍药苷含量均较高，因此9月上旬采收可保证丹皮的用药质量，而垫丹皮的传统采收期也正是9月，因此9月采收垫丹皮暗合了科学道理。

3 讨论

所有垫江丹皮样品均符合《中国药典》2010版对丹皮的质量标准要求，即醇溶性浸出物含量均≥15.0%，丹皮酚含量均≥1.2%。

不同品种、生长土壤类型、采收时间均会影响垫江丹皮的质量。从试验结果可以看出，白花单瓣这一品种的乙醇浸出物、芍药苷含量在三个品种中最高，且其丹皮酚含量也较高。从质量评价来讲，白花单瓣是较优的品种。矿子黄泥中出产的丹皮乙醇浸出物含量和芍药苷含量均最高，但是其丹皮酚含量却最低。9月初采收的丹皮乙醇浸出物、丹皮酚、芍药苷含量均较高。因此，9月初采收丹皮可以保证丹皮的用药质量，生产活动中于9月采收垫丹皮具有一定的科学道理。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京:化学工业出版社,2010:160-161.

[2] 姜潇.牡丹皮药理作用的研究进展[J].中国新医药,2004,3(8):110.

[3] 垫江县医药管理局.垫江县医药志[M].1985:44-45.

[4] 范俊安,于超,王继生,等.重庆垫江牡丹皮丹皮酚含量动态变化研究[J].中国药房,2006,17(5):394-396.

[5] 范俊安,夏永鹏,邱宗荫,等.重庆垫江牡丹HPLC指纹图谱研究(Ⅰ)—不同因素的影响及牡丹皮最适宜种植条件选择[J].中国药房,2009,20(21):1667-1770.

[6] 张艳,范俊安,夏永鹏,等.重庆垫江牡丹HPLC指纹图谱研究(Ⅱ)—原丹皮指纹图谱[J].中国药房,2009,20(33):2602-2605.

[7] 张艳,范俊安,夏永鹏,等.重庆垫江牡丹HPLC指纹图谱研究(Ⅲ)—刮丹皮指纹图谱[J].中国药房,2010,21(21):238-241.

[8] 范俊安,张艳,夏永鹏,等.重庆垫江牡丹HPLC指纹图谱研究(Ⅳ)—不同部位的比较及其鉴别意义[J].中国药房,2010,21(23):2157-2159.

(责任编辑：尹晨茹)

2014-09-15

重庆市卫生计生委中医药科技项目(渝卫中医药2011-1-12)

章文伟(1976-)，男，重庆市药物种植研究所副研究员，研究方向为渝产道地药材质量分析与评价。

邓才富(1971-)，男，重庆市药物种植研究所副研究员，研究方向为生态环境与药材质量评价。

R284.1

A

1673-2197(2015)02-0013-03

10.11954/ytctyy.201502006