高效液相色谱法测定人参不同部位人参皂苷Rg1、Re及Rb1的含量

付 聪(武汉市中医医院，湖北 武汉430014)



高效液相色谱法测定人参不同部位人参皂苷Rg1、Re及Rb1的含量

付 聪
(武汉市中医医院，湖北 武汉430014)

目的：探讨人参皂苷Rg1、Re、Rb1在人参药材中主根、芦头、参须的富集情况，以确保人参中以上3种人参皂苷资源被充分利用，为开发人参各部位的临床应用提供科学依据。方法：采用高效液相色谱法测定产自于吉林通化的生晒参各部位中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的含量。色谱条件为：安捷伦1200 系列高效液相色谱仪；安捷伦ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)；柱温25℃；检测波长为203nm；流速为0.7mL· min-1，乙腈-水梯度洗脱。结果：人参参须含有较高的人参皂苷Re(0.745 1%)、Rb1(0.859 6%)；而人参芦头含有较高的人参皂苷Rg1(0.415 8%)。结论：针对性地提取人参参须、芦头中的人参皂苷Rg1、Re和Rb1单体，应能提高单体化合物的提取效率，更好地服务于创新药物的开发。

人参；主根；参须；芦头；人参皂苷；高效液相色谱法

人参药材为五加科植物人参(PanaxginsengC.A. Mey.)的干燥根和根茎，主要生长于东北亚寒冷地区，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津养血、安神益智的功效[1]。人参药材中主要含有人参皂苷和人参多糖，还含有挥发性成分、有机酸及其酯、蛋白质、酶类、甾醇及其苷类、多肽类、含氮化合物、木质素、黄酮类、维生素、无机元素等[2]。本研究采用高效液相法测定采自吉林通化人参根、参须、芦头中3种单体皂苷Rg1、Re和Rb1的含量,以期为合理利用人参各部位人参皂苷提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

安捷伦1200系列高效液相色谱仪；系统：安捷伦 ChemStation化学工作站；色谱柱：安捷伦ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)。

1.2 药品与试剂

标准品：人参皂苷Rg1(批号：110703-201128，含量以93.4%计)、人参皂苷Re(批号：110754-201324，含量以92.7%计)、人参皂苷Rb1(批号：110704-201223，含量以95.9%计)，均由中国食品药品检定研究院提供。供试品：人参(批号：130101，产地：通化，吉林康美药业)，经湖北中医药大学吴和珍教授鉴定为五加科植物人参(PanaxginsengC.A. Mey.)，且符合《中华人民共和国药典》2010版规定[1]。试剂：美国TEDIA牌色谱级乙腈，水为双蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 色谱条件

流动相为乙腈-水二元洗脱系统，采用梯度洗脱方式[1]，安捷伦 ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)，柱温25℃，检测波长为203mm，流速为0.7mL·min-1。洗脱程序见表1[3]。在上述色谱条件下，人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的分离度大于1.5；理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算不低于6 000[1]。

表1 流动相洗脱程序

2.2 对照品溶液的制备

取人参皂苷Rg1、Re和Rb1标准品适量，置于5mL容量瓶中，精密称定，加甲醇溶液溶解并稀释至刻度线，制成浓度分别为0.311、0.381和0.451mg·mL-1的混合溶液，作为标准品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

将人参主根、芦头和参须分离，分别粉碎，过四号筛，得到粉末，各取约1g，精密称定，用滤纸包好，置于索氏提取器中， 适量CHCl3加热回流3min，弃去CHCl3部分，药渣挥干，连同滤纸包转移至100mL具塞锥形瓶中，精密加入水饱和n-Butanol溶液 50mL，密塞，放置过夜，超声处理(功率250W，频率50kHz)30min，滤过，弃去初滤液，用移液管移取续滤液25mL，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得[1]。

2.4 线性关系考察

精密吸取“2.2”项下对照品溶液0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mL，均稀释至1mL，和原液分别注入10μL至液相色谱仪中，按照表1中色谱条件测定峰面积，取3次平均值。

以对照品进样量(μg)为横坐标，峰面积(mAu·min)为纵坐标，进行线性回归，标准曲线见图1、图2、图3，得回归方程为人参皂苷Rg1 :Y=477.1X+31.537，r=0.999 8；人参皂苷Re:Y=411.22X+32.236，r=0.9998；人参皂苷Rb1:Y=350.53X+41.183，r=0.999 8。

结果表明：人参皂苷Rg1进样量在0.311 ～3.11μg、人参皂苷Re进样量在0.381～3.81μg、人参皂苷Rb1进样量在0.451～4.51μg范围内与其峰面积(mAu·min)均呈良好的线性关系。

