藏药材止泻木子质量标准研究

孙绪丁，权富家，任松鹏，赵延霞

(1.山东阿如拉药物研究开发有限公司，山东 济南 250101；2.金诃藏药股份有限公司，青海 西宁 810003)



藏药材止泻木子质量标准研究

孙绪丁1，权富家2，任松鹏1，赵延霞1

(1.山东阿如拉药物研究开发有限公司，山东 济南 250101；2.金诃藏药股份有限公司，青海 西宁 810003)

目的：研究制定藏药材止泻木子的质量标准。方法：采用薄层色谱(TLC)法定性鉴别止泻木子；采用高效液相色谱(HPLC)法测定锥丝碱含量，采用Waters C18柱(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，柱温为25℃，甲醇-0.005mol/L庚烷磺酸钠(65∶35，V/V)，流速为1.0mL/min，检测波长为215nm。结果：TLC方法专属性强，特征斑点清晰；HPLC法测定大黄中锥丝碱含量的线性范围为0.116～1.160mg/mL(r=0.999 4，n=5)，平均加样回收率为97.43%，RSD为1.11%(n=6)。结论：建立藏药材止泻木子的定性、定量分析方法简便易行，重现性好，准确度高，可有效控制药材质量。

止泻木子；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准

近年来，随着藏药制剂的推广，止泻木子用量逐年增大，现阶段质量标准难以满足药材质量控制要求，给临床安全用药带来隐患。止泻木子为夹竹桃科植物止泻木(HolarrhenaantidysentericaWall.ex A.DC.)的干燥种子，果期采集果实，取种子晒干。止泻木子具有清热、利胆、止泻的作用，用于治疗赤巴病、肝胆病、胃肠热病、腹泻、痢疾等疾病，用于十味黑冰片丸、十三味榜嘎散、复方酸藤消痔胶囊等多个藏药制剂，应用较为广泛。藏药部颁标准中WS3-BC-0014-95号，无任何质量控制内容，不足以控制止泻木子的质量，且文献未发现任何有关止泻木子的质量控制方法。本研究建立薄层色谱鉴别和液相含量测定方法，稳定性、重复性较好，且方法简便易行，专属性强，精密度、回收率较高，为止泻木子质量标准的建立提供参考。现具体报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

L-2100型日立高效液相色谱仪(包括日立L-2100泵，日立L-2400紫外检测器)；色谱柱：Waters C18柱(250mm×4.6mm，5μm)。

岛津AUW220D电子天平，KQ-300B超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药

止泻木子对照药材(批号：20110501)、锥丝碱对照品(批号：00003711-048)；止泻木子(金诃藏药股份有限公司提供，批号分别：20120101、20120102、20120103)；薄层硅胶G板(青岛海洋化工分厂)。

甲醇为色谱纯，超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

取本品2g，加1%盐酸50mL，超声处理1h，过滤，滤液加氨水调节pH至9～10，用二氯甲烷萃取滤液3次，每次20mL，合并萃取液，蒸干(40℃以下)，加甲醇2mL溶解，过滤，取续滤液作为供试品溶液。取止泻木子对照药材2g，同法制备对照品溶液，取锥丝碱对照品适量，加甲醇制备0.1mg/mL锥丝碱对照品溶液。按薄层色谱法实验，吸取上述溶液各5μL，分别点于硅胶G薄层板，以甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(6.5∶2.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，加热至显色清晰。在与对照品相应位置上，供试品色谱显相同的荧光斑点。

图1 TLC鉴别色谱

注：1.对照品溶液；2.对照药材溶液；3～5.三批供试品溶液，批号分别为20120101、20120102、20120103

2.2 HPLC法测定含量

2.2.1 波长选择 取锥丝碱对照品溶液，于190～400nm波长范围内进行扫描，发现样品为末端紫外吸收，可选择205～220nm为检测波长。同时，考虑流动相为甲醇，其截至波长为205nm，由于样品吸收峰不能过小，选定215nm为检测波长。

2.2.2 色谱条件 色谱柱：Waters C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-0.005mol/L庚烷磺酸钠(65∶35)，检测波长为215nm，柱温为25℃，流速为1.0mL/min，进样量为10μL。

2.2.3 对照品溶液制备 取锥丝碱对照品适量，精密称量，加甲醇制备0.1mg/mL锥丝碱对照品溶液。

2.2.4 供试品溶液制备 取本品粉末1g，精密称量，置具塞锥形瓶，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率为120W，频率为40kHz)30min，放冷，再称定重量，加甲醇补充减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.5 系统适用性试验与阴性干扰试验 在“2.2.2”项色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中锥丝碱峰与其相邻色谱峰分离度均大于1.5，可用于止泻木子含量的测定。见图2。

图2 HPLC色谱

2.2.6 线性关系考察 精密量取锥丝碱对照品贮备液溶液(锥丝碱含量为1.16mg/mL)1.0、3.0、5.0、8.0、10.0mL，分别置10mL容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀，精密进样10μL。以峰面积(A)对溶液浓度(C)进行线性回归，得回归方程：Y= 308.2X- 8.136，R=0.999 4。结果表明：锥丝碱在0.116～1.160mg/mL范围内，色谱峰峰面积(A)与对照品浓度(C)线性关系良好。

2.2.7 精密度试验 精密吸取锥丝碱对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD%=0.152%(n=6)。结果表明，仪器精密度良好。

2.2.8 稳定性试验 精密吸取供试品溶液10μL，分别于0、4、8、12、24h注入液相色谱仪，记录峰面积并计算峰面积相对标准偏差，RSD%=0.189%(n=5)。结果表明，供试品溶液中锥丝碱在24h内测定结果稳定。

2.2.9 重复性试验 取同一批止泻木子样品(批号：20120101)6份，制备供试品溶液，精密吸取10μL，注入液相色谱仪进行测定，计算得出样品中锥丝碱含量为0.46%，相对标准偏差RSD%=0.579%(n=6)。结果表明，该分析方法重复性良好。

2.2.10 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批样品(批号：20120101，含量为0.46%)0.5g，共6份，分别置于具塞锥形瓶中，均精密加入25mL锥丝碱对照品溶液(含量为1.16mg/mL)和甲醇25mL，按“2.2.4”项方法制备供试品溶液，按“2.2.2”项色谱条件进行测定，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定，以外标法方程计算含量，并计算回收率。结果显示：供试品中锥丝碱平均加样回收率为97.43%，RSD为1.11%(n=6)，该方法测定结果准确。

2.2.11 样品含量测定 按“2.2.4”项所述方法制备的三批供试品溶液(批号分别为20120101、20120102、20120103，每批3份)。按“2.2.2”项色谱条件进行含量测定，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，根据外标法方程分别计算供试品中锥丝碱的含量。见表1。

表1 止泻木子含量测定结果 (n=3)

3 讨论

随着藏药材止泻木子相关制剂十味黑冰片丸、十三味榜嘎散、复方酸藤消痔胶囊的普及，其临床用量越来越大。但目前尚无质量控制相关研究，制剂使用存在一定的安全隐患，本文通过鉴别止泻木子中生物碱及测定锥丝碱含量建立其质量控制标准。

本研究，除上述展开剂外，也可选择正己烷-乙酸乙酯-甲醇-二乙胺(10∶8∶2∶1)进行展开，效果相当。测定锥丝碱含量研究中，使用简单流动相如甲醇-水、乙腈-水或简单盐类均不能较好地分离止泻木子中锥丝碱，研究发现离子流动相对后续效果改善明显，除庚烷磺酸钠洗脱外，使用0.1%三氟乙酸也可达到良好的分析效果。

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(责任编辑：李岚春)

2014-12-28

济南市科技局“基于神经功能重建型中风后遗症中药新药的研发”(2013019)

孙绪丁(1987-)，男，山东阿如拉药物研究开发有限公司经理，研究方向为药品分析。

R258

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1673-2197(2015)08-0020-02

10.11954/ytctyy.201508010