图1 人参皂苷Rg1对照品标准曲线

图2 人参皂苷Re对照品标准曲线

图3 人参皂苷Rb1对照品标准曲线

2.5 人参皂苷Rg1、Re和Rb1的含量测定

分别取不同部位下的人参粉末(过四号筛)1g，精密称定，按“2.3”项下制成供试品溶液，各进样10μL，计算含量，结果详见表2。

表2 人参不同部位中人参皂苷含量比较

3 讨论

本实验研究了传统使用人参药材中不同部位3种人参皂苷的含量，结果表明：人参参须含有较高的人参皂苷Re(0.7451%)、Rb1(0.8596%)，是由于其皮部所占比例较大[4]；而人参芦头亦含有较高的人参皂苷Rg1(0.4158%)。人参皂苷Rg1、Re和Rb1均具有益智、抗衰老和抗疲劳功效，人参皂苷Rg1、Re还具有防治心脑血管疾病的作用。如果能针对性地提取人参参须、芦头中的人参皂苷Rg1、Re和Rb1单体，应能提高单体化合物的提取效率，更好地服务于老年病创新药物的开发[5-6]。

在传统中医治疗中，人参作为大补元气、安神益智药，可调节人体免疫力和中枢神经系统；现代临床应用也很广泛，在改善心肌缺血、缺氧和抗疲劳方面均具有确切的医疗价值[7-9]。现代研究也表明，补气药的药效成分与皂苷类和多糖类物质相关[10]。此外，近期也有研究报道，人参皂苷具有预防和抗肿瘤的功效，可见，人参皂苷开发前期广阔，本研究为进一步开发人参各部位的临床应用提供了科学依据。

[1] 国家药典委员会.中国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010：8.

[2] 黎阳，张铁军，刘素香，等.人参化学成分和药理研究进展[J].中草药，2009(1)：164.

[3] 付聪, 杨艳芳, 王业静.药典法和新方法测定人参皂苷含量比较[J]. 亚太传统医药, 2013, 9(11):25-27.

[4] 张崇禧, 鲍建才, 李向高, 等. HPLC法测定人参、西洋参和三七不同部位中人参皂苷的含量[J]. 药物分析杂质, 2005, 25(10):1190-1194.

[5] 胡圣望, 胡勇, 胡旺平, 等. 人参皂苷Rg1对慢性应激大鼠空间学习记忆能力的影响[J]. 四川中医, 2004, 22(3):14-16.

[6] 李朋，刘正湘.人参皂苷Rb1对急性心肌梗死大鼠心室重构的影响[J].实用心脑肺血管病杂志，2006，14 (2):118-121.

[7] 张志军, 江文, 万群. 人参皂苷Rg1扩张兔基底动脉作用及其机制[J]. 心脏杂志, 2003, 15(4):313-315.

[8] STAVRO P M, HANA A K, VUKSAN V. The effect of korean red ginseng extracts with escalating levels of ginsenoside Rg3 on blood pressure in individuals with high normal blood pressure or hypertension[J]. American Journal of Hypertension, 2002, 15(S3).

[9] 金建生，赵朝晖，陈晓春，等.人参皂苷Rg1抗衰老作用可能与改变p16、cyclinD、CDK4的表达有关[J].中国临床药理学与治疗学， 2004，9(1)：29-34.

[10] 张永宁， 袁丽超， 张旭， 等. 常用补气药中多糖和皂苷对免疫干预作用的研究进展[J]. 上海中医药杂志, 2011, 45(8):78-81.

(责任编辑：宋勇刚)

HPLC Determination of the Amount of Ginsenosides in Different Part ofPanaxginseng

Fu Cong
(Wuhan Hospital of Traditional Chinese Medicine, Wuhan 430014, China)

Objective:In the interest of discussing different enrichments of ginsenoside Rg1, Re and Rb1 in root, rhizoma and fibrous roots of ginseng, to insure resource of ginsenosides utilized sufficiently and offer scientific basis for expanding clinical application with various parts of ginseng. Methods:Contents of three different ginsenosides were determined by HPLC. Agilent 1200 Serious HPLC instrument with the condition of Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)chromatographic column with water-acetonitrile as mobile phase of grades; 25℃ as temperature; 203 nm as detection wavelength; 0.7 mL·min-1as velocity of flow. Results:Content of ginsenoside Re and Rb1 are upper in fibrous roots (Re 0.745 1% and Rb1 0.859 6%) of ginseng; Content of Ginsenoside Rg1 is upper in rhizoma (Rg1 0.415 8%). Conclusion:Extracting Ginsenoside Rg1, Re and Rb1 in fibrous roots and rhizoma respectively should be able to improve the extraction efficiency and provide better service to development of the innovative medicines.

PanaxginsengC.A. Mey.; Root; Fibrous Roots; Rhizoma; Ginsenoside; HPLC

2015-01-20

付聪(1988-)，男，湖北省武汉市中医医院药师，研究方向为中药质量控制。

R284.2

A

1673-2197(2015)11-0032-02

10.11954/ytctyy.201511013